精原细胞分化及维甲酸在其中的作用与机制研究进展

多种microRNAs及RNA结合蛋白参与调控精原细胞分化,维甲酸(retinoic acid,RA)在精原细胞分化过程发挥了重要作用,RA可通过调控microRNA及RNA结合蛋白影响Stra8、Sohlh1、Sohlh2及Kit等精原细胞分化决定因子的转录后加工、修饰,或直接激活m TOR信号通路促进精原细胞分化,但睾丸内调控精原细胞对RA反应的机制及RA作用于精原细胞后的下游分子机制尚未完全明确。     

FoxO1在2型糖尿病中的作用及其研究进展

叉头框蛋白1(FoxO1)是机体内重要的转录因子,调控着多种基因的表达,它也是胰岛素通路中的关键因子。研究表明FoxO1通过参与胰岛素抵抗、胰岛β细胞增殖分化和凋亡、肥胖相关而在2型糖尿病(T2DM)的发生发展中发挥重要作用。本文就FoxO1对T2DM的影响做简要综述。     

经典Wnt信号途径在肺脏上皮细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用

目的:肺脏上皮细胞在抵抗外源微生物入侵中发挥着重要保护作用,最近研究揭示,在器官组织发育中发挥调控作用的经典Wnt信号具有免疫调节功能。因此,有必要研究肺脏上皮细胞A549中Wnt信号经典途径在抗结核分枝杆菌(Mtb)感染中的免疫调节作用。方法:用牛结核分枝杆菌卡介苗(BCG)刺激转入Wnt信号报告基因质粒BATflash的A549细胞,利用双荧光素酶报告系统、Western blot和ELISA方法分析细胞中Wnt信号经典途径主要相关信号因子和免疫反应炎症因子的表达变化。结果:BCG感染A549细胞后抑制了Wnt信号报告荧光素酶的活性,Western blot结果表明,随着细胞浆内磷酸化β-catenin含量增加,Wnt信号的抑制基因GSK3β和Axin2表达上调,而细胞核中的效应子β-catenin基因活性组分和下游转录因子TCF4与Lef-1的表达下调;BCG感染过表达β-catenin的细胞时导致IL-6、NF-κB、MyD88和TRAF6蛋白表达下调,但不影响TNF-α的表达。结论:肺脏上皮细胞在抗结核分枝杆菌感染过程中通过下调Wnt信号活性而抑制细胞中的MyD88/TRAF6/NF-κB信号通路来降低免疫反应以保护宿主细胞免受感染造成的免疫损伤。     

地黄甲基转移酶/去甲基化酶基因的注释及其在块根发育过程中的表达分析

利用Windows-BLAST软件同源比较分析获得地黄转录组中的DNA甲基转移酶/去甲基化酶基因,同时利用基因表达谱测序方法分析这些基因在地黄不同发育时期块根中的转录子水平。利用拟南芥11个C5-MTase和4个DMase基因的蛋白序列进行同源性比对,在地黄转录组中共获得了18个DNA甲基转移酶unigene和11个去甲基化酶unigene。差异表达基因(DEG)分析显示,11个DNA甲基转移酶unigene和5个去甲基化酶unigene在块根的发育过程中表达具有差异,随块根发育成熟转录子表达含量逐渐降低,说明甲基化基因参与调控地黄块根的发育。首次挖掘和分析了地黄基因组中DNA甲基转移酶/去甲基化酶基因的分布和表达,为进一步研究DNA甲基化在地黄块根发育以及连作下块根生长受抑的表观遗传学分子机理奠定了基础。     

小鼠PGC-1α基因启动子的转录调控功能分析

目的克隆小鼠PGC-1α基因的启动子并分析其转录调控模式。方法设计引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,PCR扩增PGC-1α基因启动子区并克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建具有PGC-1α启动子转录活性的报告质粒pGL3-PGC-1α-Luc。通过特异性引物,引入替换碱基突变相关转录因子调控模序,构建点突变融合载体,并将其转染1c1c7及c2c12细胞系,检测荧光素酶的表达情况。结果构建的pGL3-PGC-1α-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示正确;PGC-1α基因启动子区域(-2533⁺78)具有较强的转录活性;突变失活PGC-1α基因启动子区域中的CRE及IRE反应原件导致转录活性明显降低。结论成功构建小鼠PGC-1α基因启动子报告质粒,PGC-1α基因上游区域(-2533+78)具有较强的转录活性;突变失活PGC-1α基因启动子区域中的CRE及IRE反应原件导致转录活性明显降低。结论成功构建小鼠PGC-1α基因启动子报告质粒,PGC-1α基因上游区域(-2533⁺78)具有较强的启动子活性;启动子区域中的CRE和IRE反应原件为主要转录调控位点。     

DLX1对BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响

目的:分析和确认转录因子DLX1在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先,BMP9腺病毒感染C3H10T1/2细胞,RT-PCR和Western blot检测DLX1表达变化;随后,利用重组腺病毒技术分别过表达DLX1和RNA干扰(RNA Intenference,RNAi)抑制DLX1的表达,并利用碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)染色、钙盐沉积实验(茜素红染色),免疫细胞化学检测骨钙素(osteocalcin,OCN)表达和裸鼠皮下异位成骨实验分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化的影响。荧光素酶报告基因实验和Western blot分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞Smad1/5/8信号途径的影响。结果:BMP9可以促进C3H10T1/2细胞中DLX1基因和蛋白表达水平;过表达DLX1在体外可进一步促进BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积以及OCN的表达,过表达DLX1亦可促进BMP9诱导的裸鼠皮下异位成骨;反之,RNAi抑制DLX1表达后,由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积、OCN表达和裸鼠皮下异位成骨均相应受到抑制。过表达DLX1可进一步增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞中Smad/1/5/8的转录调控活性,RNAi降低DLX1表达则可抑制BMP9诱导Smad/1/5/8的转录调控活性。但是,无论过表达DLX1和RNAi降低DLX1表达均不会对BMP9诱导的Smad/1/5/8磷酸化造成影响。结论:DLX1可以调节BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化,其调节作用可能是通过影响Smad1/5/8信号的转录调控活性而实现的。     

禾谷镰刀菌Homeobox转录因子FgHtf1敲除突变体基因差异表达分析

禾谷镰刀菌是引起小麦赤霉病的主要病原真菌。分生孢子在侵染过程中起关键作用。先前研究表明同源异型盒(Homeobox)转录因子FgHtf1特异调控分生孢子的产生。为明确其调控产孢的分子机制,本研究采用高通量RNA测序技术(RNA-Seq),对ΔFghtf1突变体菌株和野生型PH-1菌株进行测序,结果显示其中591个基因转录上调,549个基因下调。对这些基因进行功能预测并聚类分析发现:上下调基因中分别有约30%和22%参与新陈代谢和能量转运。运用荧光定量PCR,检测10个基因的表达,验证了RNA-Seq的结果是可靠的。运用同源重组方法敲除明显下调的基因FGSG_10565和FGSG_07629,表型分析结果显示,相比野生型,ΔFGSG_10565和ΔFGSG_07629的生长速率和产孢量均不变,说明两个基因的表达受FgHtf1调控,但功能上不直接参与分生孢子的形成。     

斑马鱼Tg(Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)质粒的构建及验证

为研究性腺体衍生因子基因(gsdf)在斑马鱼Danio rerio精巢发育过程中相关分子调控机制模型,提取了斑马鱼精巢总RNA,逆转录合成c DNA,并以其为模板,用RT-PCR法扩增得到gsdf基因,构建了以小鼠gamma-crystalin启动子启动的斑马鱼gsdf基因与增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)融合的荧光素酶报告质粒Tg (Crystal-pro-gsdf-2A-egfp),采用显微注射技术注射该质粒至1细胞期的斑马鱼受精胚胎中。结果表明:在荧光显微镜下观察到19尾能在眼部晶状体中特异表达绿色荧光蛋白基因(gfp)的F0代斑马鱼,将表达了绿色荧光蛋白基因的斑马鱼同野生型(WT)非转基因斑马鱼杂交,最终获得能特异表达绿色荧光蛋白基因的F2代,且gsdf基因能在斑马鱼眼部晶状体中特异表达并稳定遗传。研究表明,在斑马鱼上建立的Tg (Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)转基因品系,为研究和观察斑马鱼精巢发育的分子调控机制提供了新的方法。     

miRNA失调控与肿瘤的发生发展

<正>microRNA(miRNA)为长度约19～25个核苷酸的非编码RNA,miRNAs能够识别特定的目标mR-NA并在转录后水平通过促进靶mRNA的降解和/或抑制翻译过程而发挥负调控基因表达的作用[1]。计算机预测表明,每个miRNA有能力调控约200个靶基因,说明人类大约1/3的基因表达受miRNAs的精细调节。它们主要通过调节信号分子(细胞因子、生长因子、转录因子和促凋亡或抗凋亡基因等)的表达参与动植物的生长、发育、分化和代谢[2]。近几年来的研究发现,一些miRNA的特异性调节和     

基于iTRAQ技术筛选膝骨关节炎模型鼠差异表达蛋白及右归丸延缓膝关节退变的分子机制

目的利用同位素相对和绝对标记定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术筛选正常大鼠和膝骨关节炎模型大鼠关节组织中差异表达蛋白,进一步研究右归丸对膝骨关节炎模型鼠差异表达蛋白组织蛋白酶K (cathepsin K,CtsK)、凝血酶敏感蛋白-2 (thrombospondin-2,TSP-2)、Rho蛋白依赖性肌球蛋白磷酸酶(Rho protein-dependent myosin phosphatase,Mprip)和钙调蛋白-1 (calmodulin-1,CaM-1)等蛋白表达的影响,以揭示右归丸治疗膝骨关节炎的可能机制。方法 60只SD大鼠分为假手术组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组(0.17 g/kg)及右归丸高(4.8 g/kg)、中(2.4 mg/kg)、低(1.2 g/kg)剂量组,每组10只。除假手术组外,采用改良Hulth法建立KOA大鼠模型,模型制备成功6周后分别给予干预,假手术组和模型组给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液、硫酸氨基葡萄糖组给予硫酸氨基葡萄糖,右归丸干预组给予不同浓度的右归丸水煎剂,各组大鼠连续灌胃2个月,处死大鼠取膝关节。iTRAQ技术筛选假手术组和模型组大鼠的差异表达蛋白,并利用生物信息学软件进行数据分析。HE法观察各组大鼠软骨组织病理形态改变并进行Mankin评分,免疫组化法验证各组大鼠软骨组织差异表达蛋白CtsK、TSP-2、Mprip和CaM-1等表达。结果假手术组和模型组共筛选出有意义的差异蛋白1 000个(以差异倍数≥1.2或≤0.83为筛选标准),其中上调蛋白442个,下调蛋白558个。基因本体论(Gene Ontology,GO)分析显示这些差异表达蛋白可分为59种功能类型,17种参与细胞成分,16种参与基因的分子功能,26种参与生物学过程,Pathway通路分析显示这些差异蛋白主要集中在核糖体、酪氨酸、Th17细胞分化、Th1和Th2细胞分化、戊糖磷酸化通路等。与假手术组比较,模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱;其Mankin评分、TSP-2、CtsK等蛋白表达均明显升高,Mprip、CaM-1等蛋白表达均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,右归丸高剂量组软骨结构趋于正常,软骨细胞分布偶见不均,关节软骨表面欠光滑;其软骨组织Mankin评分、TSP-2、CtsK等蛋白表达均明显降低,Mprip、CaM-1等蛋白表达均明显增强(P<0.05)。结论膝骨关节炎的形成是多基因共同作用的结果,其中CtsK、TSP-2、Mprip和CaM-1对膝骨关节炎的发生、发展起着至关重要的作用,右归丸治疗效果可能通过下调TSP-2、CtsK和上调Mprip、CaM-1蛋白表达而实现。     

住宅楼安装中央空调的加固案例分析

文章通过两处住宅用房安装中央空调的事例,现场查勘、验算与鉴定,证实了在住宅用房的混凝土梁上钻孔洞安装中央空调管线的做法,影响了房屋结构的安全,同时给出了加固处理意见,提出了个人的几点看法.     

Regularities of development of settling of models of deep footings

Conclusions 1. The effect of relative penetration on the change in magnitude of settlement is substantial. With the same specific pressure on the base the settlement of the model decreases as the relative penetration increases.2. Published data on values of unit friction forces along lateral surfaces of deep foundations were confirmed. The maximum value of resistance along the side surface was 2 tons/m².3. It was established that the realtionship between the settlement of the model and its diameter is nonlinear. This is of great importance in working out a method for calculating foundations of deep footings from deformations especially if one considers that in this case the foundation carries substantial pressures and deforms under conditions of strongly developed shear regions.Translated from Osnovaniya, Fundamenty i Mekhanika Gruntov, No. 6, pp. 11–12, November–December, 1971.     

测量标志普查资料汇集技术处理

为了适应新的形势发展需要,安徽省国土资源厅已启动新一轮测量标志普查工作。与过去不同,此次普查在资料汇集、调查人员组织、调查资料归档与调用等方面做了较大变革,文章简明阐述了变革后的测量标志普查资料汇集技术处理的过程。     

自动扶梯逆行故障成因与分析

对自动扶梯突然反转而导致逆行故障的类别和成因进行了分析,讨论了逆行速度及症状,分析了逆行概率及风险,并针对逆行提出了一些对策。     

浅析步行街的建筑工效学——上海市吴江路步行街建筑工效学调研

从建筑工效学的角度对上海市吴江路休闲步行街进行了调查研究，根据调查结果，分析了其在建筑工效学上的一些特点与不足之处并进行了探讨，以期对步行街的建筑工效学设计提供准确的参考。     

环境的共鸣--大连水产学院图书馆的设计

本文通过对大连水产学院图书馆的介绍,向人们展示了建筑与环境之间相辅相成,共同作用,引起环境共鸣的原则方法.     

住宅的多样性——日本集合住宅的借鉴

以西安目前住宅市场发展的现状及其存在的弊端为例 ,说明我国目前住宅需求的多样化和设计手法的单一化之间的矛盾 ,论述了与我国有着相似文化背景的日本在解决不同住宅需求时采用形式多样、功能各异的集合住宅的理念 .试图以此借鉴 ,使我国建筑设计界了解日本集合住宅的发展演变过程 ,吸取他们的经验 ,为我们在住宅多样化研究和设计时提供一种不同的思路和方法 .     

混凝土碳化深度的灰色预测

混凝土碳化是导致钢筋混凝土结构耐久性损伤的主要原因之一。为了预测混凝土碳化深度,本文建议采用一种基于灰色系统理论的预测模型,该模型可以根据已知的混凝土碳化序列,较精确地预测未来时刻的碳化深度。文章最后以实例说明了该模型的应用。