幽门螺杆菌耐药研究进展

目的了解国内外幽门螺杆菌(HP)耐药的研究进展状况。方法综合国内外HP耐药研究文献,分析HP的耐药特点、产生耐药的分子机理及避免HP耐药的策略。结果不同国家和地区分离出的HP菌株对咪唑类、大环内酯类、β-内酰胺类均已产生不同程度的耐药,耐药菌株的产生可能与其自发突变或其遗传信息的传递有关。结论采用规范化治疗、严格掌握HP根除治疗的适应症及联合应用抗生素与铋剂或PPI将会避免HP耐药菌株的产生。     

口服重组幽门螺杆菌疫苗冻干工艺的优化

目的优化口服重组幽门螺杆菌疫苗的冻干工艺,以降低冻干过程中制剂瓶的破瓶率。方法通过改变冻干工艺中预冻、升华干燥、解析干燥阶段的工艺参数,对12批口服重组幽门螺杆菌疫苗进行冻干试验,在保证样品外观、水分、p H值及无菌检查合格的前提下,以制剂瓶的破瓶率为指标筛选最优冻干工艺。结果口服重组幽门螺杆菌疫苗的最优冻干工艺条件为:预冻期2 h内冷冻至-45℃并维持4.5 h;升华干燥时阶段性升温,总历时34 h;解析干燥时28℃维持12 h。按此工艺冻干后的口服重组幽门螺杆菌疫苗样品的外观、水分、p H值及无菌检查均在合格范围内,且制剂瓶的破瓶率为0。结论优化后的口服重组幽门螺杆菌疫苗冻干工艺稳定可靠,为今后的大规模生产奠定了基础。     

幽门螺杆菌疫苗的研究进展

幽门螺杆菌是慢性胃炎和消化性溃疡乃至胃癌的主要致病菌,在人群中感染率较高,世界卫生组织已将其列为I类致癌因子。目前对幽门螺杆菌的联合药物治疗由于费用昂贵、病人依从性差、抗生素耐药等原因受到一定限制,为了有效控制幽门螺杆菌感染,疫苗的研发逐渐成为幽门螺杆菌研究领域的热点,疫苗接种是防治幽门螺杆菌感染最有前景的方法。本文综述了幽门螺杆菌疫苗的研究及其应用。     

应用环糊精代替血清培养幽门螺杆菌

目的　应用环糊精代替培养基中的血清和血液衍生物培养幽门螺杆菌。方法　将同样菌量的细菌接种于 2种布氏培养基中 (分别含 0 .1%环糊精和 7%小牛血清 ) ,培养 3d和 6d后 ,分别检测其A值 ,计算细菌浓度。将取自患者的胃粘膜标本接种于上述培养基上 ,6d后观察其分离培养效果。结果　含 0 .1%环糊精培养基的细菌生长浓度略高于其他配方的培养基。 2 4个胃粘膜标本在 2种培养基上的分离效果完全相同。结论　用环糊精代替培养基中的血清和血液衍生物 ,能够用于从胃粘膜中分离培养和大量培养幽门螺杆菌     

HpaA蛋白在幽门螺杆菌感染诊断中的应用

目的建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,探讨以重组蛋白作为抗原在诊断H.pylori感染中的价值。方法将从临床分离菌株中获得的HpaA基因在大肠杆菌中表达,用Ni2+-NTA柱纯化表达的HpaA作为抗原,建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,与诊断标准比较评价其应用的可行性。结果经超声破碎后,用SDS-PAGE分析显示,HpaA蛋白主要存在于上清中,纯化抗原检测临床标本中HpaA抗体的敏感性和特异性分别为100.0%和90.1%。结论以重组蛋白为抗原初步建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法敏感性、特异性高,为制备商品化的试剂盒奠定了基础。     

冻干保护剂在活疫苗生产中的应用进展

冻干是疫苗研发及制备过程中的关键技术,在疫苗冻干及储藏过程中疫苗的化学成分、冻结温度和速率、干燥温度及干燥固体中剩余水分、储藏环境的温度和湿度等均会对疫苗的活性产生影响。为防止疫苗在冻干过程中活性组分的变性,需添加合适的冻干保护剂,可尽量减少冻干及储藏过程对疫苗活性造成的损伤。本文就几种常见冻干保护剂的保护机理及应用、筛选方法与面临的挑战及其未来的发展趋势作一综述。     

幽门螺杆菌口服疫苗的研究进展

幽门螺杆菌 (ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉＨｐ)感染可引起许多胃十二指肠疾病 ,包括Ｂ型 (胃窦 )胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织 (ＭＡＬＴ)淋巴瘤和胃癌。Ｈｐ在全世界人群中的慢性感染率达 5 0 %以上。目前Ｈｐ感染的治疗方案是采用抗菌素加上质子泵抑制剂、Ｈ2 受体阻断剂的三联方案。但由于治疗费用昂贵 ,患者依从性差 ,耐药菌株的出现及发展中国家Ｈｐ感染率不断增高的事实 ,说明三联方案根治Ｈｐ感染不切实际。人类控制其他传染性疾病的经验启示我们 ,免疫预防 ,治疗可能是控制Ｈｐ感染及其后果的唯一方法。疫苗治…     

幽门螺杆菌长期感染小鼠腺胃模型的建立

取Ⅱ级C57BL／6小鼠及Ⅲ级BALB／c小鼠各40只,随机分为两组。实验组接种Hp（SydneyStrain1,SS1）菌液0．4ml／只（约109／ml）,连续5次,1周完成,而对照组则不作相应处理。距最后一次接种4、8、12及24周（BALB/c16周）分别处死两组动物各5只。取胃粘膜组织分别进行尿素酶试验、Hp培养、改良Gimesa染色和HE染色来评价SS1在不同品系动物的定植及病理组织学改变。结果4周时所有实验组动物胃窦、胃体Hp检查均阳性,SS1主要定植于胃窦的胃小凹及腺腔,胃体较少;定植量随感染时间的延长有增加的趋势,至24周时仍有明显定植;C57BL／6小鼠定植量高于BALB／c小鼠,对照组动物未有Hp定植。病理组织学检查,在4周时各组动物均未见炎症反应,从第8周至24周（BALB／c16周）两品系小鼠的胃窦及胃体均出现轻至中度慢性活动性胃炎改变,但C57BL6／小鼠的炎症细胞浸润较BALB／c小鼠重。在本实验周期未见有萎缩性炎症改变,对照组动物未见有炎症反应。说明SS1Hp可长期定植于BALB／c及C57BL／6小鼠腺胃,引起慢性活动性胃炎改变。     

幽门螺杆菌过氧化氢酶基因克隆及表达

目的 克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)过氧化氢酶(katA)基因并在大肠杆菌中进行表达。方法 采用PCR扩增幽门螺杆菌katA全长基因,将其克隆入pET-11c载体中,经测序证实后,在大肠杆菌中进行表达,产物用Western blot检测其抗原性并进行N末端氨基酸的测序。结果 幽门螺杆菌katA基因全长1 518bp,编码氨基酸505个。在BL21(DE3)中的表达量约占细菌总蛋白的24.9％,表达产物经SDS-PAGE显示其相对分子质量与软件预测结果 58 000相符,N末端5个氨基酸测序结果与Hp中天然的katA完全一致,经Western blot检测可被 Hp全菌抗血清识别。结论 katA能在大肠杆菌中进行高效表达,具有良好的免疫反应性,可望为研究 Hp的致病机理、实验诊断及亚单位疫苗等提供充足的katA原材料。     

幽门螺杆菌尿素酶的纯化和鉴定

幽门螺杆菌超声波上清经DEAE SepheroseFastFlow和PhenylSepheroseCL 4B两步柱层析得到纯化的Hp尿素酶 ,免疫印迹显示有良好的抗原性。在pH8.0和 45℃条件下酶比活约为 2 6 5U mg ,SDS PAGE显示有 6 0 0 0 0和 30 0 0 0两个亚单位。经两步柱层析纯化后 ,Hp尿素酶回收率为 30 % ,纯化倍数达 11倍。连续纯化 3批显示工艺稳定 ,为Hp尿素酶基础研究和应用奠定基础。     

幽门螺杆菌HpaA蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

目的 制备幽门螺杆菌(H.pylori)HpaA蛋白单克隆抗体,并检测其对H.pylori黏附胃腺癌细胞AGS的抑制作用。方法应用PCR法扩增HpaA基因,构建重组表达质粒pQE30-HpaA,表达并纯化重组HpaA蛋白;以其为抗原免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,采用间接ELISA和Western blot法检测单抗的特异性,间接ELISA检测细胞株培养上清和腹水抗体效价,并对其进行亚型鉴定和杂交瘤细胞株稳定性分析;扫描电镜观察重组HpaA蛋白单抗对H.pylori黏附AGS细胞的抑制作用。结果重组表达质粒pQE30-HpaA经双酶切、PCR及测序证明构建正确;表达的重组HpaA蛋白相对分子质量约为30 000,可溶性蛋白含量约占65%,纯化后纯度达85%以上;经细胞融合及筛选克隆获得了2株能稳定分泌抗HpaA单抗的杂交瘤细胞株,2株单抗与其他肠道细菌均无交叉反应,能与H.pylori全菌体发生特异性反应;乳胶凝集试验证明,该单抗属IgG3、κ型;2株单抗细胞培养液的抗体效价分别为1∶128～1∶256和1∶64～1∶128,腹水抗体效价分别可达1∶6 400～1∶12 800和1∶1 600～1∶3 200;杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代,仍能稳定分泌高效价抗体;单抗可抑制H.pylori对AGS细胞的黏附作用。结论已成功制备了H.pylori HpaA蛋白单克隆抗体,为建立新的H.pylori现症感染诊疗方法奠定了基础。     

幽门螺杆菌在胃癌发生过程中的发病机制

幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌发生存在显著相关性,1994年世界卫生组织国际癌症研究机构正式将Hp列为第一类生物致癌因子。Hp感染后胃癌发生率增加4～9倍,且60%胃癌患者有Hp感染。胃癌的发生是多因素共同作用的结果,包括感染、环境因素、营养状况、饮食和遗传等。本文简述Hp感染在胃癌发生过程中的发病机制。     

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)冻干保护剂的筛选

目的筛选适用于冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的冻干保护剂。方法用同一批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液在同一冻干条件下,改变右旋糖酐40、海藻糖及人血白蛋白3种保护剂主要成分的含量,组合成6种保护剂配方,分别制备成半成品。冻干后检测成品外观、疫苗效力及热稳定性,确定最佳冻干保护剂配方。以最佳保护剂配方制备6批成品进行适用性验证,并选择3批成品进行长期稳定性验证。结果确定最佳冻干保护剂的配方为4%海藻糖、3%右旋糖酐40、1%蔗糖、0.5%甘露醇、2%人血白蛋白。以该配方制备的6批成品的各项检测指标均符合《中国药典》三部(2010版)的要求,其中3批成品经2~8℃保存12个月后的效价较稳定。结论筛选获得了最佳冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的冻干保护剂,且具有良好的稳定性。     

甲型肝炎减毒活疫苗冻干保护剂的研究

目的 研究冻干甲型肝炎减毒活疫苗的保护剂。方法 甲型肝炎病毒L-A-l株经2BX二倍体细胞培养,制备成甲型肝炎减毒活疫苗,再添加不同保护剂进行冷冻干燥。结果 以山梨醇、蔗糖、脂肪酸盐等为主的保护剂,对甲型肝炎减毒活苗病毒显示了较好的保护性,疫苗冻干前后感染滴度下降在1.0Log CCID50/ml以内,符合《中国生物制品规程》要求。结论 以山梨醇、蔗糖、脂肪酸盐等为主的保护剂是一种安全性较高、疫苗冻干效果较好,适合于疫苗规模化生产的保护剂。     

不同预处理方法建立幽门螺杆菌感染动物模型的比较

目的 确定感染率高且稳定的幽门螺杆菌感染动物模型预处理方案。方法 取蒙古沙鼠200只,随机分为3个实验组及1个对照组。实验组沙鼠在断食、水12h后分别应用pH2盐酸、消炎痛+胃复安和50％乙醇3种不同方案进行预处理,对照组用生理盐水处理。此后继续断食、水12h,再灌喂Hp菌液（109cfu/ml）0.5ml/只。共3次,每次间隔12h。最后1次灌喂后2h给食、水。后每隔4周解剖一批动物,每组10只,进行分离培养、ELISA、PCR、快速尿素酶检测和病理切片检查。结果3组实验动物感染率不同,其中50％乙醇组沙鼠感染率相对较高,达到80％,其病理组织学变化与人体相应病变也极为相似。结论50％乙醇组沙鼠预处理方案感染效果最好,可作为Hp感染动物模型的预处理方法。     

幽门螺杆菌全菌抗原对母鸡的免疫原性

目的　研究幽门螺杆菌 (Hp)全菌抗原的免疫原性及Anti Hp IgY的预防和治疗作用。方法　用超声Hp波粉碎的Hp抗原免疫产蛋母鸡 ,通过IHA和ELISA间接法检测母鸡的免疫应答。用SDS PAGE分析Hp全菌抗原 ,并用抗Hp IgY做免疫印迹。结果　母鸡免疫成功率为 10 0 %。初免 45d后 ,抗Hp IgYIHA效价为 1∶10 2 4,ELISA效价超过 1∶45 0 0 0。Hp抗原的SDS PAGE显示有 2 6条蛋白染色带 ,其中主带有 10条 ,免疫印迹表明Hp的超声粉碎物特异性抗原蛋白带相对分子质量为 70 0 0 0、6 6 0 0 0、42 0 0 0、3430 0、2 95 0 0、2 70 0、185 0 0。结论　本研究为工业化制备抗Hp IgY奠定了基础     

抗幽门螺杆菌黏附素蛋黄抗体与HP1188蛋黄抗体在小鼠体内防治幽门螺杆菌感染的比较

目的比较抗幽门螺杆菌黏附素(Helicobacter pylori adhesin A,HpaA)蛋黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY)(HpaA-IgY)及抗H.pylori HP1188 IgY(HP1188-IgY)在BALB/c小鼠体内预防和治疗H.pylori感染的最低浓度,并评价治疗效果。方法 Western blot鉴定HpaA-IgY及HP1188-IgY抗原特异性。制备1×109 CFU/mL H.pylori菌液,将BALB/c小鼠随机分为阳性对照组(灌喂H.pylori菌液0.5 mL)、阴性对照组(以布氏肉汤替换H.pylori)、预防组(先灌喂1、3、5 mg/mL HpaA-IgY或HP1188-IgY及PBS各1 mL,再灌喂H.pylori菌液0.5 mL)、治疗组(先灌喂H.pylori菌液0.5 mL,再灌喂1、3、5 mg/mL HpaA-IgY或HP1188-IgY及PBS各1 mL)。处理完成后,取各组小鼠胃组织进行H.pylori培养、快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT)及组织学检查,观察H.pyl...     

幽门螺杆菌感染与Barrett食管的临床分析

本文对幽门螺杆菌感染与Barrett食管的关系进行了临床分析,资料来源于我院胃镜室2001年1月至2006年12月进行上消化道胃镜检查的人群,方法是统计数据分析,结果是检出率为0.2%,略低于文献报道。     

牛抗幽门螺杆菌抗体的免疫印迹分析

目的 分析牛抗幽门螺杆菌抗体(Helicobacter pylori,Hp)针对幽门螺杆菌标准株NCTC11637菌体蛋白的特异性免疫反应条带。方法 按多克隆抗体常规制备技术制备牛抗Hp抗血清,以饱和硫酸铵粗提,DFAE-32柱层析纯化牛IgG,纯化抗体用辣根过氧化物酶标记。将超声粉碎及高速离心的菌体蛋白进行SDS-PAGE电泳,Westem blot分析牛抗Hp-IgG的特异性免疫反应条带。结果 NCTC11637菌体蛋白可见13条清晰分离之蛋白条带,主要条带相对分子质量为66 000、54 000、45 000、30 000和27 000。免疫印迹显示8条免疫反应条带,主要染色条带按染色深浅及宽窄依次为27 000、23 000、30 000、31 000和24 300,其中66 000、54 000和45 000免疫反应性较弱。结论 牛抗Hp特异性抗体包含针对多种菌体蛋白成分的抗体,分布广泛,是制备口服抗体的较好选择。     

幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的制备

目的研制高效价、高特异性的抗细胞空泡毒素VacA的鸡蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌(H.pylori)治疗性抗体奠定基础。方法用纯化的重组细胞空泡毒素抗原免疫22周龄洛曼产蛋母鸡,取免后所产鸡蛋,将蛋黄稀释、离心,收集上清,加硫酸铵沉淀。以ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测蛋白含量,SDS-PAGE法检测相对分子质量及纯度。结果母鸡初次免疫后76d,抗体效价达到1∶6400,最高可达1∶12800。蛋黄抗体经纯化浓缩后,用SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度可达80%以上,其含量为25·66mg/ml。结论已成功制备了抗重组细胞空泡毒素的特异性蛋黄抗体。