CA_(125)时间分辨荧光免疫分析

以CA12 5单克隆抗体固相包被 ,用平衡饱和法与CA12 5、Eu3+标异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 -CA12 5单抗形成三层夹心 ,以 β -二酮体为增强液 ,建立CA12 5的时间分辨荧光免疫分析法。数据采用Logit-Log函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。方法的批内和批间CV分别为 4 .5%和 4 .0 % ,平均回收率 96.7% ,灵敏度 3.3μg L ,可测范围为 16— 2 0 62 μg L。本法与CEA无交叉 ,与AFP有 4 .6%交叉 ,与 β -HCG有 12 .4 %交叉。测定结果与进口IRMA试剂盒相比较 ,相关系数为 0 .999,结果呈高度相关。     

铁蛋白时间分辨荧光免疫试剂盒的研制

铁蛋白是人体内第二个含铁量最丰富的含铁蛋白。铁蛋白所含铁可因机体的需要而被动员和利用。人体血清中含有微量铁蛋白,它反映肝脏贮铁量,体内贮铁总量和机体营养状态,是检测缺铁及铁负荷过多疾病的有效指标。检测血清中铁蛋白有利于诊断缺铁性贫血,血清铁蛋白也是肿瘤标志物之一。铁蛋白与其他有关检测配合,可提高恶性肿瘤的检出率。采用双抗夹心二步法检测血清中铁蛋白的浓度,是将一株抗体包被于微孔板上,另一株配对抗体与DTTA- Eu连接作为示踪剂,标准品或样品中铁蛋白先与固相抗体反应,再加入示踪剂。增强液将铕离子解离到液相,与增强液中组分形成高效荧光螯合物。荧光强度与血清中铁蛋白浓度成正比。试剂盒的测量范围为2～1 000 ng/mL;灵敏度<0.05 ng/mL;批间、批内变异系数均<5%;其测量结果与Wallac试剂盒的测量结果有较好的相关性,相关系数r=0.96。     

时间分辨荧光免疫分析和放射免疫分析测量精度的比较

采用时间分辨荧光免疫分析和放射免疫分析法对血清样品进行分析，对其加样精度，测定精度和系统精度进行了比较。结果表明：（1）血清加样时，手动加样CV＞3．4％，自动加样CV＜0．7％，P＜0．001，试剂加样时，手动加样CV＞1．3％，自动加样CV＜0．3，P＜0．001。（2）测量精度，放免法CV＝2．4％，时间分辨法CV＝0．8％，P＜0．001。（3）系统精度，放法CV＝3．6％，时间分辨法CV＝1．3％，P＜0．001。以上结果提示：时间分辨荧光免疫分析在加样精度，测定精度和系统精度上都显著优于放射免疫分析。     

激光—时间分辨荧光技术在免疫分析中的应用——尿中白蛋白荧光免疫分析

一、时间分辨荧光免疫分析的特点在过去20多年中,超微量分析技术-放射免疫分析在医学和生物学领域内发挥了重要作用,但放免的固有缺点需操作放射性、药盒的使用寿命短(与放射性标记物半衰期短有关)促使人们去找寻非放射性标记的免疫分析技术。用荧光基团作为标记物的荧光免疫分     

黄曲霉毒素B1的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光技术建立了高灵敏的黄曲霉毒素B1(AFB1)间接竞争免疫分析法(AFB1-TRFIA).以AFB1-BSA为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗AFB1抗体;AFB1与辣根过氧化酶的联结物(AFB1-HRP)包被96孔板为固相抗原,与游离AFB1共同竞争有限的抗AFB1抗体;用稀土离子Eu3 标记的羊抗兔抗体进行示踪.该方法的灵敏度为0.01μg/L,测量范围为0.01-100μg/L,批内和批间变异分别为4.1%和6.8%,平均回收率为97.2%,与黄曲霉毒素B2的平均交叉反应为10%左右;黄曲霉毒素G2、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B及HRP基本不干扰本方法对AFB1的检测.8条不同时间进行的AFB1-TRFIA的效应点值ED80、ED50、ED20分别为(0.07±0.01)μg/L、(0.63±0.02)μg/L和(12.5±0.47)μg/L.比较AFB1-TRFIA和AFB1-ELISA检测AFB1,两者的相关系数为0.917.研究表明,AFB1-TRFIA是目前报导的AFB1检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.     

CA125单克隆抗体的制备及其初步应用

利用CA125抗原免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,建立分泌抗CA125抗体的杂交瘤细胞株。将CA125单克隆抗体应用到化学发光免疫分析和免疫放射分析方法中,病理值的测定结果和进口试剂盒测定值相关方程分别为y=0.85x+11.1,r＝0.932和y=0.87x－12.8,r＝0.983;正常血样测量值范围分别为3.3～26.7和1.5～27.0U/mL。CA125单克隆抗体制备的包被板和包被管在37℃下可稳定存放14d,且不影响分析结果。     

肿瘤标志物CA125免疫放射分析试剂盒的研制

采用两株CA125单克隆抗体,一株用于125I标记,另一株包被于试管作为固相抗体,稀释卵巢癌患者腹水制备标准品,建立了双位点夹心法人血清肿瘤标志物CA125免疫放射分析法.标准曲线的最大标准点免疫结合与零标准非特异结合之比大于100;最小检测限为1.0 U/mL;批内、批间变异系数分别为 4.4%～5.8 %和8.4%～9.9 %;样品中加入已知量CA125测定,回收率为96.8%～112.5%;对含高浓度CA125的血清样品稀释测定,结果表明方法的健全性良好.38例健康女性血清样品测定值范围为2.9～24.1 U/mL;±2s为9.6±9.6 U/mL.     

丙型肝炎病毒抗体时间分辨免疫荧光分析及应用评价

为建立抗-HCV的时间分辨免疫荧光分析法（IFMA）、以HCV抗原包被微孔板,样品中的抗-HCV、Eu^3 标记羊抗人IgG形成夹心,以β-二酮体为增强液,数据采用Log-Logit函数和四参数Logistc函数数据处理程序处理。结果表明,方法的批内和批间CV分别为3.64%和4.39%,平均回收率105.58%,可测范围为1.01-17.34NCV/mL,灵敏度为0.03NCU/mL。本法与HBsAg有0.23%的交叉,与HBeAg有0.04%的交叉。278例正常对照组血清抗-HCV浓度均小于1NCU/mL。结果提示,高度灵敏、稳定的抗-HCV IFMA方法的建立为临床和科研工作提供了一种非放射性标记定量检测分析的方法。     

人血清CA15-3免疫放射分析法的建立

一株CA15-3单克隆抗体用于^125I标记，另一株CA15-3单克隆抗体包被试管作为固相抗体，建立了双位点夹心肿瘤标志物CA15-3免疫放射分析法。CA15-3标准品以CIS公司免疫放射分析药盒标准品校正。最小检测限为0.4U／mL；批内、批间变异系数分别为6．0％～6．2％和4．1％～5．9％；样品中加入已知量CA15-3测定，回收率为86．8％～118．6％；高浓度CA15-3的血清样品系列倍比稀释后测定，实测值和计算值呈线性相关，相关系数大于0.99；38例健康女性血清样品测定值为5．7～23．7U／mL。     

CEA、CA19-9、CA72-4、MG-Ag单项及联合检测对诊断胃癌的临床价值

选用CEA，CA19－9，CA72－4，MG－Ag四项肿瘤标志物，应用IRMA进行单项及联合检测，从而为胃癌的早期诊断提供依据，检测结果表明：单项检测阳性率均＞70％，但以MG－Ag阳性率最高（90．4％），次为CA72－4（84．2％），两两组合进行双项联合检测，按双阳性分析，结果显示MG＋CA72－4组合阳性率最高（70．6％），MG＋CA19－9组合次之（64．6％），因此，单项筛选检测，首先MG－Ag；双项组合检测首选MG＋CA72-4为宜，随访可按组织学类型选用适宜的双项组合检测法。     

COMPARISON OF VARIOUS CORRELATION ON IRMA FOR CA19-9 AND CA50 IN THE DIGESTIVE SYSTEM TUMOUR

This paper compared various correlation of IMRA for CA19-9 and CA50 in the digestive system tumour antigen, such as linearity, sensitivity, analytical range, precision as well as storage and stability and so on. And it also determined serum level of CA19- 9 and CA50 of patients with different tumours. The results showed it was well correlated to CA19- 9 and CA50 as a marker of digestive system tumour. Particularly high levels of both markers were found in patients with pancreastic colonic cancer. Therefore it is possible to obtain a higher sensitivity and acceptable specificity by combination with CA19-9 and CA50.     

^125I标记氧化低密度脂蛋白抗体

采用Iodogen法对氧化低密度脂蛋白抗体（OxLDL—Ab）进行了^125I标记,并对标记条件进行了优化;采用PD-10柱对标记抗体进行分离纯化,并对^125I-OxLDL—Ab的体外稳定性和活性进行评价。结果表明,^125I-OxLDL-Ab标记率〉80％,放化纯度〉95％,比活度达73．3TBq／g;^125I-OxLDL-Ab分别在生理盐水、含2％BSA的生理盐水和人血清中4℃放置96h,放化纯度降低均小于5％;^125I-OxLDL—Ab在体外与OxLDL结合的Ka为10．6±1．3GL／mol。以上结果提示^125I-OxLDL-Ab体外稳定性好,与OxLDL结合活性高,^125I标记对其活性影响小,可以用于体外放免诊断试剂盒的研究。     

Na125I在碳纳米管中的填充

碳纳米管(CNTs)在经纯化、开口处理后，用Na^125I示踪，研究NaI溶液对CNTs的填充、洗涤以及它们从碳纳米管中的释放情况；用HREM、SEM、EDS对CNTs的填充情况进行了表征。结果显示CNTs管腔内有NaI填充并且在溶液中会缓慢释放出来。因此放射性核素示踪技术可以应用于CNTs的填充、释放等行为的研究。     

[125I]TZDM的制备

优良的Aβ显像剂必须对Aβ斑块有较高的亲和性,而体外竞争结合实验是筛选Aβ斑块显像剂的有效方法,实验中需要使用放射性配基[125I]TZDM。以对溴苯胺为起始原料,经过四步反应合成了[125I]TZDM的前体化合物Bu3Sn-TZDM,并通过125I进行标记制备了[125I]TZDM,标记率为62.5%。粗产物通过HPLC分离后,获得放射化学纯度大于97%的[125I]TZDM,实际产率为25%。