梅毒螺旋体重组蛋白Tp0965的表达与鉴定

目的:研究梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0965(r Tp0965)的表达并鉴定其免疫反应性,为进一步探讨其在梅毒血清学诊断与疫苗中的应用价值奠定基础。方法:构建Tp0965原核表达重组体p ET-28a(+)/Tp0965,诱导转化宿主菌表达重组蛋白,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,Western blot鉴定其免疫反应性。结果:成功构建了原核表达重组体p ET-28a(+)/Tp0965,经诱导高效表达了一分子量约为43 KDa的可溶性重组蛋白,纯化蛋白纯度>95%;Western blot显示该纯化蛋白能被梅毒患者血清特异性识别。结论:高效表达了可溶性r Tp0965,该重组抗原有良好的免疫反应性。     

梅毒螺旋体重组蛋白Tp0608的表达与鉴定

目的表达梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0608(rTp0608)并鉴定其抗原性,为深入探讨其在梅毒血清学诊断中的价值奠定基础。方法 PCR扩增Tp0608全长基因,构建原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608,转化宿主菌诱导表达rTp0608,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE分析蛋白表达形式与纯度,Western blot鉴定rTp0608的抗原性。结果原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608在宿主菌内经诱导表达了分子量大约为38 kDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度>95%;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论 PET-28a(+)表达载体高效表达了rTp0608,该重组抗原有良好的抗原性。     

梅毒螺旋体膜脂蛋白Tp0821促炎活性研究

目的探讨梅毒螺旋体(Tp)膜脂蛋白Tp0821潜在的促炎活性及可能参与的信号转导通路。方法表达重组蛋白Tp0821(r Tp0821),去除其中内毒素。r Tp0821刺激THP-1细胞,ELISA检测促炎细胞因子IL-6、IL-8和IL-1β的表达水平;ERK1/2、JNK、p38和NF-κB特异性抑制剂分别预处理THP-1细胞30 min,再以r Tp0821刺激THP-1细胞,ELISA分别检测IL-6、IL-8和IL-1β的表达水平。结果 r Tp0821刺激THP-1细胞表达IL-6、IL-8和IL-1β在一定范围内与刺激时间以及蛋白浓度呈正相关,1.0μg/m L刺激24 h时各细胞因子表达水平最高;r Tp0821刺激经ERK1/2、JNK、p38和NF-κB特异性抑制剂预处理后的THP-1细胞,IL-6表达水平分别下降63.4%(P<0.001)、4.3%(P>0.05)、53.4%(P<0.001)和73.1%(P<0.0001),IL-8分别下降49.2%(P<0.001)、6.0%(P>0.05)、41.1%(P<0.001)和71.0%(P<0.001),IL-1β分别下降36.8%(P<0.01)、3.9%(P>0.05)、30.3%(P<0.001)和59.7%(P<0.001)。结论 r Tp0821可通过ERK1/2、p38和NF-κB通路诱导THP-1细胞表达促炎细胞因子IL-6、IL-8和IL-1β,Tp0821可能是Tp重要的致病因子。     

梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136前炎症活性的研究

目的初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒p ET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白;将不同浓度(1、2、5、10μg/m L)的r Tp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;并同时用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预先处理巨噬细胞,检测相应细胞因子分泌量。结果成功构建了p ET-28a/Tp0136重组质粒,并诱导表达和纯化出r Tp0136;重组蛋白能诱导巨噬细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈浓度和时间依赖性;重组蛋白刺激经PDTC预处理后的巨噬细胞,其IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平分别降至32%、35%和27%。结论r Tp0136可诱导巨噬细胞产生前炎症细胞因子,该过程可能受NF-κB调控。     

课前5分钟英语听说专项训练实效性研究

目的:比较颗粒凝集试验(TPPA)、酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)对梅毒检测的临床应用价值。方法:选取2015年7月-2016年7月来本院就诊的1618例患者(包括皮肤性病科门诊患者、其他科室的住院患者、术前患者、产前检查孕妇及HIV自愿检测者)的标本,采用TPPA、TP-ELISA和TRUST进行检测,比较三种检测方法的检出率、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、Youden指数。结果:TPPA、TP-ELISA及TRUST检测梅毒抗体的阳性率分别为20.1%、19.8%和17.3%。以TPPA为对照,TP-ELISA的阳性符合率为97.5%,敏感性、特异性、准确率分别为96.0%、99.4%,98.7%。TRUST的阳性符合率为98.2%,敏感性、特异性、准确率分别为84.6%、99.6%、96.6%。TP-ELISA的敏感性、准确率与TRUST比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:TPPA、TP-ELISA和TRUST都可以用来检测梅毒,但三种方法的准确率、敏感性、特异性各有千秋,临床上应采用多种方法联合检测的方法结合临床症状诊断梅毒,从而更好地提供诊断参考依据。     

梅毒螺旋体粘附素Tp0751重组菌影的构建与鉴定

目的构建梅毒螺旋体(Tp)粘附素Tp0751的重组大肠埃希菌菌影(E.coli bacterial ghosts,EBG),为深入评价其在抗Tp感染中的潜在免疫保护作用奠定基础。方法将含有噬菌体Phi X174裂解基因E的质粒p HH43转化E.coli DH5α,42℃温控诱导使其形成EBG并计算裂解效率,用琼脂糖DNA电泳和透射电镜(TEM)鉴定EBG。构建含有裂解基因盒E-box、膜锚定序列E'-linker及Tp0751目的基因的原核双表达重组质粒p ET28a-E'-Tp0751-E-box,28℃诱导重组E.coli BL21表达Tp0751并用Western Blot鉴定;42℃诱导形成重组EBG(r EBG),计算裂解效率并用DNA电泳和TEM鉴定。结果构建的EBG裂解率为98.13%,DNA电泳未观察到DNA条带,TEM显示绝大部分细菌都裂解成缺乏胞浆成分的细胞空壳并保持活菌基本形态。r EBG在28℃时高效表达重组Tp0751蛋白,且仅与梅毒患者血清特异性结合;42℃下其r EBG裂解率为96.37%,电泳和TEM鉴定结果与EBG的相似。结论成功构建表达Tp粘附素Tp0751的r EGB,其所表达目的蛋白具有良好免疫反应性。     

乌鲁木齐市和喀什地区梅毒病例报告质量现场调查

目的了解2016─2017年新疆乌鲁木齐市和喀什地区梅毒病例报告质量,为今后新疆梅毒的防治工作提供科学依据。方法从中国疾病预防控制信息系统传染病报告管理系统中,导出2016年7月─2017年6月新疆乌鲁木齐市和喀什地区各类医疗机构报告的梅毒病例,采用分层随机抽样方法抽取665例现场核查。结果 2016─2017年15家医疗机构共报告梅毒病例3 529例,重复报告176例,其中重复1次153例、2次10例和3次1例,重复报告率4.98%;乌鲁木齐市报告梅毒1 924例,重复报告率1.46%,诊断准确率98.55%,梅毒分期准确率,一期梅毒89.28%、二期梅毒93.33%和隐性梅毒99.00%;喀什地区报告梅毒1 605例,重复报告率9.22%,诊断准确率为82.77%,梅毒分期准确率,一期梅毒8.80%、二期梅毒77.41%和隐性梅毒100.00%;乌鲁木齐市梅毒诊断准确率(χ~2=38.59)和一期梅毒分期准确率(χ~2=86.25)高于喀什地区(均P<0.05)。结论新疆存在梅毒病例重复报告,乌鲁木齐市各医疗机构诊断准确率高于喀什地区,喀什地区一期梅毒分期准确率较低;应加强医疗机构诊治医师的梅毒诊断标准培训,提高病例报告质量。     

螺旋体脂蛋白免疫调节机制研究进展

梅毒、莱姆病和细螺旋体病是威胁人类健康的主要螺旋体病。然而,对此类疾病的免疫机制尚未充分阐明。螺旋体通过各种结构,例如脂多糖(LPS)、表面脂蛋白和糖脂与宿主相互作用。尽管螺旋体抗原如LPS和糖脂可能在其感染时有助于炎症反应,但梅毒螺旋体(Tp)和伯氏疏螺旋体(Bb)缺乏LPS。脂蛋白是表达于所有螺旋体的最丰富的蛋白,往往决定螺旋体与环境作用的方式。脂蛋白可促进炎症反应、调节固有免疫应答和适应性免疫应答,并有助于螺旋体粘附在宿主中或中肠上,或逃避免疫系统。然而,大多数螺旋体脂蛋白功能尚未明确。本文综述螺旋体脂蛋白在免疫逃逸和免疫激活方面的免疫调节作用,将有助于阐明螺旋体病的固有免疫致病机制,以及与螺旋体疾病疫苗发展和螺旋体病炎症反应有关的适应性免疫机制。     

苏州市老年人肌少症的相关因素

目的研究苏州市老年人群肌少症相关指标的特征,探讨肌少症的保护因素及危险因素。方法选取苏州市3个地区符合条件的志愿者,采用横断面调查的方法,调查患者的一般资料、饮食及运动情况。应用DBA-210人体成分分析仪测定不同部位肌肉质量,用JAMAR握力计测定握力,采用4 m步行测试评估受试者的躯体功能,按照亚洲肌少症工作组诊断标准综合诊断肌少症。对肌少症的相关因素做Logistic回归分析,明确肌少症的危险因素及保护因素。结果肌少症检出率为28. 8%,其中男性为30. 4%,女性为27. 9%,性别间比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。同一年龄段肌少症组体质量指数(body mass index,BMI)、上肢肌肉量、下肢肌肉量、四肢骨骼肌量、骨骼肌质量指数(appendicular skeletal muscle index,ASMI)、握力、步速均低于非肌少症组,差异有统计学意义(P <0. 05)。肉类(χ2=17. 99,P <0. 01)、鱼类(χ2=8. 13,P<0. 05)、蛋类(χ2=13. 56,P<0. 01)、奶类(χ2=11. 95,P<0. 01)的摄取频率不同,肌少症发生率不等。每周进行有氧运动(χ2=16. 28,P<0. 01)、抗阻运动(χ2=15. 86,P<0. 01)的不同时长段的肌少症发生率比较,差异有统计学意义(P<0. 05)。Spearman相关分析显示年龄与肌少症呈正相关(r=0. 307),而BMI (r=-0. 253)、上臂围(r=-0. 192)、小腿围(r=-0. 280)与肌少症呈负相关,肉类(r=-0. 229)、鱼类(r=-0. 159)、蛋类(r=-0. 201)、奶类(r=-0. 193)摄入频率增加与肌少症呈负相关,有氧运动(r=-0. 226)、抗阻训练(r=-0. 221)时长与肌少症呈负相关(P均<0. 05)。Logistic回归分析结果显示,年龄是肌少症的危险因素,而BMI、膳食中进食肉类、蛋类、奶类是肌少症的保护因素。结论老年人是肌少症的高发人群,对其进行运动干预、营养指导有利于延缓进展、改善不良预后。老年人要保证能量和蛋白质的充足供应,保持适宜的体质量指数,同时在保证能量摄入充足情况下,可加大富含优质蛋白的动物性膳食的摄入。     

动态联合监测血清淀粉样蛋白A、血清可溶性髓系细胞触发受体－1、D－二聚体对Sepsis 患者预后的评估价值：前瞻性巢式病例对照研究

目的探讨血清淀粉样蛋白A (serum amyloid A protein,SAA)、血清可溶性髓系细胞触发受体-1 (soluble triggering receptor expressed on myeloid cell-1,s TREM-1)、D-二聚体在Sepsis患者预后评估中的价值。方法 2018年1月至2019年2月,前瞻性纳入海南省人民医院ICU收治的Sepsis患者,检测患者诊断Sepsis后第1、3、7天的SAA、s TREM-1、D-二聚体、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)水平、并记录患者急性生理和慢性健康状况评估(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)结果,将诊断Sepsis后28 d内死亡患者作为研究组(死亡组),存活患者作为对照组(生存组),采用多因素Logistic回归分析和受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析各指标与患者预后的相关性及对预后的评估价值。结果共82例符合纳入和排除标准的Sepsis患者入选本研究,其中男性51例,女性31例,平均年龄(68. 17±9. 94)岁。死亡组30例,生存组52例,两组年龄、性别、体质量指数差异无统计学意义(P均>0. 05)。死亡组与生存组在诊断Sepsis后第1、3、7天SAA、s TREM-1、D-二聚体、CRP和PCT水平及APACHEⅡ评分差异均具有统计学意义(P均<0. 05)。诊断Sepsis后第1天,SAA (P=0. 004)、s TREM-1 (P=0. 025)、CRP (P=0. 005)、PCT (P=0. 016)均为预测Sepsis预后的独立相关因素,且SAA、s TREM-1水平在第1、3、7天与APACHEⅡ评分呈正相关(P均<0. 05),而D-二聚体仅在第3天和第7天与APACHEⅡ评分呈正相关(P均<0. 05)。ROC曲线发现,SAA第1、3、7天的曲线下面积均最大(分别为0. 878、0. 916、0. 954),s TREM-1第3天和第7天(0. 907、0. 929)的ROC曲线下面积均大于CRP (0. 897、0. 927)和PCT(0. 892、0. 890),SAA+s TREM-1+D二聚体联合检测在第1、3、7天的ROC曲线下面积分别为0. 918、0. 974、0. 984。结论 SAA、s TREM-1和D-二聚体的动态联合监测结果可作为Sepsis的预后指标,且优于CRP、PCT等传统预测指标。