天山一号冰川产脂肪酶酵母菌的筛选及其系统发育分析

通过对天山一号冰川底部沉积层耐低温酵母菌的分离和其中产脂肪酶酵母菌株的筛选,了解冰川微生物生理多样性和系统发育多样性,为低温脂肪酶生物技术的研发奠定基础。采用RB琼脂平板涂布分离可培养酵母菌,通过橄榄油选择培养基和吐温80选择培养基筛选产脂肪酶的耐低温菌株。对分离菌株表型特征、最适生长温度进行比较,结合26S r DNA基因序列同源性分析确定产脂肪酶菌株的多样性和系统进化地位。从57株分离物中筛选到12株产脂肪酶的耐低温酵母菌株,其中7株属于隐球菌属(Cryptococcus),2株属于掷孢酵母属(Sporobolomyces),2株属于红酵母属,1株属于Mrakiellaspp。天山一号冰川冻土中产脂肪酶的耐低温酵母菌多样性较丰富,依据其生长温度的范围,均属于耐冷菌。     

成熟期豆瓣中产脂肪酶菌株的筛选及鉴定

实验以成熟期豆瓣为原料筛选脂肪酶高产菌株,通过罗丹明B平板初筛和摇瓶发酵复筛法,以脂肪酶水解圈作为筛选模型,并对产酶菌株进行了酶活力的检测及细菌16SrRNA系统发育分析。结果表明:从成熟期豆瓣中筛选出9株产脂肪酶菌株,其中产酶活力最高的为编号CS1024,酶活力为48.21IU/mL,经鉴定该菌株为嗜碱盐单胞菌(Halomonas alkaliphila),其与最高同源性菌株相似性为99%。     

产脂肪酶海洋微生物的筛选、鉴定及酶学性质研究

目的:从海洋来源样品中筛选脂肪酶产生菌,并对其进行鉴定和酶学性质研究。方法:以橄榄油为唯一碳源,采用固体平板变色圈观察法筛选脂肪酶产生菌。利用16S r DNA序列分析对其进行鉴定,并对脂肪酶酶学性质进行研究。结果:从海鳗和鲍鱼肠道内容物以及平潭海域、北极和盐湖泥样5个样品中共分离筛选出22株脂肪酶产生菌,其中ZF-16菌株产酶能力较强,根据其形态特征及16S r DNA序列分析鉴定为洋葱伯克霍尔德菌。其酶学性质研究表明,该脂肪酶最适反应p H为9.0,在p H 5.0~10.0范围稳定;最适反应温度75℃,当温度小于40℃时较稳定;低浓度(1 mmol/L)的Na+和K+对脂肪酶的活性有激活作用,Zn2+对脂肪酶有强烈的抑制作用;对C4~C18均有降解作用,尤其对中长链的三辛酸甘油酯(C8)具有较强的降解能力。结论:从海洋来源的样品中筛选到产脂肪酶能力较强的细菌ZF-16菌株,经鉴定为洋葱伯克霍尔德菌。其所产脂肪酶为碱性高温脂肪酶,对C4~C18底物有降解作用,可用于食品烘焙、废纸脱墨和造纸脱胶工业。     

原料乳中产耐高温蛋白酶菌株的筛选与鉴定

从原料乳中分离筛选产耐高温蛋白酶菌株,经酪蛋白水解圈实验,筛选出10株产蛋白酶的菌株.在此基础上,通过蛋白酶耐热性比较,筛选出一株产耐高温蛋白酶菌株,并通过菌落形态观察、生理生化试验、核酸特征分析;K16S rKNA基因序列测定等对该菌株进行鉴定.BLAST比对构建该菌株系统发育树,最终鉴定该菌株为荧光假单孢杆菌.     

产核糖核酸酶PA110-7菌株的筛选与初步鉴定

为筛选产核糖核酸酶并且具有抗病毒活性的植物来源的菌株,并鉴定。本实验从健康的碱蓬中分离到50株益生菌,通过平板显色法筛选得到9株产核糖核酸酶的益生菌,通过噬菌斑法进行复筛得到抗噬菌体率高达69%的菌株110-7。根据菌株的菌落形态、大小、颜色,革兰氏染色、芽孢染色等观察菌体形态以及生理生化实验、16S rDNA序列测定进行鉴定,初步判定该菌株为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。     

一株产耐有机溶剂脂肪酶伯克霍尔德氏菌的分子鉴定及酶学性质分析北大核心CSCD

为筛选具有潜在应用价值的产脂肪酶菌株,采用三丁酸甘油酯固体培养基从黄山松树林土壤中筛选产脂肪酶菌株,利用16S rDNA测序对筛选的菌株进行鉴定,并对其产脂肪酶酶活力参数以及酶学性质进行分析。结果表明:筛选的产脂肪酶菌株HSU-7为伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp. HSU-7);菌株HSU-7所产脂肪酶的最适反应温度为45℃,最适pH为5,为一种耐酸性的中温脂肪酶;菌株HSU-7发酵5 d,所产脂肪酶酶活力最大,为72.22 U/mL。同时,K^(+)、Ca^(2+)和Mg^(2+)对菌株HSU-7所产脂肪酶酶活力具有显著的促进作用,而Ni^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(3+)和Zn^(2+)具有一定的抑制作用,该脂肪酶可耐受有机溶剂甲醇、乙醇、异丙醇和二甲基亚砜,但Triton X-100可显著抑制其酶活力;此外,该脂肪酶能耐受65℃的高温。综上,菌株HSU-7可高产脂肪酶,且该脂肪酶有较强的热稳定性,可耐受多种有机溶剂,具有很好的工业应用价值。     

辣泡菜中乳酸菌的筛选以及理化性质的鉴定

以辣泡菜中的乳酸菌作为研究对象,从3批不同来源的材料中筛选出11株乳酸菌,经过对比产酸量,最后筛选2株产酸量较高的菌株。通过形态特征、菌落特征、生理生化特征等初步鉴定,结果表明2株菌均可以进行乳酸发酵,其中R菌株为Lactobacillus plantarum,HPC7菌株为Bacillus toyonensis。     

天山一号冰川沉积层低温脂肪酶产生菌的筛选及初步鉴定

从新疆天山一号冰川西支尾部的底部沉积层中分离筛选出高产低温脂肪酶菌株,进行初步鉴定及产酶探讨。使用罗丹明-B、吐温80、维多利亚蓝选择培养基以及三丁酸甘油酯酶活检测板,结合棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)比色法,筛选出产低温脂肪酶酶活较高的菌株,研究其生长特性及常规生理生化实验,并根据16S rRNA基因序列初步确定其所属菌属。共分离筛选到5株产低温脂肪酶酶活较高的菌株,经初步鉴定其中4株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),1株为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。该芽孢杆菌属产脂肪酶的能力略高于其余菌株。分离得到的5株菌均属于耐冷菌,有较好的耐盐性,能在低温条件下发酵产酶,其中4株在36h左右达到产酶高峰,为开发冰川环境下丰富的低温酶资源奠定了基础。     

粮油食品防霉微生物筛选及其活性物质初步研究

为开发新型防霉剂,降低粮油食品储藏、运输、流通等过程中霉变对其品质和食用安全的影响,研究筛选获得具有强防霉活性的微生物。采用抑菌圈法,以禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）为指示菌筛选具有防霉活性的菌株。利用形态学观察、生化特征鉴定和16S rDNA基因序列比对进行菌株鉴定;通过不同温度、pH和蛋白酶K处理对防霉活性物质进行初步分析。结果显示：通过初筛获得33株对禾谷镰刀菌具有强抑制活性的菌株,复筛后选择的7株菌归属为芽孢杆菌属（Bacillus）;活性物质分析发现7株菌的活性物质均不耐高温和强酸碱,同时蛋白酶K处理对其防霉效果没有明显影响,初步推断为肽类;通过抑菌谱测定发现菌株ASAG 62对常见霉菌（产黄青霉Penicillium flavum、黑曲霉Aspergillus Niger、赭曲霉Aspergillus ochre、黄曲霉Aspergillus flavus、禾谷镰刀菌F. graminearum）均具有良好的抑制效果。     

传统发酵黄豆酱中低营养菌株的筛选及产胞外酶特性分析

为了更好地研究北方地区传统黄豆酱中低营养菌株的分布及其功能特性,对采集于不同地区的黄豆酱样品进行低营养菌株的筛选、分离及纯化,并研究其产胞外酶特性。结果共分离出114 株低营养菌株,其中69 株产纤维素酶,81 株产淀粉酶,112 株产脂肪酶,72 株产β-葡萄糖苷酶,59 株产蛋白酶。通过16S rRNA基因序列分析对产酶活性高的代表菌株进行鉴定,鉴定出5 种类别菌株,分别为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）、短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）、萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeu）、阿萨尔基亚芽孢杆菌（Bacillus axarquiensis）。所筛选的产酶活性高的低营养菌株短小芽孢杆菌HS1-4和枯草芽孢杆菌HS5-13耐盐性高,对环境的抗耐性强,具有广阔的应用前景。     

一株高产碱性聚半乳糖醛酸酶生产菌的分离与鉴定

从土壤中经分离筛选得到1株产碱性聚半乳糖醛酸酶活力较高的菌株,并从形态特征、培养特征、生理生化特征以及分子生物学方面进行了鉴定,结果表明该菌株属B.clausii。     

一株戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) 分离与鉴定

从我国不同生态区的多个自然发酵肉制品中分离得到120多株乳酸菌,通过对分离菌株发酵适应性和发酵特性研究,从分离菌株中优选出1株能够进行单菌株发酵的乳酸菌I9.对I9的形态特征、菌落形态特征和Gram染色、过氧化氢酶反应以及生理生化指标测试表明,I9为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus).菌株16SrRNA序列分析也证实了鉴定结果.     

进境多肉植物细菌性褐腐病的病原分离与鉴定

目的通过对病变叶片进行细菌的分离鉴定,明确韩国进境多肉植物上叶片褐色腐烂病斑的病原。方法采用组织分离法,从韩国进境多肉植物叶片中分离纯化到1株细菌菌株,对该菌株进行了鉴定和生物学特性研究。结果形态及培养特征、生理生化特性的研究结果表明该菌株在营养琼脂(nutrient agar,NA)培养基上单菌落圆形淡黄色,边缘整齐。菌体直杆状,周生鞭毛运动,无芽孢,为革兰氏阴性菌。经形态鉴定、培养特征、生理生化、致病性测定及16S rDNA序列分析,确认引起该多肉植物发生褐腐病的病原是菠萝泛菌(Pantoea ananatis)。结论经过对发生细菌性褐腐病的叶片进行病原分离与鉴定,有效阻止了菠萝泛菌的远距离传播。     

3株降解玉米赤霉烯酮芽孢杆菌的快速鉴定

为了快速确定筛选的3株降解玉米赤霉烯酮的芽孢杆菌(Bacillus sp. YW、Bacillus sp. CP、Bacillus sp. GJ)的分类地位,利用形态学、生理生化特性、保守持家基因的进化分析及特异性PCR对菌株进行鉴定。3株芽孢杆菌的形态特征及生理生化特性非常相似,均产芽孢;结合16S rDNA序列分析、gyrA基因的系统发育树及特异引物PCR结果显示,菌株YW和CP属于贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),菌株GJ属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。本研究表明保守持家基因序列分析及特异性PCR,能够快速、灵敏地对芽孢杆菌近缘物种进行分子鉴定,为功能性微生物菌株的快速筛选鉴定提供参考。     

入境马蹄莲细菌性软腐病菌的分离鉴定

目的在参展青岛世界园艺博览会的荷兰进口马蹄莲植株上,发现叶片有明显褐色软腐症状,为明确引起马蹄莲软腐病的病原,对叶片进行病菌的分离鉴定。方法采用组织分离法,从荷兰入境马蹄莲植株的病变叶片中分离纯化到2株致病性细菌菌株(MTL1、MTL2),对该菌株进行鉴定和生物学特性研究。结果形态及培养特征、生理生化特性的研究结果表明该菌株在NA培养基上能形成白色圆形单菌落,薄而平滑、边缘整齐,光滑不透明,KB培养基上划线培养后可产生明显的绿色的荧光。显微镜下菌体呈杆状,具多根极生鞭毛,革兰氏阴性菌。结论经形态鉴定、培养特征、生理生化及16S r DNA序列分析和致病性测定实验,确认引起马蹄莲细菌性软腐病的病原为边缘假单胞菌(Pseudomonas marginalis)。     

烟叶表面高效降解蛋白质芽孢杆菌的分离筛选及其鉴定

利用芽孢杆菌耐高温的特性,从烟叶表面分离筛选并得到1株可高效降解蛋白质的菌株F-Y-11,其蛋白质降解圈直径与菌落直径比值(HC值)为5.50,蛋白酶活力为25.67 U.通过形态学特征及生理生化特征鉴定菌株F-Y-11为芽孢杆菌属.将其制成菌剂对烟丝进行发酵,测得蛋白质降解率为29.32％.     

醋醅中分离菌株W321种属鉴定的研究

试验以从醋醅中分离纯化到的菌株W321为研究对象,为进一步开发利用这一菌株,根据菌株W321的形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列,对其进行种属鉴定的研究.经形态与生理生化鉴定菌株W321属于芽孢杆菌属,16S rDNA序列与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的同源性达到了99％,表明与枯草芽孢杆菌极为相似,因而将菌株W.鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

一株产胶原蛋白酶嗜虫沙雷氏菌的分离与鉴定

以明胶为诱导物,从海洋混合菌中筛选出一株有效产生胞外胶原蛋白酶的菌株,其发酵上清液中的酶活达到22.46U/mL。通过形态学特征、生理生化特征测定对菌株进行常规鉴定,并结合菌株16SrDNA序列测定进行分析验证。结果表明,该菌株为嗜虫沙雷氏菌。     

一株产几丁质酶渤海丝状真菌（Alternariatenuissima）的筛选及鉴定

以渤海湾水域获得的52株丝状海洋真菌为出发菌株,通过平板透明圈法和发酵液酶活性测定,从中筛选出一株产几丁质酶活力较高的海洋真菌mTJ04-1．1,结合形态学方法和18SrDNA．ITS序列分析对其进行鉴定,确定该菌为极细链格孢霉（AltemariatenuissimamTJ04-1-1）。该菌能在以几丁质为唯一碳源的平板上生长并产生明显透明圈,透明圈与菌落直径的比值（D／d）达N2．81。对发酵液几丁质酶活力分析结果表明,该酶最适反应温度为45℃,最适pH值为6．5,最适条件下酶活性可达3．2U／mL。     

纳豆菌的分离、鉴定及产蛋白酶液态发酵条件的优化

利用奶粉豆粕培养基,采用稀释平板分离法,以H/C(透明圈直径/菌落直径)为指标,从日本传统食品纳豆中分离出9株蛋白酶产生菌。将这些初筛菌株进行发酵培养,采用Folin-酚法测定酵上清液的蛋白酶活性,选出蛋白酶活性最高的菌株H2,并依据形态特点和主要生理生化特征,鉴定为芽孢杆菌纳豆亚种(Bacillussubtilis sub.Natto)。最后以蛋白酶活性为指标,考察培养基初始pH值、温度、装液量、接种量和种龄等因素对H2菌株液态发酵的影响。结果表明,该菌株液态发酵产蛋白酶的适宜条件是:培养基初始pH值7、培养温度40℃、装液量40 mL/250 mL、接种量3%、种龄25 h。