ET-1对高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的作用

目的：观察内皮素-1（ET-1）对高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的作用。方法将高血压大鼠和正常血压大鼠按加入 ET-1浓度的不同各分为6组：10％胎牛血清（对照组）;10％胎牛血清＋20μmol·L－1 ET-1（20μmol·L－1组）;10％胎牛血清＋40μmol·L－1 ET-1（40μmol·L－1组）;10％胎牛血清＋60μmol·L－1 ET-1（60μmol·L－1组）;10％胎牛血清＋80μmol·L－1 ET-1（80μmol·L－1组）及10％胎牛血清＋100μmol·L－1 ET-1（100μmol·L－1组）。使用细胞计数试剂盒计数各组细胞个数;采用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷（[3 H]-TdR）掺入法测定各组血管平滑肌细胞的 DNA 的合成量作为细胞增殖的指标。结果ET-1刺激高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞增生。高血压大鼠20、40、60、80及100μmol·L－1各组脑血管平滑肌细胞数量及 DNA 合成量较对照组均增加,以80 mol·L－1组细胞数量及 DNA 合成量增加最为明显（均 P ＜0．05）。正常血压鼠各组脑血管平滑肌细胞数量变化及 DNA 合成量增加不明显（P ＞0．05）。结论ET-1可明显促进高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖,提示 ET-1可能促进高血压诱发的脑血管重构。     

Ox-LDL对PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)对PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬的影响。方法 PMA诱导THP-1细胞24 h,使其分化为巨噬细胞,再分别用0、10、20、40或80 mg/L的Ox-LDL处理24 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blotting)分别检测Beclin-1以及LC3的mRNA及蛋白表达;细胞免疫荧光检测LC3在细胞内的含量;MDC染色检测自噬囊泡的形成。结果随着Ox-LDL浓度的增加,THP-1源性巨噬细胞Beclin-1 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);LC3 mRNA表达无明显改变(P>0.05),但蛋白水平LC3II/LC3I显著降低(P<0.001);免疫荧光结果表明随着Ox-LDL浓度的增加,LC3II含量降低,MDC染色结果显示自噬囊泡随着Ox-LDL浓度的增加而减少。结论 Ox-LDL抑制PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬。     

自噬与癌症

自噬是溶酶体降解途径之一,在众多真核生物细胞生理过程中发挥着重要作用。近年来,人们发现自噬对肿瘤的发生、发展过程同样具有显著的影响。自噬对肿瘤的影响具有两面性:一方面,自噬能够避免细胞遭受氧化胁迫、持续性炎症及DNA损伤的积累等,从而抑制癌症的发生;另一方面,自噬又为肿瘤细胞提供生长所需的代谢中间产物,维持肿瘤细胞内环境的稳定,进而促进肿瘤的发展。因此,自噬在肿瘤的治疗过程中同样具有正、反两方面的影响,诱导自噬:一方面能够减少放射治疗及化学治疗引起的细胞DNA损伤和染色体突变的积累,从而防止肿瘤的加剧;另一方面,肿瘤细胞又能够依赖自噬来缓解药物和射线产生的压力,从而有利于自身的存活。     

金属离子对细胞自噬的诱导作用

自噬是真核生物普遍存在的重要生理过程,通过溶酶体降解错误折叠的蛋白质、异常的细胞器从而循环利用自身内含物。细胞自噬广泛参与多种病理和生理过程,是当前生物医学领域研究的热点之一。自噬的分子机制能够揭示自噬本质,不仅有利于理解自噬的生理意义,也有利于寻找新的药物靶点,为治疗疾病提供理论基础。金属离子能通过不同的信号通路诱导自噬,其研究对药物开发和疾病治疗具有重要的意义。主要从自噬的分子机制、金属离子的诱导作用两方面进行阐述。     

人类巨细胞病毒感染对血管平滑肌细胞脂代谢相关基因表达的影响

目的研究人类巨细胞病毒感染对体外培养血管平滑肌细胞脂代谢相关基因表达的影响,探讨该病毒致动脉粥样硬化(As)的机制。方法以1 MOI人类巨细胞病毒感染体外培养的血管平滑肌细胞,利用基因表达谱芯片技术检测细胞脂代谢相关基因的表达变化。结果人类巨细胞病毒感染血管平滑肌细胞后,细胞内与脂代谢有关的基因表达出现明显的异常,其中表达上调的基因主要有低密度脂蛋白受体相关蛋白10、11、12、极低密度脂蛋白受体、B型清道夫受体、HMG-CoA合成酶、HMG-CoA还原酶、酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶及脂肪酶合成酶等基因;表达下调的主要有载脂蛋白A1、载脂蛋白M和载脂蛋白H等基因。结论人类巨细胞病毒感染可能通过改变血管平滑肌细胞脂代谢相关基因的表达而参与As的发病过程。     

自噬与脂质代谢的研究新进展

自噬是细胞内分解、清除聚合大分子及老损细胞器的一系列重要的代谢过程。肝脏和脂肪组织是脂质代谢的主要部位。"噬脂"是除了胞浆脂肪酶途径外,脂肪分解的另一重要途径。脂质急需期、短期内脂质增加,肝脏自噬水平增强,长期高脂饮食和肥胖者,肝脏自噬水平减弱。同时,自噬干预脂肪细胞分化方向。调控自噬可作为治疗非酒精性脂肪性肝病、肥胖等慢性代谢性疾病的一个新靶点。     

肿瘤抑制基因 PTEN对人气道平滑肌细胞迁移和增殖的影响

目的：观察肿瘤抑制基因 PTEN 对人气道平滑肌细胞（HASMCs）迁移和增殖的影响机制。方法用重组PTEN 腺病毒转染体外培养的 HASMCs（Ad-PTEN 组）,并与携带绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒空载体（Ad-GFP组）和空白对照（MOCK）组对比,采用 MTS 测定细胞增殖、Transwell 法观察细胞迁移、共聚焦显微镜观测细胞骨架的变化、免疫印迹法检测 PTEN、p-Akt、Akt、p-FAK、FAK 蛋白的表达。结果Ad-PTEN 组的吸光度（A）值和每单位面积迁移的细胞数显著低于 Ad-GFP 及 MOCK 组（均 P ＜0．05）,Ad-GFP 和 MOCK 两对照组间差异无统计学意义（P ＞0．05）,提示过表达 PTEN 基因能抑制 HASMCs 的增殖和迁移的作用。Ad-PTEN 组细胞轮廓变细,伪足及应力纤维明显变少,而 Ad-GFP、MOCK 组细胞有少量短而细的应力纤维,很少丝状伪足形成。与 Ad-GFP 及 MOCK 组比较,Ad-PTEN 组 p-Akt 表达水平和 FAK 蛋白的磷酸化水平显著下调（均 P ＜0．05）,Ad-GFP及 MOCK 两对照组间差异无统计学意义（P ＞0．05）,说明过表达 PTEN 能下调 Akt 蛋白和 FAK 蛋白的磷酸化水平。结论过表达 PTEN 可能通过下调 p-Akt 及 p-FAK 的表达,抑制 HASMCs 的增殖和迁移,参与哮喘气道重塑的调控。     

丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞p27和cyclin E表达的影响

目的:研究丹参酮ⅡA对体外培养的兔血管平滑肌细胞(VSMC)p27蛋白、cyclin E表达和细胞周期的影响。方法:建立同型半胱氨酸(HCY)诱导的兔VSMC增殖模型,与0.25 mg·L-1、0.5 mg·L-1、1 mg·L-1丹参酮ⅡA共同培养48 h后,流式细胞术检测VSMC p27、cyclin E表达情况、分析细胞周期改变。结果:丹参酮ⅡA对HCY诱导增殖的兔VSMC有生长抑制作用,使VSMC阻滞于G1期;随丹参酮ⅡA剂量增加p27蛋白表达量明显增加;cyclin E表达量则显著减少。结论:丹参酮ⅡA促进HCY诱导的兔VSMC凋亡,其主要机制可能与上调p27蛋白、下调cyclin E表达所致的细胞周期抑制有关。     

化橘红中主要活性成分对豚鼠气管平滑肌细胞增殖的影响

目的初步观察化橘红中主要活性成分对豚鼠气管平滑肌细胞增殖的影响。方法通过原代培养豚鼠气管平滑肌细胞,采用MTT法观察化橘红中主要活性成分柚皮苷(Naringin)、橘皮内酯(Meranzin)和水合橘皮内酯(Meranzin hydrate)对细胞增殖的影响。结果柚皮苷(0.2~2.0 mg/mL)对豚鼠气管平滑肌细胞增殖有明显的促进作用(P<0.01),水合橘皮内酯(0.1~1.0 mg/mL)对豚鼠气管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01),橘皮内酯(0.05~0.5 mg/mL)对豚鼠气管平滑肌细胞的增殖作用不明显(P>0.05)。结论柚皮苷与水合橘皮内酯可能是化橘红主要药效活性成分。     

血管过氧化物酶1在Ang-Ⅱ诱导血管平滑肌细胞表型转化中的作用及机制

血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化在动脉粥样硬化等血管增生性疾病中起重要作用,但具体调节机制仍不明确。为探讨血管过氧化物酶1(VPO1)在血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导VSMCs表型转化中的作用及机制,予以Ang-Ⅱ培养VSMCs,结果发现Ang-Ⅱ升高VSMCs内VPO1的表达,伴随着SM22α、α-SMA表达下降和OPN、KLF4表达升高。VPO1基因沉默后可明显抑制Ang-Ⅱ诱导的SM22α、α-SMA表达下降和OPN、KLF4表达升高,同时抑制HOCl的生成。HOCl培养VSMCs使SM22α、α-SMA表达下降和OPN、KLF4表达升高。研究结果表明VPO1通过调节KLF4的表达在Ang-Ⅱ诱导VSMCs表型转化中起重要作用。     

原代肠系膜动脉平滑肌细胞的分离培养

取大鼠肠系膜动脉,用I型胶原酶消化,并进行体外培养,倒置相差显微镜观察ASMC生长状态及特点;免疫组织化学进行细胞鉴定。大鼠肠系膜平滑肌细胞呈典型"峰-谷"样生长,该原代培养细胞对平滑肌特异性肌动蛋白表达阳性。传代细胞生长稳定,可为研究小血管平滑肌细胞特性提供一个较理想的模型。     

MicroRNA-638在骨肉瘤中表达下调及对其细胞增殖的影响

目的探讨miR-638在人骨肉瘤(OS)细胞增殖行为中的影响。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-638在人OS组织及癌旁组织、人OS细胞株(MG63、U2OS、HOS、SaOS2)和正常人成骨NHOst细胞株中的表达;用LipofectamineTM2000转染miR-638模拟物或抑制物,细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测转染后的吸光光度值,平板克隆形成实验检测菌落数量。结果 miR-638在各组细胞中均有表达;OS细胞株中miR-638的表达明显下调(P<0.05);高表达miR-638能抑制OS MG63和U2OS细胞的增殖(P<0.05)。结论miR-638高表达能抑制OS细胞的增殖。     

均匀设计法优选大鼠单个胃肠平滑肌细胞分离方法的研究

目的优选大鼠单个胃肠平滑肌细胞的分离方法。方法采用4因素5水平均匀设计实验,以细胞形态评分和有效细胞数为评价指标,研究酶解法消化分离单个大鼠胃肠平滑肌细胞的最佳实验条件。结果分离单个胃平滑肌细胞的最优条件为0.020%大豆胰蛋白酶抑制剂与0.40%Ⅱ型胶原酶联合催化,温度30℃,消化2 h;分离单个肠平滑肌细胞的最优条件为0.005%大豆胰蛋白酶抑制剂与0.10%Ⅱ型胶原酶联合催化,温度34℃,消化2.5 h。结论通过均匀设计实验能优选大鼠单个胃肠平滑肌细胞分离条件,方法简便可行。     

Allergic inflammation and airway smooth muscle function

It is widely accepted that airway smooth muscle (ASM) contraction plays a key role in asthmatic attacks. Whether abnormalities of contractility or autonomic regulation exist in the asthmatic ASM is still debated. Studies based on isometric contraction failed to show differences in the force-generation capability between asthmatic and normal ASM. Recent studies in vitro have shown that sensitized ASM: (1) shortens more and more rapidly than normal ASM; and (2) develops a myogenic response to stretching. The increased velocity of shortening may compromise in vivo the ability of tidal cycling to reduce airway tone, which would result in an enhanced response to bronchoconstrictor stimuli. The myogenic response may result in a sustained bronchospasm after a deep inhalation, a maneuver that in normal individuals causes bronchodilatation. Although there is no evidence that neural or humoral abnormalities in the autonomic regulation of ASM tone are central to the pathogenesis of bronchial asthma, recent data suggest that ASM receptor dysfunction may develop secondary to airway allergic response. It has been shown that exposure of passively sensitized human bronchi to allergens in vitro causes M2- and beta2-receptor dysfunction. Impairment of pre-junctional M2-autoreceptors may result in an enhancement of neurally mediated bronchoconstrictor responses, whereas beta2-receptor dysfunction may reduce the sensitivity to bronchodilator treatment. Airway inflammation, which is a characteristic feature of bronchial asthma, may alter both the contractile properties and the autonomic regulation of ASM. These changes may contribute to the severity of asthma, as they may cause an, imbalance between factors favoring and opposing airway narrowing.     

二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。     

槲皮素联合伊马替尼体外抑制人胃癌SNU-1细胞生长和诱导细胞凋亡的研究

目的观察槲皮素联合伊马替尼对人胃癌SNU-1细胞生长和细胞凋亡的影响。方法以12.5~200.0μmol/L槲皮素和0.125~2.000μmol/L伊马替尼单药以及二者联合用药处理细胞24 h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Hoechst 33342染色观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用蛋白印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果槲皮素和伊马替尼单药均能使细胞活力降低,0.250μmol/L伊马替尼和2 5.0μmol/L槲皮素联合用药对细胞活力具有显著抑制作用,差异有高度统计意义(P<0.01),且可诱导人胃癌SNU-1细胞凋亡;二者联合处理还可以显著诱导半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的上调,差异有高度统计意义(P<0.01)。结论槲皮素联合伊马替尼能抑制胃癌SNU-1细胞的生长并诱导细胞凋亡,其作用机制主要是通过上调Caspase-9和Caspase-3的表达从而启动细胞凋亡来实现的。     

异甘草素诱导人胶质瘤细胞SHG44自噬及凋亡的实验研究

目的研究异甘草素(ISL)对人胶质瘤细胞SHG44增殖、自噬、凋亡及相关分子信号的影响。方法应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测ISL在不同时段、不同浓度下对人胶质瘤细胞SHG44的增殖抑制情况。用流式细胞术Annexin V-IP标记检测ISL(0,20,40,60,80μmol/L)作用于SHG44细胞48 h后细胞凋亡的情况,透射电镜下观测ISL对SHG44细胞内部超微结构的改变,应用免疫荧光染色法观测细胞内部及其周边自噬及凋亡相关蛋白的分布,Western blot检测ISL对SHG44细胞中Caspase-3,Bcl-2以及LC3B等蛋白表达的影响。结果在ISL作用下,SHG44细胞的增殖过程呈现时间及剂量依赖性抑制,ISL(80μmol/L)组在作用72 h后对SHG44细胞的抑制率超过了半数;流式细胞术检测ISL作用SHG44细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(1.54±0.85)%,(6.72±2.81)%,(11.82±3.21)%,(16.61±3.79)%,(26.15±3.82)%;透射电镜下可见SHG44细胞内部出现自噬小泡及自噬溶酶体;在荧光显微镜下可见细胞内出现自噬及凋亡相关蛋白的免疫荧光颗粒;Western blot显示ISL作用于SHG44细胞48 h后,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值以及Caspase-3的表达呈上升趋势,而Bcl-2表达呈下降趋势。结论 ISL能有效抑制人胶质瘤细胞SHG44的增殖,诱导SHG44细胞发生自噬和凋亡,并且抑制了抗凋亡分子Bcl-2的表达,增加了凋亡相关分子Caspase-3以及自噬相关分子LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值。     

穿心莲内酯对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨穿心莲内酯(AD)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞周期的影响。方法不同浓度AD作用于SMMC-7721细胞,培养24,48,72 h收获细胞。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测SMMC-7721细胞的增殖情况;流式细胞术(FCM)检测SMMC-7721细胞周期的变化。结果不同浓度AD干预SMMC-7721细胞,培养24 h后,细胞呈现明显的形态学改变。MTT检测结果显示:随着AD浓度的增加,SMMC-7721细胞光密度值(OD)逐渐减小,呈时间-剂量依赖性,与对照组比较差异有统计意义(P<0.05或P<0.01)。流式细胞检测结果显示:SMMC-7721细胞阻滞于G0/G1期,与对照组比较差异有高度统计意义(P<0.01)。结论 AD对人肝癌SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,能使SMMC-7721细胞阻滞于细胞周期的G0/G1期,提示AD抗肿瘤的作用机制与抑制肿瘤细胞增殖有关。