用暗场电镜技术观察DNA分子的超螺旋结构

随着拓扑酶的发现和深入研究,人们越来越多地注意到DNA分子的超螺旋结构在DNA复制、RNA转录及其调控过程中的重要的生物学意义。固然,对小分子环状DNA分子,可以经凝胶电泳把超螺旋数不同的分子区分开来,然而核酸电镜技术却能给出更为直观、准确的超螺旋分子的图象,成为超螺旋分子研究的重要实验手段,而暗场核酸电镜技术又较明场技术显出更大的优越性。按常规方法小心提取大肠杆菌质粒DNA PBR_(322)并分别制备用于暗场和明场观察的DNA样品,在     

分子克隆过程中基因组DNA的电镜观察技术的研究

为了尝试用电子显微镜对病毒外壳蛋白基因克隆过程中基因组ＤＮＡ的检测，我们采用电镜大分子展层技术制备电镜样品并观察了病毒外壳蛋白基因组ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增，克隆到ＰＢＳ质粒ＤＮＡ中的全过程，电镜观察表明：ＰＢＳ质粒基因组ＤＮＡ有超螺旋状、环状、或断裂成线状，长度约为１．００μｍ，外壳蛋白基因为线状，长度为０．２０μｍ，外壳蛋白基因克隆到ＰＢＳ质粒后，重组子质粒ＤＮＡ有成环状或线状，长度为１．２０μｍ。电镜观察结果与其它生化实验结果相符。     

电镜核酸分子原位杂交技术的探索

显微水平的核酸分子原位杂交技术已广泛地应用于基因在染色体上的定位,发育过程中的基因表达等方面,但电镜水平的原位杂交技术却仍在探索之中,主要因为剧烈的核酸分子杂交条件与样品精细结构的保存之间存在着矛盾,为此,我们分别在分级抽提的整装细胞,L-K_4包埋或Epon812包埋的超薄切片样品以及DGD包埋-去包埋样品中对进行电镜分子原位杂交研究的可行性和杂交条件进行了一些探索,目前在整装细胞样品中已取得初步的结果。     

一种中草药提取物对病毒DNA作用的电镜研究

我们对某种中草药的提取物进行了研究分析,认为这种中草药提取物MMC是一种蛋白活性物质。这种有效的活性蛋白在众多的中草药中并不多见。经一系列的生化,分子生物学的研究,推测它可能是对DNA发生作用。为7证实这个判断,本研究应用了电镜核酸技术。方法:将MMC与乙肝病毒质粒DNA在68℃中作用10分钟,使用细胞色素C DNA铺展技术制备样品,经铂-钯金属喷镀,电镜观察。结果:1.对照组(未经药物作用):DNA呈超盘旋形态,见图1,DNA缠绕紧密,个小。2.实验组(药物作     

应用电镜及电镜原位杂交法观察和分析SARS-CoV在人体细胞内的定位

本文通过电镜及电镜原位杂交方法,观察和分析SARS患者外周血淋巴细胞和SARS尸体解剖肺组织内的SARS CoV病毒颗粒的分布,并对SARS CoV病毒颗粒进行定性鉴定。在SARS患者外周血淋巴细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞内均发现了SARS CoV病毒样颗粒,直径大小80～120nm,圆形或椭圆     

DNA单分子的纳米定位切割与拾取研究

报道了一种对DNA单分子进行精细的纳米定位切割和拾取的技术。首先用分子梳技术将DNA拉直固定在经3-氨基丙基三乙氧基硅烷修饰的云母基底上，然后通过精细控制原子力显微镜针尖与DNA样品之间的作用力，实现了对DNA链的定位切割和拾取。这种方法不仅可制备应用于临床遗传诊断和致病基因的定位等多种的微小DNA探针．而且有望发展为一种基于纳米操纵技术的DNA有序化测序策略。     

应用电镜放射自显影技术研究病毒DNA的复制及宿主细胞内RNA的转录

应用电镜放射自显影技术研究了鸭瘟病毒(DPV)DNA复制及宿主细胞内RNA的转录功能,并扼要报导了我们的主要实验结果: 1.DPV的DNA合成是在核内电子密度较低的均匀基质中进行的,随后,转移到电子致密的毒浆结构中装配病毒核壳体。从病毒DNA复制到发育成熟的病毒仅需3小时。 2.DPV的DNA复制的持续时间较长。病毒DNA的复制与核壳体的装配及病毒的成熟与释放可同时进行。 3.DPV在细胞核内装配,也可在细胞质内装配。 4.宿主细胞的核仁依然存在,并保持其转录RNA的功能。     

电镜技术在耳形态学研究方面的应用

自本世纪 30年代电子显微镜技术建立以来 ,特别是 5 0年代建立了生物组织超薄切片技术以后 ,病理形态学研究逐渐深入到亚细胞领域或分子水平。近 2 0年来 ,电镜技术在耳形态学观察、爆震性聋、老年性聋等方面开展工作 ,并取得一些成果 ,现分述如下。1 .电子显微镜技术建立和完善了内耳常规扫描电镜样品制备技术 ,在此基础上进行技术改进 ,能够同时用一侧颞骨制备完整的耳蜗和前庭两个囊斑及三个壶腹嵴的扫描电镜观察样品。获得了极佳的观察效果。由于内耳结构精细复杂 ,取出标本后极易受损变形 ,给制备透射电镜样品带来一定困难 ,我们在常规…     

应用电镜技术对病毒混合感染的研究

有证据表明 ,一些严重影响畜牧业发展威胁畜禽健康的主要疾病在临床症状 ,病理变化和致病性等方面都发生了一些不同于经典型病例的改变 ,例如潜伏期缩短 ,康复期推迟 ,死亡率增加 ,病理变化严重等等。这些后果的产生除了病原本身可能会发生的变异或是出现新的病毒株之外 ,另一个重要的原因就是混合感染。混合感染无疑会对疾病的诊断和治疗产生十分不利的影响。到目前为止 ,在临床上广泛应用的各种血清学方法都是针对一种病原的 ,要对多种病原的混合感染做出准确的诊断是一件很麻烦的事。应用电子显微镜技术对病毒混合感染进行检测具有其它方…     

微波技术在诊断电镜标本制备中的应用

电镜作为某些疾病的病理检查手段 ,已为广大医务工作者所熟知。但电镜样品的常规制备方法周期较长 ,影响及时诊断。近年来 ,我们将微波照射作为常规技术应用于电镜标本制备 ,进行了大量的工作。结果表明 ,该方法不仅大大缩短了样品制备时间 ,而且用这种方法制备的样品的超微结构完全可以满足电镜诊断要求 ,现已成为本室诊断样品的常规技术。材　　料选用 National NN- 6 80型微波炉 ,分 HI,DEF,MEDHI,MED档 ,样品包括各种肿瘤组织 ,肝 ,肾 ,肺 ,软骨 ,及游离细胞 (血细胞 ,培养细胞 )。1 .标本固定固定液用 4%多聚甲醛 ,或 3%戊二醛 …     

染色技术在聚合物相态结构电镜研究中的应用

染色技术在聚合物相态结构电镜研究中的应用李金树陈锡花邹本三（北京燕山石油化工研究院，北京１０２５５０）电子显微镜在化学化工领域的应用是相当广泛的，尤其是近年来随着电镜技术的不断发展，许多电镜工作者的注意力已经转移到高分子领域，而且在这方面的研究论文也...     

应用电镜技术对牛流行热病毒形态学的研究

牛流行热病毒(BEFV)属于单股负链病毒目(Mononegavirales)、弹状病毒科(Rhabdoviridae)、狂犬病病毒属(Lyssavirus)成员。该病毒能引起牛流行热(又称牛暂时热或三日热),对养牛业造成很大的经济损失。本研究使用的材料是培养在BHK_(-21)细胞上的牛流行热病毒。应用负染色、超薄切片等方法制备样品,JEM-1200EX型电镜观察。通过电镜观察和研究,得出以下结果:1.病毒的基本形态,呈锥形(图1,2)、弹形(图3,4,5)、窝窝头形(图5)。大小为180X85nm。典型结构,外有囊膜,该囊膜是由纤突和病毒膜构成,内有螺旋对称的核衣壳(图4,5)。     

电镜技术在病毒性肝炎诊断和研究上的应用

本文综述了电镜技术在甲、乙、丙、丁和戊型病毒性肝炎，包括新发现的数种病毒性肝炎诊断和研究上的应用情况，并简介了有关材料来源和处理及标本制备技术。资料显示，电镜技术在各型病毒性肝炎的发现，证实及病因研究上起重要作用。     

新一代单分子DNA纳米孔测序技术问世

9月26日《自然-纳米技术》网络版上发表的一项研究,介绍了加州大学圣塔克鲁斯分校研究人员与牛津纳米孔技术有限公司合作发明的新一代电子单分子DNA测序技术。     

应用电镜原位杂交技术与免疫标记技术研究膀胱上皮细胞的分化

本文应用电镜原位杂交技术与免疫标记技术相结合，在超微水平上对ＡＵＭ蛋白及其ｍＲＮＡ在细胞中的分布进行定性与定位的研究。结果显示ＡＵＭ蛋白的基因从小鼠膀胱上皮中间层细胞开始表达，从而为膀胱上皮细胞的分化提供了确凿的证据。     

应用Fe3+在裸云母表面制作DNA分子的AFM样品的方法

原子力显微镜(AFM)既是观测生物大分子的有力工具,也是生物单分子操纵的有力工具.脱氧核糖核酸分子(DNA)是记栽了生物信息的重要生命分子,同时也是在分子器件领域具有极大潜力的天然纳米材料.利用AFM对DNA分子观察和操纵时,制样是关键.云母具有原子级平整的表面可作为观测DNA分子时的基底,但由于其表面负电性而不能和DNA分子很好地结合,所以通常需要对云母进行表面修饰.本文给出一种通过加入适量三价铁离子溶液在裸云母表面制作DNA样品的方法,可取代传统的云母表面修饰.该制样方法既可应用到基于AFM技术的DNA分子的形貌观察,也可应用在基于AFM技术的对DNA的单分子操纵.     

应用免疫电镜技术对烟草试管苗中病毒的鉴定

马铃薯病毒源,即作为抗血清抗原其浓度和纯度,直接关系到利用ELISA等方法鉴定马铃薯茎尖脱毒试管苗实验的可靠性和灵敏度。黑龙江省马铃薯研究所建立的用烟草试管苗保存毒源的方法,虽可使马铃薯病毒源在试管中长期生长和保存,但烟草试管苗经过数次转接后,常使其病毒浓度和纯度发生变化。为提高抗血清质量,当保存的毒源试管苗作为制造抗血清的抗原,最好先用免疫电镜直观测出它们的浓度和纯度。试验方法试验用复合抗血清Anti TMV+Anti PVX+Anti PVY制作免疫电镜样品对PVX_1、PVX_2、     

表面铺展技术在联会复合体电镜研究中的应用

本文较详细地介绍了本室改进的表面铺层－硝酸银染色制备联会复合体（SC）电镜样品技术。取小鼠睾丸组织制成细胞悬液，取少量悬液滴在0．4％KCl液珠表面上以通过表面张力使SC铺展开，用涂有Formvar膜的载玻片蘸取细胞，干燥后用多聚甲醛固定，硝酸银染色，光镜下找到要观察的细胞，然后转移到50目铜网上，电镜下既可看到整个SC核,,地可观察同源染色体的联会过程，SC的超微结构及各种类型的SC畸变，该技术可广泛应用于细胞遗传学，遗传毒理学，生殖生物学等诸多学科。     

激光技术在分子束外延中的应用

激光具有波长选择范围宽，强度高和方向性好等优点，已在许多科学技术领域发挥了重要的作用。近年来，激光又被用于分子束外延（ＭＢＥ）技术中，并取得了很大进展。本文论述了在ＭＢＥ薄膜生长中，激光气体离化原位分子束组分监测，激光溅射产生外延分子束源以及这些新技术在材料生长中的应用。