保护氨基酸Fmoc-His(Trt)-OH的合成方法优化

在肽合成中,为了得到理想的目的肽,首先需要对氨基酸的活性基团加以封闭或保护。叔丁氧羰基(Boc)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)是固相合成中首选的-αNH2保护基,由此形成了多肽固相合成方法中的两大类:Boc方法和Fmoc方法。组氨酸(His)是多肽合成中问题最大的氨基酸之一,需要对其α-氨基及侧链上的咪唑环加以保护。由于Fmoc保护基的一些独特优点,如对碱的不稳定性、易检测性等,因此,我们选择Fmoc为其-αNH2保护基。在Fmoc策略合成过程中,三苯甲基(Trt)对缩合以及脱保护条件都很稳定,它可被稀乙酸在稍高的温度条件下,或TFA在室温脱除,因而选用Trt封闭咪唑环上的活性官能团。实验通过中心曲面实验设计方法和正交实验设计方法对His的两步保护反应条件进行优化,使得最终两步反应收率分别都达到80%以上,产品纯度达到95%以上。     

牛乳κ-酪蛋白活性多肽及其改造肽的合成和生物活性

为获得抗凝血活性更强的多肽,对牛乳κ-酪蛋白(κ-CN)的十一肽(f106-116)进行设计合成并改造,采用Fmoc固相合成策略,以Wang树脂为载体,Fmoc保护氨基酸为原料,HOBT/DIC为缩合剂,TFA/苯甲硫醚/EDT/苯甲醚裂解体系脱除保护基,经RP-HPLC纯化后得到了纯度95%的9种多肽,经ESI-MS确证其结构。将所有的合成肽进行凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)以及凝血酶原时间(PT)活性测定,结果表明,各改造肽抗凝活性皆低于十一肽,增强牛乳κ-CN的十一肽片段的疏水性,其TT活性增强。     

复合肥料中多肽含量的测定方法研究

提出了测定复合肥料中多肽含量的方法。采用氨基酸分析法中的离子交换色谱法测定复合肥料中总氨基酸及游离氨基酸的含量,总氨基酸含量与游离氨基酸含量的差值即为多肽含量。结果表明：尿基复合肥中多肽含量的测定值与理论值的相对偏差为6.8%～13.6%,且随着多肽含量的提高,相对偏差减小;硝基复合肥中多肽含量的测定值与理论值的相对偏差为6.8%～17.6%,相对偏差较大是因蛋氨酸、胱氨酸含量的测定值不稳定造成的,但对测定结果影响较小。离子交换色谱法具有较高的稳定性和可靠性,能够准确测定复合肥料中多肽的含量。     

生长抑素类似物TT-232的合成

采用多肽固相合成法,以Rink Amide树脂为载体、Fmoc保护的氨基酸为原料、DIC/HOBt为缩合体系,按照生长抑素类似物TT-232的氨基酸序列从C端向N端顺次偶联,肽树脂裂解得到还原型TT-232粗品,环化后再经制备型RP-HPLC纯化,得到纯度为98%的TT-232。     

酰基苯肼型保险拉手树脂的合成及在多肽对硝基苯胺发色底物合成中的应用

针对液相合成对羧基苯胺发色底物的不足,采用Boc-对羧基苯肼和MBHA树脂为原料合成了具有保险拉手型连接臂结构的树脂,对保护基形式及树脂载体类型的选择进行了探讨.基于该型树脂采用微波辅助的Fmoc/Boc混合策略在树脂上合成了5个用于丝氨酸蛋白酶活性实验的多肽中间体,经温和的N-溴代琥珀酰亚胺/吡啶条件氧化连接臂后,与对硝基苯胺(pNA)发生氨解反应,以较高的收率和纯度得到5个丝氨酸蛋白酶发色底物.中间体及产物经过高分辨质谱和核磁共振氢谱确定了结构.     

肝癌细胞转铁蛋白受体靶向多肽类似物BP9a的合成

以2-CTC树脂为载体、Fmoc-氨基酸为原料,采用Fmoc/t Bu固相多肽合成法得到肝癌细胞转铁蛋白受体靶向多肽BP9N末端连接半胱氨酸的类似物BP9a,实现其作为靶向载体与抗肿瘤药物分子进行化学偶联的功能。BP9a粗品经反相半制备高效液相色谱仪(RP-HPLC)纯化后纯度达到98.42%,总收率为39.38%。     

固相合成胸腺五肽的研究进展

叙述了胸腺五肽TP5的药理、药代及毒副作用、市场状况和前景，分析了胸腺五肽各氨基酸的α－氨基保护基和侧链保护基的特点，并从固相载体、第一个氨基酸的连接、肽链延长等3个方面介绍了Merrifield法、Boc法、Fmoc法，3种方法合成胸腺五肽的过程。     

Fmoc保护氨基酸-卟啉化合物的设计合成与光谱性能研究

为了获得结构和性能更加接近天然卟啉的合成卟啉化合物,采用Fmoc保护氨基酸(甘氨酸、缬氨酸、L-酪氨酸),将氨基酸引入卟啉体系,设计合成了系列新型卟啉-氨基酸化合物,并对其光谱性能进行了研究。结果表明,在合成以酯键相连的卟啉-氨基酸化合物时,甘氨酸、缬氨酸反应生成含有2个氨基酸单元的化合物,L-酪氨酸生成含1个氨基酸单元的化合物。在合成以酰胺键相连的化合物时,反应得到含有1个氨基酸单元的化合物。卟啉的光谱性能不因不同Fmoc保护氨基酸单元的引入而改变。     

神经降压素的固相合成工艺研究

神经降压素是由13个氨基酸残基组成的生物活性多肽,具有多重生理功能,且高活性、作用快速,可作为潜在的安定药、镇痛药和降压药等,具有广阔的应用前景。本研究主要进行了神经降压素固相合成的工艺研究。以Fmoc保护的氨基酸为原料,Wang树脂为载体,按照神经降压素的氨基酸序列,从C端向N端进行合成。考察了缩合试剂、脱保护试剂、脱出树脂等条件对合成效果的影响,确定了合成工艺:以二氯甲烷(DCM)为反应溶剂,O-苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)/1-羟基苯并三氮唑(HOBT)/N,N-二异丙基乙胺(DIEA)为缩合体系,采用(三氟乙酸(TFA)/H2O/甲基苯基硫醚(thioanisole)/Phenol/乙二硫醇(EDT)体系,体积比为82∶5∶5∶6∶2的下树脂条件,2倍过量保护氨基酸进行缩合反应,反应时间为3h。反应结果使神经降压素粗品的收率达61.8%,纯度达46%。     

阿尔茨海默β-淀粉样肽核心片段衍生物的合成

由苯丙氨酸(F)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)和赖氨酸(K)组成的KLVFF五肽序列是阿尔茨海默β-淀粉样肽自聚集形成纳米纤维化结构的核心片段,合成该肽段及对其分子侧链和主链结构进行修饰对研究阿尔茨海默病发病机制具有重要意义。以Fmoc-保护基缬氨酸(Fmoc V-OH)和Fmoc-保护基苯丙氨酸(Fmoc F-OH)为原料,N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)和二环己基碳二亚胺(DCC)为缩合剂,采用液相合成法合成了Fmoc基保护的二肽、三肽模块Fmoc FF-OH和Fmoc VLK(Boc)-OH,模块在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中与哌啶反应脱保护基后得到二肽、三肽NH2-FF-OH和NH2-VLK(Boc)-OH。Fmoc基保护的模块再与二肽、三肽组合、缩合及脱保护反应后,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化得到骨架中赖氨酸(K)的侧基由Boc保护的阿尔茨海默β-淀粉样肽核心片段肽H2N-VLK(Boc)FF-OH及H2N-FFVLK(Boc)-OH,并对目标五肽进行了核磁和质谱表征。     

环七肽PT-141的固相合成工艺研究

PT-141可有望作为治疗性功能障碍的环七肽药物。本文研究了固相合成法合成PT-141的路线及工艺,氨基酸的α-氨基采用9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护,以HBTU/HOBT/NMM为肽合成试剂,用高压制备液相色谱对粗品进行纯化,用质谱仪对合成的多肽进行结构鉴定。多肽合成的收率可达58%,纯化后可得纯度为98%的目标环七肽。与文献方法相比,该法简便、环境友好,并大幅降低了合成成本,适合产业化生产。     

胸腺素α1的Fmoc固相合成法

本文用Fmoc固相方法合成了胸腺素α1。采用对碱敏感的Fmoc作为α -氨基的保护基 ,并确定与之配套的侧链保护策略。探索出了适宜的接肽方案 ,即前 9步接肽用对称酸酐法 ,后 1 8步用DCC -HOBt缩合法 ,从而保证了每步的高缩合率。试验结果表明各步的缩合率均在 96 2 %以上 ,多数达 99%以上。同时还对合成工艺条件进行了研究。合成粗品的纯度 (胸腺素α1的含量 )为 46 52 % (质量分数 ) ,胸腺素收率为 37 81 %     

应用AQC柱前衍生荧光检测脑蛋白水解液中的氨基酸

目的 利用AQC柱前衍生荧光对脑蛋白水解液中游离氨基酸进行检测。方法 以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试剂,利用高压液相色谱荧光检测器系统考察氨基酸衍生和液相分离过程中的各种影响因素,检测脑蛋白水解液中各种游离氨基酸含量。结果 确定氨基酸的浓度在250μmol/L最为合适,准确的测定脑蛋白水解液中氨基酸的种类及含量。结论 采用荧光检测器可以准确地测定蛋白质中氨基酸组成及含量。     

多肽合成中氨基酸活化酯的制备研究

氨基酸活化反应对合成多肽的产率及纯度具有重要影响。以芴甲氧羰基-缬氨酸为研究对象,首次采用反相高效液相色谱法检测活化反应过程,建立了芴甲氧羰基-缬氨酸活化酯的分析方法,优化了氨基酸活化酯的制备条件,并引入了新的用于Fmoc策略合成多肽的溶剂体系——四氢呋喃。结果表明:溶剂和活化试剂对活化酯的产率影响显著;活化酯制备的最佳反应条件为n(Fmoc-Val-OH)∶n(HOBt)∶n(DCC)=1∶1∶1.2,溶剂为THF,反应温度为25℃。     

西仑吉肽的固相合成

采用Fmoc固相合成法,选用2-氯三苯甲基氯树脂作为固相载,HBTU/HOBt和HATU/HOBt为缩合剂,合成全保护线性肽.以V(DCM)∶V(THF)＝ 1∶1为溶剂,HATU/HOBt为缩合剂,合成全保护环肽.最后脱除保护基得终产物西仑吉肽.     

固相合成胸腺素α_1

胸腺素α1是由28个氨基酸残基组成,N端乙酰化的生物活性多肽。采用固相合成方法,以Fmoc氨基酸为原料,经1 氧 3 双二甲胺羧基苯骈三氮唑四氟化硼盐/1 羧基苯并三氮唑(HBTU/HOBt)缩合,三氟乙酸 乙二硫醇 水脱保护,并从Wang树脂上切割下来,粗肽得率为60%,经RP HPLC纯化,获得纯度在98%以上的目标肽。其ESI MS和氨基酸组分分析结果与理论值相符。     

内吗啡肽-2的合成

采用多肽固相合成法,以Rink Amide树脂为载体,Fmoc保护氨基酸为原料,以DIC/HOBt为缩合体系,按照内吗啡肽-2的肽序列,从C端向N端偶联,肽树脂经三氟乙酸裂解,得到内吗啡肽-2粗品,纯度为98.5%,再经制备型反相高效液相色谱法纯化和转盐,得到醋酸内吗啡肽-2纯品,纯度>99.0%,收率为80%。     

内吗啡肽-2的合成

采用多肽固相合成法,以Rink Amide树脂为载体,Fmoc保护氨基酸为原料,以DIC/HOBt为缩合体系,按照内吗啡肽-2的肽序列,从C端向N端偶联,肽树脂经三氟乙酸裂解,得到内吗啡肽-2粗品,纯度为98.5%,再经制备型反相高效液相色谱法纯化和转盐,得到醋酸内吗啡肽-2纯品,纯度99.0%,收率为80%。     

扶素康的固相化学合成

研究了36肽扶素康的9-芴甲氧羰基(Fmoc)法固相化学合成,包括Fmoc固相逐步化学合成和Fmoc固相片断缩合化学合成。在片段缩合中,研究了多肽片断的分段策略、片断缩合溶剂、片断缩合剂对片断缩合法合成扶素康质量的影响,确立了优化的片段缩合工艺条件为：将扶素康按残基1～10、11～20、21～25、26～36分作4段;以王树脂为固相载体;HATU /HOAt/DIEA为缩合剂(4倍过量);DMF/DCM(1∶1)为反应溶剂;每步加入的全保护肽段为1.5倍过量;缩合及脱保护完成后以DCM为洗涤溶剂洗涤5次,进行固相片段缩合反应。该条件下合成的扶素康,粗品收率达67.31%,按标准曲线定量分析其纯度达38.75%。     

胸腺五肽的固相合成

采用哌啶脱Fmoc法固相合成胸腺五肽,通过采用Fmoc保护的Wang树脂,利用紫外-可见光分光光度法测量树脂上裸露氨基的含量,从而定量监测脱保护反应发生的程度以及树脂的取代率。目标产物经高效液相和质谱表征分析,该胸腺五肽产物产率为88.67%,纯度为98.54%。该研究采用的哌啶脱Fmoc法固相合成胸腺五肽取代率较高,且回收率也较高,可应用于工业批量生产。