牛副流感病毒3型血凝素-神经氨酸酶蛋白在杆状病毒中的表达

目的在杆状病毒中表达牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type-3,BPIV-3)血凝素-神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase,HN)。方法提取BPIV-3 BN-1株RNA,设计特异性引物扩增HN全长ORF,将其克隆至杆状病毒供体载体p Fast Bac HTA中,获得重组供体质粒p Fast Bac-HN。将p Fast Bac-HN转化至感受态细胞E.coli DH10Bac,制备穿梭质粒Bacmid-HN。将纯化的Bacmid-HN经脂质体转染至Sf21昆虫细胞,拯救重组杆状病毒,并进行Western blot鉴定。结果经PCR及测序鉴定证明,HN基因重组供体质粒p Fast Bac-HN及穿梭质粒Bacmid-HN构建正确。利用Sf21昆虫细胞成功拯救重组杆状病毒,连续传代扩增3代的病毒滴度为2×108 CPE/ml。重组HN蛋白的相对分子质量约70 000,可与BPIV-3阳性血清发生特异性反应。结论在杆状病毒表达系统中成功表达了BPIV-3重组HN蛋白,为BPIV-3的诊断及疫苗效力评价奠定了基础。     

重组人降钙素原蛋白基因在sf9细胞中的表达

目的利用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac system)在sf9细胞中表达重组人降钙素原蛋白(procalcitonin,PCT)。方法将PCT基因克隆至转移载体pFastBacTM1中,构建重组转移载体pFB-PCT,将其与野生型多角体病毒Bacmid同源重组,获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-PCT,采用脂质体转染法将鉴定正确的重组杆状病毒穿梭质粒转染sf9细胞,收获P1杆状病毒Bac-PCT,经扩增获得P3代杆状病毒,感染sf9细胞,Western blot法检测重组PCT的抗原活性。结果重组杆状病毒穿梭质粒经PCR及测序鉴定证明构建正确;已成功转染人sf9细胞,P3杆状病毒滴度为1.2×108pfu/ml;重组人PCT可被小鼠抗降钙素原单克隆抗体特异性识别,在相对分子质量约13 000处可见特异性条带。结论已在sf9细胞中成功表达重组人PCT,表达产物具有抗原性。     

应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在蚕蛹中表达狂犬病病毒糖蛋白

目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在蚕蛹中高效表达狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)糖(G)蛋白。方法从狂犬病病毒CVS-11株总RNA中扩增G基因片段,插入供体质粒pFastBacⅠ-G中,构建重组供体质粒pFastBacⅠ-G,转化大肠杆菌DH10Bac,构建重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-G,将其转染BmN细胞,获得含G基因的重组杆状病毒。将重组病毒感染蚕蛹,收集血淋巴,进行Western blot分析。结果重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-G经PCR鉴定证明构建正确;狂犬病病毒糖蛋白在重组杆状病毒感染的BmN细胞中和蚕蛹中获得正确表达,在蚕蛹中表达的重组蛋白可与His标记的单克隆抗体和狂犬病病毒阳性血清特异性结合。结论成功构建了重组狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒,并在蚕蛹中获得了表达,表达产物具有良好的抗原性。     

人APOBEC3H hap Ⅱ在昆虫表达系统中的表达及其纯化

目的构建重组人APOBEC3H hapⅡ(A3H hapⅡ)杆状病毒表达载体,在昆虫细胞表达系统中表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化。方法采用PCR方法扩增A3H hapⅡ基因并加入His标签后,克隆至杆状病毒转移载体p Fast Bac1中,转化E.coli DH10Bac感受态细胞进行重组,构建质粒Bacmid-A3H hapⅡ-His。将质粒转染昆虫细胞sf9获得P1病毒,扩增后获得P3病毒,感染sf9细胞表达目的蛋白,并进行Western blot鉴定。经Ni-NAT树脂亲和层析柱对表达的蛋白进行纯化,并通过免疫共沉淀试验检测A3H hapⅡ-His与其相互作用蛋白HIV-1 Vif之间的特异性结合。结果成功构建了质粒Bacmid-A3H hapⅡ-His;P3病毒感染sf9细胞后成功表达出相对分子质量约20 000的目的蛋白,且能够与HIV-1 Vif特异性结合。结论成功建立A3H hapⅡ昆虫表达体系,为进一步研究A3H hapⅡ与HIV-1 Vif之间的相互作用机制,并针对其相互作用位点设计抗HIV药物奠定了基础。     

截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白在昆虫细胞中的表达

目的利用昆虫细胞杆状病毒表达系统构建含截短型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)58型主要衣壳蛋白L1基因的重组杆状病毒,并在Sf9细胞中表达。方法从NCBI中获得HPV 58 L1基因序列,应用Clustal X2软件进行序列比对后,确定相对保守的目的基因序列;人工合成HPV 58 L1基因片段,PCR法获得截短型HPV58 L1-1基因,克隆至p Fast Bac-1载体中,构建重组供体质粒p FB-HPV 58 L1-1,转化大肠埃希菌DH10Bac,构建重组Bacmid-HPV 58 L1-1,转染Sf9细胞,获得第1代(P1)重组杆状病毒BV-HPV 58 L1-1,扩增后采用快速滴定法测定病毒滴度;将重组杆状病毒感染Sf9细胞,表达HPV 58 L1-1蛋白,并进行Western blot分析和透射电镜观察。结果Bacmid-HPV 58 L1-1经PCR及测序鉴定构建正确;P2重组杆状病毒的滴度可达1.0×108 pfu/ml;HPV 58 L1-1在Sf9昆虫细胞中的表达产物经Western blot检测,可见相对分子质量约55 000的特异性反应条带,电镜观察可见L1蛋白自组装形成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。结论成功在昆虫细胞中表达了HPV 58 L1-1蛋白,并自组装为VLPs,为预防型HPV疫苗的研究奠定了基础。     

新城疫病毒F_(48)E_8株 HN基因在杆状病毒系统中表达

目的 采用新型杆状病毒表达系统(Bac to Bac系统)在昆虫细胞Sf-9中进行新城疫病毒F48 E8株HN基因表达。方法NDV F48 E8株 HN基因插入到转座载体 pFast Bac Ⅰ,构建重组转座载体 pFast HN,转化到感受态细胞 DH10后,将目的基因转座到穿梭载体Bacmid中,经筛选获得重组Bacmid HN转染到Sf-9昆虫细胞,并进行检测。结果 表达产物经SDS-PAGE、Westem blot检测获得蛋白特异带,相对分子质量约63000。结论NDVF48E8株HN基因能通过新型杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf-9中进行表达,表达量约为细胞总蛋白的10％。     

中蜂囊状幼虫病毒VP1基因在杆状病毒表达系统中的表达

目的利用杆状病毒系统表达中蜂囊状幼虫病毒(chinese sacbrood virus,CSBV)结构蛋白VP1基因。方法提取感染CSBV的中蜂囊状幼虫总RNA,RT-PCR法扩增VP1基因,克隆至载体pFastBacI中,构建重组转座质粒pFastBacI-VP1,转化至感受态大肠埃希菌DHl0Bac中,获得重组杆粒rBacmid-VP1,转染至昆虫细胞sf9中,获得第1代重组杆状病毒,经透射电镜观察杆状病毒粒子;病毒连续传代3次后,RT-PCR鉴定重组杆状病毒,SDS-PAGE检测VP1蛋白的表达情况,Western blot检测表达产物的反应原性。结果重组杆粒经PCR鉴定构建正确;第1代重组杆状病毒经透射电镜观察,可见杆状病毒粒子;重组杆状病毒以M13通用引物和VP1基因特异引物进行PCR扩增,分别可见3 263和963 bp的片段,大小均与理论值一致;CSBV VP1基因能够在sf9细胞中表达,表达的重组VP1蛋白相对分子质量约31 000,可与兔抗CSBV-VP1阳性血清发生特异性反应。结论成功利用杆状病毒表达系统表达了CSBV VP1基因,为深入研究CSBV的感染机制和蜜蜂的免疫机制以及中蜂囊状幼虫病血清诊断试剂盒的研制奠定了基础。     

人MCIR基因在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的表达

目的利用杆状病毒表达系统进行人恶性黑色素瘤A375细胞MCIR基因在Sf9昆虫细胞中的表达。方法以pMD18-T-MCIR为模板，利用PCR方法扩增人MCIR基因，将MCIR基因连接到pfastBacl质粒上，与穿梭载体DH10Bac转座，获得Bacmid-MCIR质粒后，通过脂质体介导，转染Sf9细胞，使其表达重组杆状病毒，经SDS-PAGE检测表达产物，放射受体分析法检测目的蛋白MCIR活性。结果Bacmid-MCIR质粒转染Sf9细胞后的SDS-PAGE图谱，在相对分子质量为35000处有一条新生蛋白带。放射受体分析结果显示表达的蛋白与标记配体特异亲和，具有生物学活性。结论MCIR基因成功在真核细胞中得到表达。     

人MC1R基因在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的表达

目的利用杆状病毒表达系统进行人恶性黑色素瘤A375细胞MC1R基因在Sf9昆虫细胞中的表达。方法以pMD18-T-MC1R为模板,利用PCR方法扩增人MC1R基因,将MC1R基因连接到pfastBac1质粒上,与穿梭载体DH10Bac转座,获得Bacmid-MC1R质粒后,通过脂质体介导,转染Sf9细胞,使其表达重组杆状病毒,经SDS-PAGE检测表达产物,放射受体分析法检测目的蛋白MC1R活性。结果Bacmid-MC1R质粒转染Sf9细胞后的SDS-PAGE图谱,在相对分子质量为35000处有一条新生蛋白带。放射受体分析结果显示表达的蛋白与标记配体特异亲和,具有生物学活性。结论MC1R基因成功在真核细胞中得到表达。     

人源溶菌酶基因在杆状病毒系统中的表达

目的在杆状病毒系统中表达人源溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,为其临床应用和大规模生产奠定基础。方法将人工合成的含信号肽和不含信号肽的溶菌酶基因克隆至重组杆状病毒表达系统的载体中,构建重组穿梭质粒,转染sf9细胞,SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达,溶菌试验验证表达产物的溶菌酶活性。结果重组克隆质粒PFastBacHTA-signal-lysozyme和PFastBac HTA-lysozyme的PCR产物分别可见444和393 bp的目的基因条带,测序结果证实重组克隆质粒构建正确。PCR结果显示Lysozyme-1、Lysozyme-2、slysozyme-1、slysozyme-2、slysozyme-3、slysozyme-4号重组穿梭质粒可扩增出目的条带。sf9-PHLY和sf9-PHSLY的表达产物经12%SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约17 500和19 300的特异蛋白条带;表达的两种重组蛋白均可与鼠抗6×His单抗特异性结合;表达产物具有溶菌酶活性。结论成功在杆状病毒表达系统中表达了hLY基因,为其临床应用和大规模生产奠定了基础。     

空调风系统的清洗

介绍空调风系统清洗的概念和必要性,我国空调风系统清洗工程的现状．分析了存在的问题和原因。并从保护人员健康和环境出发,展望风系统清洗的前景。     

磨机系统行状态的监测体系

1.引言 磨机是水泥厂重要的粉磨设备,体积大、功率大、安装较困难,大部分磨机系统都要求连续运行,而且磨机系统运行状况的好坏直接影响水泥厂的整个生产过程及其经济效益,所以磨机系统必须十分可靠,对其运行过程中所处的状态和故障必须进行监测和预报。机器的状态监测和故障诊断技术,就是对机器进行监测分析,及早地发现设备的异常状态和故障早期征兆,并对所处状态进行识别的技术。因此,必须推行监测诊断技术,建立磨机系统的运行状态监测体系。 2.状态监测的主要内容 水泥厂的设备状态监测技术,近十几年已引起有关专家和学者的重视,并相应开展了研究[1-3],一些水泥厂家也注意到并引起了重视,但由于没有较为完善的监测体系,对于磨机系统运行中所处的状态和出现的故障还难以做到有效地监测和预报。但随着系统运行时间的增加,磨机系统的故障亦将不断地增加,迫切需要有一完善的监测体系,以保证系统安全、可靠、高效地运行。     

CPVC工业管道系统在电镀工业中的应用

氯化聚氯乙烯是加工行业管道系统的理想选择。与其他材料比较,CPVC有其卓越的性能;优异的均衡性,耐蚀性、良好的机械性能及较高的性能价格比,CPVC管道系统包括管道、管件、阀门及板材。安装简单,只需用胶水粘接。CPVC可用于电镀、金属处理、纸浆、化学工业、工业废物处理和食品及饮料工业等。同时比较了CPVC与聚丙烯的性能和化学阻抗数据。     

工厂供电系统故障诊断专家系统的设计

工厂供电系统的安全运行对工业企业来说至关重要 ,特别是对于化工企业 ,如何快速判断和切除故障非常关键。介绍了利用专家系统技术开发供电系统故障诊断系统的结构特点、主要功能 ,重点阐述了系统中推理机的构造、知识库的描述及网络图形显示、模拟倒闸操作等功能的实现。该系统是用VC ++开发成功的 ,并对用VC ++实现知识的框架结构表达做了详细的说明     

西门子自动化系统在整流控制系统中的应用

介绍了西门子S7-414HPLC自动化系统在内蒙古海吉氯碱化工股份有限公司整流控制系统中的应用及其相关软件的使用,并总结了在其应用过程中存在的问题。     

微油点火系统在我公司窑系统的应用

采用微油点火系统替代了传统的油枪点火,解决了升温期间SO2排放超标、点火油耗高及煤粉燃烧不完全导致的窑26m处结煤粉圈问题,点火总成本降低了33.57%,减少了SO2及CO2的排放,避免了环境污染,煤粉燃烧更完全,有利于窑系统安全稳定运行。     

微机控制系统在乙炔上料系统中的应用

介绍了应用微机控制系统实现生产环境恶劣的乙炔装置的自动控制，以减轻操作人员的工作强度，降低设备的故障率，保证连续稳定的生产。     

余热发电投入后窑尾电除尘系统的优化改造

泰山水泥集团有限公司5000t/d新型干法生产线的余热发电系统投产后,由于废气的质发生了变化(粉尘比电阻平均高达4×1012Ωcm以上),加上内部结构损坏等原因,使窑尾除尘器的粉尘排放高达350 mg/m3以上.后经二次技术改善,其中包括增加增湿塔喷水量以降低烟气比电阻值,更换收尘阴极振打方式和加固极板等,使窑尾电除尘器实现高效除尘的稳定运行.     

煤粉制备系统无人值守管理系统的应用

对煤粉制备系统的风险进行了分析,通过无人值守管理系统的应用,利用原有监控手段,通过加强监控和管理来实现煤粉系统的无人值守,保障了工作人员的安全.     

智能专家控制系统在水泥粉磨系统中的应用

水泥粉磨是水泥生产过程中重要的环节，水泥质量的好坏与粉磨系统的运行状况有着重大的关系，因此，对水泥粉磨系统控制问题的研究具有重要的意义。但是，由于水泥粉磨系统具有非线性、强耦合和大延迟的特性，难以建立精确的控制模型。为解决这个问题，提出了使用智能专家控制系统来控制水泥粉磨系统的生产过程。首先分析了水泥粉磨系统各个回路之间的耦合关系，并根据它们的关系将整个水泥粉磨系统的控制分解为磨机负荷控制、粒度控制等五个部分，由五个控制器相互协作来实现对系统的控制。最后我们将设计的控制系统应用于水泥生产现场，根据现场数据显示，智能专家控制系统的使用明显提高了水泥粉磨系统运行的稳定性，达到了提高产量、提升质量和降低能耗的目的。