酸菜包外包膜污染菌分析

某企业发现直接接触食品的酸菜外包膜微生物超标.送检的5份细菌总数达104cfu/mL～ 107cfu/mL,并伴有霉菌污染.通过16S rDNA序列分析,鉴定其主要的污染菌为微小杆菌(Exiguobacterium spp.)和不动杆菌(Acinetobacter spp.),同时也伴有部分葡萄球菌(Staphylococcus spp.)和芽孢杆菌(Bacillus spp.).污染的霉菌则主要为曲霉(Aspergillus spp.)、交链孢霉(Alternaria spp.)和青霉(Penicillium spp.).采用半定量粘附实验检测其生物膜形成能力,发现3个主要污染菌株均有很强的生物膜形成能力.     

湘味卤豆干中腐败微生物的分离鉴定及控制

目的：更好地控制湘味卤豆干腐败微生物的生长,保证湘味卤豆干的食品安全。方法：采用平板划线法进行初筛,结合菌落形态观察、革兰氏染色、16S rDNA和ITS序列鉴定湘味卤豆干中的腐败微生物。结果：共分离筛选得到9株菌株,KZ2780-3和KZ2780-4为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、NZ2559-1为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、JZ2559-5为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、FZ2559-2为肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）、SZ2641-5为屎肠球菌（Enterococcus faecium）、RZ2641-7为溶血性葡萄球菌（Staphylococcus haemolyticus）、BZ2780-1为鲍氏不动杆菌（Acinetobacter baui）、CZ2780-5为橘青霉（Penicillium citri）。结论：引起湘味卤豆干腐败的菌株是枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、肺炎克雷伯氏菌、屎肠球菌、溶血性葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、橘青霉。湘味卤豆干的控制方法是超高温瞬时杀菌技术、等离子体杀菌技术、天然抑菌物质结合生物防腐剂、真空包装、气调保鲜等。     

不动杆菌来源酯键水解酶生物信息学分析及PAEs降解机理

从酒醅中分离得到1株降解邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的细菌,命名为Aci-17。通过细菌16S rDNA系统发育分析,菌株Aci-17被鉴定为印度不动杆菌(Acinetobacter indicus)。为深入探讨Aci-17降解邻苯二甲酸酯类(PAEs)机理,利用基因重组技术克隆该菌株的酯键水解酶基因Est96,在大肠杆菌中异源表达获得酯键水解酶Est96。试验结果表明,该蛋白具有突出的降解PAEs能力,对邻苯二甲酸二甲酯(DMP)的降解率达到99.996%。生物信息学分析表明:Est96具有水解酶第Ⅳ家族典型保守基序G-X-S-X-G和HGGG氧阴离子孔结构,活性位点为Ser201,理论分子质量40.66 ku。根据Est96与DMP分子对接结果推测氢键、范德华力、Pi-Pi相互作用力及Est96蛋白分子的HGGG氧阴离子孔、GDSAG和HGF 3个结构域与Est96催化功能密切相关。本研究结果对明晰不动杆菌酯键水解酶催化PAEs生物降解机理提供参考。     

海洋源乳杆菌抑菌物质的研究

为判定从海鱼肠道分离出的乳酸菌产生的主要抑菌物质,从4种海鱼肠道中分离出的41株菌株中筛选出16株过氧化酶试验阴性、革兰氏染色阳性的杆菌,初步认定为乳杆菌属细菌。以大肠杆菌为指示菌,采用牛津杯琼脂扩散法研究16株杆菌对大肠杆菌的拮抗效果,筛选出抑菌性能较强的6株杆菌,菌株的抑菌圈直径分别为13.73、14.77、13.71、12.84、13.63 mm和13.65 mm,6株菌编号为S_2-4、S_2-6、Y_3-1、H_2-4、B_2-4和B_2-10。6株菌对金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌和沙门氏菌都有不同程度的抑制作用,其中S_2-6和Y_3-1抑菌效果最强,对所有指示菌的抑菌圈直径都超过14 mm。通过试验最终判定出6株杆菌的抑菌物质为酸或细菌素。经过16S rDNA全长序列分析,最终将菌株B_2-4、H_2-4、S_2-4鉴定为米酒乳杆菌(Lactobacillus sakei),菌株S_2-6和Y_2-1被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。     

中式熟食咸鸡主要细菌的分离与初步鉴定

采用嗜冷菌选择性培养基和含盐选择性培养基对咸鸡微生物菌群进行分离筛选。根据细菌的菌落形态、革兰氏染色反应等常见特征,由嗜冷菌选择性培养基分离出6 株菌C1～C6,含盐选择性培养基分离出4 株NaCl 胁迫条件下细菌S1～S4。提取单菌落DNA,对其16S rDNA 序列进行PCR 扩增后测序,结合形态、常规生理生化特性初步鉴定为：松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)C3,土生克雷伯氏菌(Klebsiella terrigena)C6,不动杆菌属(Acinetobacter sp.)C1、C2、C4、C5;日勾维肠杆菌(Enterobacter gergoviae)S1,表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)S2、S3,假蕈状芽孢杆菌(Bacillus pseudomycoides)S4。     

肠杆菌和不动杆菌混菌发酵提升山东烟叶品质机制研究

采用肠杆菌(Enterobacter cloacae F8-2)和不动杆菌(Acinetobacter nosocomialis 7S-2)混菌发酵山东烟叶,对发酵前后烟叶的感官品质与化学成分、烟气化学成分及烟叶表面微生物群落变化进行研究。结果表明：肠杆菌和不动杆菌按照体积比1∶1混合发酵24 h时,烟叶香气增加、杂气降低最为明显;发酵后烟叶中甲基庚烯酮、二氢大马酮、5-甲基糠醛分别增加了89.22%、35.67%、33.93%,烟气中橙花醇、茄酮、金合欢醇分别增加了78.01%、46.83%和45.95%;混菌发酵对烟叶表面细菌群落有较大影响,微生物间协同发酵、互利共生,同时肠杆菌和不动杆菌可能与苯甲醛、甲基庚烯酮等香气物质的生成有关。     

酸奶中保加利亚乳杆菌的分离和鉴定

利用MRS琼脂培养基对保加利亚乳杆菌进行分离，分别挑取可疑茵落进行革兰氏染色，对镜检结果为革兰氏阳性菌，且细菌形状为杆状的菌种进行糖发酵试验生物化学鉴定。结论：在MRS琼脂培养基上，菌落较大、透明、灰白色，镜检细菌形状为杆状，麦芽糖和七叶苷发酵试验均为阴性，乳糖发酵阳性的菌种，即为保加利亚乳杆菌。     

低糖腌制韭菜根中优势腐败菌的分离与鉴定

以胀袋变质的低糖腌制韭菜根为材料,对贮藏过程中的主要腐败微生物进行分离筛选与鉴定。利用纯培养法共筛选出菌落形态差别较明显的优势细菌菌株4株,经形态学观察、革兰氏染色、生理生化鉴定及16S rRNA序列分析鉴定确定了各菌株的种属。结果发现,腌韭菜根中的主要致腐菌由1株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、1株巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、1株解淀粉芽孢杆菌(Paenibacillus amylolyticus)和1株莴苣不动杆菌(Acinetobacter lactucae)构成。     

一株葡聚糖酶产生菌的分离选育及鉴定

利用葡聚糖平板初筛,三角摇瓶复筛,从土壤样品中中分离得到一株葡聚糖酶高产菌株P5,发酵酶活力可以达到2.5U/mL。菌株呈长杆状、革兰氏染色阳性、产芽孢;生理生化实验结果表明该菌株与枯草芽孢杆菌最为相近;16S rDNA基因序列包含1510个碱基对,同源性分析显示该菌株与枯草芽孢杆菌菌株最为相近,最高相似性为99%,基于16S rDNA基因序列的系统发育分析显示,该菌株与枯草芽孢杆菌菌株CD-6及YPM8的亲缘关系最近,根据以上多相分类结果鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。     

基于高通量测序分析不同品种水牛生乳中细菌多样性

目的 利用16S rRNA高通量测序研究广西水牛研究所种畜厂内摩拉、尼里-拉菲及三品杂3品种水牛生鲜乳中的细菌多样。方法 提取当天采集的生水牛乳样本细菌总DNA,PCR扩增细菌的16S rDNA,纯化PCR扩增目的片断,将PCR产物与pMD18-T载体连接,构建其菌群的16S rDNA文库。用Miseq对其16S rRNA基因的V3-V4可变区进行测序以及BLAST比对。结果 3品种27个样本共获得1223个OUTs, M、N、S独有的OTU分别为295、41和42,共有OTU为511。物种组成与丰度差异显示：3品种优势菌门为：变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)。优势菌属为：金黄杆菌属(Chryseobacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、乳球菌属(Lactococcus)、假单胞菌属(Pseusomonas)。样本层级聚类显示：3品种样本间菌落组成相似度较高。PCA与PLS-DA分析表明：3品种样本组内菌群多样性差异不显著,但组间菌群丰度差异明显。结论 摩拉、尼里-拉菲及三品杂水牛生鲜乳中细菌菌群均呈现较丰富的多样性,其共有的优势菌群为金黄杆菌(Chryseobacterium)、不动杆菌(Acinetobacter)、乳球菌(Lactococcus)、假单胞菌(Pseusomonas)。各品种间菌群组成种类整体相似,但其主要菌落丰富度差异明显。     

促熟干酪的非发酵剂乳酸菌筛选及其对干酪浆模型蛋白质降解的研究

从中国传统发酵食品酸菜中分离筛选促进干酪成熟的非发酵剂乳酸菌,并研究其对干酪浆蛋白质降解的影响。应用ROGOSA琼脂从东北农家酸菜中分离菌株,采用多元统计分析法进行复筛,通过16S rDNA基因序列分析鉴定筛选菌株,最后研究筛选菌株对干酪浆蛋白水解特性的影响。结果表明:从酸菜中筛选出一株可以促进干酪成熟的非发酵剂乳酸菌S-1,经16S rDNA基因序列分析鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum ST-Ⅲ),此菌株产酸能力低,具有较高的自溶度与氨肽酶活力,在干酪浆模型成熟过程中表现出较强的蛋白水解能力。     

PCR结合生理生化鉴定对冷藏带鱼主要细菌菌相组成分析

将传统的微生物生理生化鉴定技术与16S rDNA分子生物学方法相结合,并通过系统发育树分析,对冷藏带鱼贮藏期间的主要细菌组成比例进行研究。样品在(4±1)℃贮藏,分别于不同贮藏时间取样,对各个阶段的微生物菌落进行分离纯化、形态观察和部分生理生化鉴定,对最终得到的细菌纯培养物直接提取DNA,作16SrDNA PCR扩增,产物经测序后于NCBI与已知序列进行相似性比对,最终得到13株具有典型特征的纯菌株。结果得出,冷藏带鱼在货架期终点时,其主要微生物的种类与所占比例依次为:腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens 34.7%)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens 14.5%)、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri 10.2%)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila 8.2%)、弧菌(Vibrio rumoiensis 6.1%)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida6.1%)、绿色气球菌(Aerococcus viridans 4.1%)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus 4.1%)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus 4.0%)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa 2.0%)、嗜冷杆菌(Psychrobacter sp.2.0%)、成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans 2.0%)、约氏不动杆菌(Acinetobacter johnsonii 2.0%),其中腐败希瓦氏菌为带鱼冷藏期间的主要优势腐败菌,假单胞菌在带鱼冷藏过程中的所占比例大小依次为荧光假单胞菌>恶臭假单胞菌>铜绿假单胞菌。     

Photobacterium phosphoreum caused a histamine fish poisoning incident

An incident of histamine fish poisoning (HFP) occurred due to the consumption of iwashi maruboshi (dried sardine) in Osaka, Japan in March 2002. A histamine-producing bacterial strain, YS4-7, was isolated from iwashi maruboshi that contained 1700 mg of histamine per kilogram. This strain was identified as Photobacterium phosphoreum by biochemical examinations and partial sequencing of 16S rDNA. P. phosphoreum YS4-7 showed greater capability as a histamine producer at 4 and 12 degrees C than Morganella morganii JCM 1672. Strain YS4-7 produced 546 mg of histamine per kilogram in a sardine homogenate stored for 12 h at 20 degrees C. M. morganii, Raoultella planticola and Hafnia alvei have been isolated from fish implicated in HFP incidents, whereas this is the first report of P. phosphoreum being the causative bacterium in a sporadic case of histamine food poisoning.     

Cold-active lipolytic activity of psychrotrophic Acinetobacter sp. strain no. 6

A lipolytic bacterium, strain no. 6, was isolated from Siberian tundra soil. It was a gram-negative coccoid rod capable of growing at 4 degrees C but not at 37 degrees C and was identified as a psychrotrophic strain of the genus Acinetobacter. Strain no. 6 extracellularly produced a lipolytic enzyme that efficiently hydrolyzed triglycerides such as soybean oil during bacterial growth even at 4 degrees C; it degraded 60% of added soybean oil (initial concentration, 1% w/v) after cultivation in LB medium at 4 degrees C for 7 d. Thus, the bacterium is potentially applicable to in-situ bioremediation or bioaugumentation of fat-contaminated cold environments. We partially purified the lipolytic enzyme from the culture filtrate by acetone fractionation and characterized it. The enzyme preparation contained a single species of cold-active lipase with significant activity at 4 degrees C, which was 57% of the activity at the optimum temperature (20 degrees C). The enzyme showed a broad specificity toward the acyl group (C8-C16) of substrate ethyl esters.     

台湾乳白蚁纤维素降解菌的分离和鉴定

该研究从广西柳州本地的台湾乳白蚁（Coptotermes formosanus）体内筛选一株纤维素降解菌,通过形态观察、生理生化试验以及分子生物学对其进行鉴定,并采用滤纸片法及3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定该菌株的纤维素酶活力。结果表明,筛选获得一株可在以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的培养基上生长的菌株,命名为BW,并鉴定其为约氏不动杆菌（Acinetobacter johnsonii）;菌株BW的纤维素酶活力最高,为（93.73±0.22）U/mL。     

经辐照杀菌的无菌袋中耐辐照微生物分离与鉴定

对某番茄酱生产企业提供的辐照杀菌（辐照剂量≥15 kGy）的5 L无菌袋进行菌落计数、分离和鉴定。3 L无菌水反复漂洗,滤膜过滤后进行平板菌落计数,分离纯化后采用16S rDNA和dnaJ序列分析分别鉴定到属和种。结果表明,5 批次的样品中均有细菌检出,数量在5～132 CFU/袋,9 个典型菌落经过16S rDNA序列分析后,分别属6 个属,其中栖水菌属（Enhydrobacter）、不动杆菌属（Acinetobacter）和考克斯菌属（Kocuria）各1 株,微球菌属（Micrococcus）、微杆菌属（Microbacterium）和芽孢杆菌属（Bacillus）各2 株;dnaJ序列分析则将一株葡萄球菌C8-3鉴定到种-表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）。辐照杀菌的无菌袋虽然微生物数量不高,但是依然残留了一些耐辐照的细菌,它们或多或少会给内装食品带来一定的食品安全隐患或影响食品保质期。     

新疆阿勒泰地区酸奶疙瘩中乳酸菌的分离和鉴定

从新疆阿勒泰地区牧民制作的传统酸奶疙瘩中分离、筛选出菌株SA,通过过氧化氢酶试验阴性初步确定其为乳酸菌,对菌株SA进行菌落和细胞形态、生理生化特征及16S rDNA基因序列分析及系统进化树分析。结果表明,分离菌株SA与Weissella cibaria KACC 11862 AEKT01000037聚为一类,其同源性为99%,故将其鉴定为食窦魏斯氏菌（Weissella cibaria）。其最佳生长条件为40 ℃、pH 6.0,并且能够耐受3%的NaCl。     

Biodegradation of n-alkylcyclohexanes by co-oxidation via multiple pathways in Acinetobacter sp. ODDK71

The degradation of alkylcyclohexane by Acinetobacter sp. ODDK71 was investigated. Strain ODDK71 degraded alkylcyclohexanes (alkyl side chain length of > or = 12) by co-metabolism when hexadecane was used as a growth substrate. GGMS analysis of co-metabolized products from dodecylcyclohexane suggests that strain ODDK71 degraded dodecylcyclohexane via a ring oxidation and an alkyl side chain oxidation pathways. The ring oxidation pathway of dodecylcyclohexane is a novel pathway of microbial degradation of dodecylcyclohexane.     

一株蛋白酶产生菌的分离鉴定

从郑州奶牛场土壤样品中分离到一株芽孢杆菌,命名为A—19菌株。该菌株有较高的蛋白酶活性,37℃、pH7．0培养48h后,其蛋白酶活力可达63．5U/mL。菌体生长专性需氧,有运动性,粗糙型菌落,氧化酶试验阳性,DNA（G＋C）的摩尔分数为47％。该菌株的16SrDNA序列与芽孢杆菌属有很高的同源性,Bacillus vallismortis（99．61％）,B．subtilis（98．81％）,B．amyloliquefaciens（98．95％）,B．licheniformis（97．93％）。通过其生理生化特征和16S rDNA序列相似性的系统发育分析,确定A—19菌株属于芽孢杆菌属。该菌的16S rDNA序列已被GenBank收录,序列登陆号为EU561347。