紫苏粕抗氧化活性肽的制备及其糖基化修饰的研究

以紫苏粕为原料经石油醚脱脂,碱溶酸沉法提取蛋白,超声波复合酶法制备蛋白肽,美拉德反应进行糖基化修饰,以DPPH自由基清除率为考察指标,采用单因素试验优化紫苏蛋白肽的制备工艺,响应面分析试验优化糖基化产物制备的最佳工艺条件。结果表明,超声波3 min,功率500 W,辅助木瓜蛋白酶水解3 h,制得蛋白肽的DPPH自由基清除率达到96.70%;选取葡萄糖和蛋白肽的质量比值为1、pH 9.0、100℃下反应4 h,反应后的糖基化产物DPPH自由基清除率可达59.32%;以葡萄糖和蛋白肽的质量比值为1.25、90℃下反应4 h, DPPH自由基清除率达85.55%,为糖基化产物的最佳工艺条件。紫苏蛋白制备的抗氧化活性肽和糖基化产物均具有较高的抗氧化活性,蛋白肽经糖基化修饰后抗氧化活性显著提高。     

糖基化改性对酪蛋白酶解产物抗氧化活性的影响

为了提高酪蛋白酶解产物的抗氧化活性,将酶解产物分别与葡萄糖、木糖、果糖进行糖基化改性。在酶解产物与糖质量比为12的条件下,研究改性条件对产物抗氧化活性的影响。结果表明,酶解产物与木糖、果糖改性后的产物,在pH 7.0时羟基自由基清除率达到最大,分别为38.63%,32.82%（均高于对照）;pH 7.0时,葡萄糖、木糖糖基化产物的还原能力最强。随着反应温度升高,酶解产物与3种糖的糖基化产物的抗氧化活性不断增强,在120,130 ℃时,3种糖的糖基化产物的羟基自由基清除率和还原力均高于对照。在反应4 h时,酶解产物与木糖、果糖及葡萄糖糖基化后的羟基自由基清除率都达到最大（分别为66.57%,83.33%,42.00%,均高于对照）,还原力最大分别为1.12,1.14,1.05（均高于对照）。糖基化改性可以提高酪蛋白酶解产物的抗氧化活性,其中酶解产物与木糖的糖基化产物的抗氧化活性最高,其最佳糖基化反应条件为pH 7.5、温度130 ℃、时间4 h。     

红凤菜多肽的制备及其美拉德反应产物的抗氧化性能研究

目的 优化红凤菜蛋白提取工艺并制备活性多肽,对多肽进行改性,探讨产物的抗氧化性能,深入开发其蛋白资源。方法 结合超声波和高剪切技术,用响应面法优化提取红凤菜中的蛋白质,采用酶解法制备多肽并进行糖基化改性,且研究其抗氧化性能。 结果 最优条件为料液比1:47.3 (g:mL),300 W超声波处理20 min,高剪切6次,提取温度为46.7 ℃,提取时间2.5 h,提取液pH 8.40时,此时蛋白提取率为79.64%,接近响应面预测值。用蛋白酶水解红凤菜蛋白制备活性肽,以抗氧化性能为指标筛选合适的酶并优化酶解条件。用超滤膜加压过滤对水解产物进行分级,分级产物中,Mw＜1 kDa的多肽抗氧化性能最佳。红凤菜多肽与木糖进行美拉德反应后,对1,1二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基的清除率分别为87.65%、80.65%,比改性前提高了7.99%和11.37%。结论 本方法的蛋糖基化产物的抗氧化效果好。     

英国红芸豆蛋白抗氧化肽的分离纯化及体外活性研究

芸豆具有很高的开发利用价值,而有关芸豆蛋白抗氧化肽的制备和抗氧化活性研究较少。本文以英国红芸豆蛋白为材料,用碱性蛋白酶水解芸豆蛋白质,通过超滤、葡聚糖凝胶Sephadex G-25柱层析对芸豆蛋白水解液进行分级。研究结果表明:得到6种抗氧化活性肽,平均分子质量分别为11 407.75,5 214.35,4 821.70,3 311.31,375.66和119.78 u。其中,平均分子质量为3 311.31 u的肽的DPPH清除率、总抗氧化能力、抗超氧阴离子自由基能力、抑制羟自由基能力均最大,分别为215.31,251.64,181.59 U/mg蛋白,与VC的抗氧化能力接近。英国红芸豆蛋白质被碱性蛋白酶水解时,相对分子质量集中在3 000～5 000 u的肽抗氧化活性较高。     

外源氨基酸修饰的类蛋白反应对鸡肺抗氧化肽结构与功能的影响

天然生物活性肽往往功能特性和热稳定性差。为改善鸡肺肽的抗氧化能力和热稳定性,采用胃蛋白酶和外源氨基酸参与的类蛋白反应对鸡肺抗氧化肽进行处理。利用高效液相色谱测定反应前、后的分子量变化,利用紫外光谱、荧光光谱、X射线衍射图谱、扫描电镜对反应前、后物质的性质进行表征,通过傅里叶变换红外光谱、圆二色光谱分析蛋白质二级结构的变化。结果表明,添加3%的半胱氨酸处理后其DPPH·自由基清除率、Fe2+螯合能力和·OH清除率分别提升了51.85%,31.11%、31.30%,热变性温度从122.06℃提至136.15℃。类蛋白反应使产物的分子量和表面疏水性增大。紫外和荧光光谱表明氨基酸微环境的变化改善了抗氧化活性。X射线衍射图谱显示类蛋白反应发生后样品主衍射峰变宽,强度降低。扫描电镜结果表明反应涉及分子的水解与再聚合。红外光谱和圆二色光谱结果显示：多肽分子舒展,疏水基团暴露,这可能是多肽抗氧化能力改善的原因。综上,类蛋白反应改变了蛋白质的二级和三级结构,从而有效改善了生物活性肽的抗氧化能力与热稳定性。     

大黄鱼内脏抗氧化肽的稳定性研究

本文旨在研究大黄鱼抗氧化肽在不同条件下的抗氧化稳定性。通过凝胶排阻色谱选择抗氧化活性较强的组分,并采用DPPH自由基清除率以及Fe2+螯合力来评价大黄鱼抗氧化肽的抗氧化活性。在中性p H、常温、低浓度Na Cl以及适量K+,Ca2+,Al3+条件下,大黄鱼抗氧化肽抗氧化活性基本保持稳定,DPPH自由基清除率和Fe2+螯合力分别维持在88.5%和66.7%左右。在高浓度盐、高温、Fe2+,Fe3+,Cu2+等离子的引入和长时间紫外辐照下,大黄鱼抗氧化肽抗氧化活性下降超过30%。另外,酸性p H、70℃下加入葡萄糖、果糖、乳糖分别将大黄鱼抗氧化肽DPPH·的清除活性提高至90%左右,相反,碱性条件有利于大黄鱼抗氧化肽螯合Fe2+活性,说明处理过程对不同抗氧化指标的影响有所差异。此外,胃蛋白酶消化处理对大黄鱼抗氧化肽抗氧化活性影响不显著,而进一步的糜蛋白酶消化却显著降低了多肽的抗氧化稳定性。因此,合理的加工、贮藏工艺有利于维持大黄鱼抗氧化肽的稳定性。     

美拉德糖基化对玉米蛋白粉双酶水解产物抗氧化活性的影响

利用复合蛋白酶和碱性蛋白酶协同作用于玉米蛋白粉,将得到的双酶水解产物与壳寡糖进行美拉德糖基化反应,研究不同蛋白浓度下的酶解物和糖基化产物的抗氧化活性。结果表明,酶解物和糖基化产物都具有良好抗氧化活性,美拉德糖基化反应可以提高酶解物的抗氧化活性。当糖基化产物蛋白浓度为5.00 mg/mL时,其·OH清除率和DPPH·清除率分别达到了90.91%和61.75%,蛋白浓度为1.00mg/mL时,Fe~(2+)螯合能力为83.42%,比酶解物·OH清除率和DPPH·清除率分别提高了48.78%和32.26%,Fe~(2+)螯合能力提高了22.63%。     

反应温度对鸡骨蛋白酶解液美拉德产物光谱特性和抗氧化活性的影响

以鸡骨蛋白酶解液和半乳糖为反应体系,研究了反应温度对其美拉德产物(MRPs)褐变程度、中间产物生成、荧光光谱与体外抗氧化活性的影响。结果表明,反应温度是影响鸡骨蛋白酶解液MRPs光谱特性和抗氧化活性的重要因素,100℃条件下该体系反应的褐变程度最高,中间产物生成量最多,且具有更高的DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率和还原能力。此外,褐变程度、中间产物生成量与鸡骨蛋白酶解液MRPs的DPPH自由基清除率和还原力之间具有良好线性关系。     

油莎豆粕抗氧化肽的制备及其稳定性研究

采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对油莎豆粕蛋白质进行复合酶解制备油莎豆粕抗氧化肽,以DPPH自由基清除率为指标,确定制备油莎豆粕抗氧化肽的最佳条件。此外,评价了油莎豆粕抗氧化肽的体外抗氧化活性和稳定性。结果表明,制备油莎豆粕抗氧化肽的最适条件为碱性蛋白酶：木瓜蛋白酶=1∶1,酶的质量分数5%、底物质量浓度46 mg/mL、酶解温度61.7℃、酶解pH 6.7、酶解时间2.5 h,在此条件下,DPPH自由基清除率为88.45%。油莎豆粕抗氧化肽的体外抗氧化活性优良,当油莎豆粕抗氧化肽为5 mg/mL时,DPPH·清除率达88.69%、·OH清除率为42.57%、O■清除率为39.17%、ABTS自由基清除率达87.98%,还原能力为0.2627。油莎豆粕抗氧化肽具有热稳定性及冻融稳定性,在酸性和中性条件下稳定,但不耐受碱性条件,经胃肠消化后,活性下降比较明显。     

英国红芸豆蛋白抗氧化肽酶解工艺的研究

以英国红芸豆为原料,研究芸豆蛋白质抗氧化活性肽的酶解工艺。首先以水解度和总抗氧化能力为评价指标进行酶的筛选,并采用单因素及正交实验设计优化酶解工艺。结果表明,碱性蛋白酶对芸豆蛋白水解能力最强,酶解产物的抗氧化能力最高;最佳酶解条件为底物浓度5.0%,温度55℃,加酶量4000 u/m L,p H10,时间2 h,该条件下总抗氧化能力高达186.97 U/mg pro,英国红芸豆活性肽显示出较强的抗氧化活性。     

鸡腿菇多糖羧甲基修饰及其抗氧化性研究

以鸡腿菇多糖为原料,用溶媒法制备羧甲基鸡腿菇多糖(CSPC),研究反应介质、氯乙酸、氢氧化钠、反应时间、反应温度等因素对羧甲基鸡腿菇多糖取代度的影响。以取代度为指标,确定鸡腿菇多糖羧甲基修饰的最佳工艺条件：鸡腿菇多糖0.5g,反应介质为异丙醇,氢氧化钠7.5g、氯乙酸6.0g,反应温度55℃,反应时间 5h。在该优化条件下,羧甲基鸡腿菇多糖取代度达0.989。对羧甲基鸡腿菇多糖进行体外抗氧化活性研究,结果表明：与修饰前的鸡腿菇多糖相比,羧甲基鸡腿菇多糖清除羟自由基以及超氧阴离子自由基的能力有很大提高。     

不同聚合度葡萄皮原花青素的抗氧化活性

以葡萄皮原花青素为原料,采用溶剂沉淀法根据聚合度进行分级处理。分光光度法测定了不同聚合度葡萄皮原花青素对DPPH.自由基和亚硝酸钠的清除能力,并与VC、BHT进行了比较。结果表明:葡萄皮原花青素对DPPH.自由基和NaNO2清除率与其浓度成正相关,其最大清除率分别为94.61%,92.56%。随着聚合度的增加,其清除能力下降。     

牛肉水解液的制备及其抗氧化活性的研究

以牛肉为原料,采用四种蛋白酶进行酶解效果比较;通过预煮、微波和超声波三种预处理的观察,根据对酶解效果的影响来选择最好的预处理方法;并探讨了复合酶所制备的牛肉水解液抗氧化活性的效果。其结果表明:当采用复合酶酶解牛肉蛋白时,酶底物浓度比(E/S)为462 414 U/g、温度60℃、pH4．5、水解时间5h、底物浓度8%,抗氧化活性效果最好。     

Fru-Gly化合物的合成条件优化及其抗氧化活性

在单因素的基础上,利用响应面法对葡萄糖和甘氨酸反应体系合成1-脱氧-1-L-甘氨酸-D-果糖(Fru-Gly)的合成条件进行优化,并对其抗氧化活性进行研究。在不同反应时间、反应温度及葡萄糖与氨基酸不同物质的量比的条件下合成Fru-Gly化合物,比较不同反应条件对反应体系生成Fru-Gly化合物的浓度及其褐变程度的影响,并检测其浓度与清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基能力、清除2,2'-联氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基能力、还原能力的相关性。结果表明,合成Fru-Gly化合物的最优条件为:反应时间0.9 h,反应温度79℃,葡萄糖和甘氨酸物质的量比3.25∶1,此时样品的3种抗氧化活性均最强。相关性分析表明,Fru-Gly化合物的浓度与DPPH自由基清除力、ABTS自由基清除力以及还原力互为极显著正相关,且相关性系数均大于0.96。     

猪皮胶原蛋白酶解及其酶解产物的抗氧化活性

以新鲜猪皮为原料,利用Alcalase水解胶原蛋白,并对影响Alcalase水解过程的各个因素进行研究,通过对水解度和超氧阴离子自由基(O2－ ·)清除率的测定,确定Alcalase水解猪皮胶原蛋白的最适条件;研究在最适条件下制备的不同质量浓度的猪皮胶原蛋白酶解液对DPPH自由基和O2－ ·的清除效果。结果表明：Alcalase水解猪皮胶原蛋白的最适条件为：pH7.5、温度55℃、酶与底物比6000U/g、底物质量浓度40mg/mL,水解时间4h;在此水解条件下,水解度达到9.55%,O2－ ·清除率达到60.11%;在相应质量浓度10～50mg/mL范围内,猪皮胶原蛋白酶解液的DPPH自由基最大清除率为95.06%,IC50为3.89mg/mL;O2－ ·最大清除率为65.89%,IC50为16.43mg/mL。猪皮胶原蛋白酶解液具有较强的自由基清除能力。     

葡萄籽原花青素的聚合度与抗氧化活性关系

采用亚油酸体系和脂质体体系研究葡萄籽原花青素不同聚合度组分的抗氧化活性。结果表明,葡萄籽原花青素具有很强的抗氧化能力,在亚油酸及脂质体体系中,原花青素的抗氧化活性高于VC和VE,并且随着浓度的增加其抗氧化能力与合成抗氧化剂BHT相近。聚合度对原花青素抗氧化作用的影响较大,单体对脂质体体系的抗氧化活性低于二聚体,对于聚合体而言,原花青素对亚油酸体系和脂质体体系的抗氧化作用均随着聚合度的升高而降低。     

鹅肉蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

运用响应面(RSM)分析对鹅肉蛋白酶解工艺条件进行优化。在单因素试验基础上,以抗氧化活性为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、pH值、固液比、酶添加量对鹅肉蛋白水解度和抗氧化活性的影响。结果表明:鹅肉蛋白最佳酶解条件为酶解温度53℃、酶解液pH10.5、固液比1:3(m/V)、酶解时间7.2h,加酶量1200U/g,在此条件下,酶解液对Fe3+还原力为0.402,水解度可达34.74%。     

石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及其抗氧化性

以冰鲜石斑鱼肉为原料,采用碱性蛋白酶酶解的方法制备蛋白肽。以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用正交试验设计优化肽的制备工艺;利用DPPH自由基法、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid）ammonium salt,ABTS）自由基法、羟自由基（·OH）法和铁氰化钾还原法评价酶解物的抗氧化性。结果表明：石斑鱼肉肽的最佳制备条件为：酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶用量5 000 U/g、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h;石斑鱼肉肽酶解物具有较强的抗氧化性,清除DPPH自由基能力、ABTS+·能力、·OH能力和总还原力均随酶解物质量浓度的增加而增强;酶解物清除DPPH自由基、ABTS+·、·OH的半抑制浓度（IC50）值分别为（1.18±0.26）、（0.89±0.05） mg/mL和（0.35±0.02） mg/mL。     

氢氧化钠降解原花青素的聚合度及抗氧化活性分析

以霞多丽葡萄籽为研究对象,采用氢氧化钠降解高聚原花青素,通过单因素实验和响应面法优化降解工艺。分析不同处理及最佳降解工艺条件下样品的平均聚合度、原花青素含量、不同组分变化及DPPH、ABTS自由基清除能力。结果显示,最佳降解工艺条件为氢氧化钠浓度4.40%、处理时间31 min、处理温度59℃,在此条件下,高聚原花青素的平均聚合度从5.71降至2.37;原花青素含量增加了1.68倍;单体、ECG和二聚体峰面积分别增加了14267.50、28304.00、52998.33,总峰面积增加了1.80倍。DPPH、ABTS自由基清除能力分别提高了2.41倍和2.19倍。综上,葡萄籽原花青素经氢氧化钠降解后获得强抗氧化活性的低聚原花青素,为酿酒副产物葡萄籽中高聚原花青素开发利用提供了理论依据,具有一定的实际应用价值和意义。     

洋葱蛋白及多肽的制备及其体外抗氧化活性评价

对洋葱蛋白、4种不同水解度的粗洋葱多肽、4种分子量范围的纯化多肽组分的水解度、分子量、氨基酸组成、DPPH·清除能力进行了研究。结果表明,洋葱蛋白酶解后分子量大幅降低,必需氨基酸组分和支链氨基酸组分均有所提高,DPPH·清除能力大幅提高,且与水解度成正比;在4种水解度的粗洋葱多肽的纯化组分中,P-III(分子量为1~5kDa)的DPPH·清除能力均为最强,这归功于其合适的分子量分布。该研究为洋葱的高值化利用提供了理论依据。