马铃薯生淀粉糖化酶高产菌株的筛选与诱变研究

为了筛选出1株生淀粉糖化酶活力高、性质稳定的优良菌株,使用以马铃薯为唯一碳源的培养基从自然界分离出1株产马铃薯生淀粉糖化酶较强的菌种.出发菌株产酶活力为30.56U/mL,通过紫外和亚硝基胍诱变,得到突变株AS-NTG3-3,产酶活力提高到100U/mL.经初步判定,该菌株为黑曲霉.     

生淀粉糖化酶的菌种筛选及酶学研究

从自然界分离到一株高酶活性的生淀粉糖化酶菌株黑曲霉Sx。在最适产酶条件;固体培养基pH6.5,固水比1：1.6,30℃发酵24h酶活达382u/g。经纸层析鉴定酶解产物为葡萄糖。粗酶液在贮藏时,当酶液中的SDS浓度达6mg/ml时,30℃保藏10天,酶活保持不变。分析经初步分离提纯的酶的性质得：以玉米淀粉为底物时,该酶最适pH4.5,最适酶反应温度为60℃。pH4.0-7.0范围内酶活力稳定,酶具有较强的热稳定性,80℃保温1h以后,酶活力仍能保持15％。金属离子等对酶的影响为：Ag^＋、Sn^2＋对酶有强烈抑制作用;Hg^2＋、Zn^2＋、Mn^2＋、Cu^2＋有抑制作用：EDTA、Ca^2＋、Fe^2＋对酶无影响;Co^2 、K^ 有一定的激活作用。     

一株高产生淀粉糖化酶菌株的筛选与研究

通过分离和筛选,得到一株分解小麦生淀粉能力较强的黑曲霉,其生产淀粉糖化酶活力为１７１．５ｕ／ｇ,α－淀粉酶活力为６．３４７ｕ／ｇ。产酶条件的研究,发现尿素是较好的氨源,麦芽糖是理想的碳源,最适产酶初始ＰＨ值为４,最佳产酶时间为２．５－３天,该菌株对四种生淀粉的降解顺序为：糖为淀粉〉高梁淀粉〉玉米淀粉〉马铃薯淀粉。     

酒用生淀粉糖化酶产生菌的选育及酶学性质研究

以生甘薯淀粉为唯一碳源,从霉腐甘薯中分离纯化出一株产生淀粉糖化酶(RSGA)活力高、复合酶系协同作用强的菌株SP7。经形态学初步鉴定为黑曲霉。SP7经紫外线与氯化锂复合诱变,获得优良突变株SP7-2。SP7-2固体发酵产RSGA活力为3446U/g,生料酿酒酒精度为12.5%。分析初步提纯酶的性质得出:SP7-2所产RSGA对各类大、小生淀粉均有较强的水解能力,水解产物只有葡萄糖,其底物专一性顺序为玉米淀粉>甘薯淀粉>马铃薯淀粉>大米淀粉>木薯淀粉>小麦淀粉。以生甘薯淀粉为底物,最适酶解温度和pH值分别为40℃、4.0,60℃保温1h残余酶活低于5%,pH3.5时酶活力是其最适pH值条件下的90%以上,且pH3.5时室温放置1h仍保留90%以上酶活力,表明该酶有一定的热敏感性和很好的耐酸性,具有较好的工业应用前景。     

无蒸煮生淀粉糖化酶霉菌的选育

从23份土样中筛选出105株野生型霉菌，其中有10株具有较高的糖化生淀粉的能力，尤以A－4（Ⅱ）、C和E6 3株菌酶活力最高，分别达112562，825．1和825．1个酶活性单位；对C株菌进行紫外光诱变，从诱变后的菌株中筛选出有较大正向突变的两株菌株C（1）和C（5），与诱变前相比，C（1）菌的生淀粉糖化酶活力提高了27．3％，经生淀粉酒精发酵试验，相同条件下酒精度提高了22．4％；C(5) 的生淀粉糖化酶活力提高了12．1％，酒精度提高了5．97％。     

黑曲霉 G-1125生淀粉糖化酶基因的克隆与序列分析

从黑曲霉Aspergillus niger G-1125克隆到了生淀粉糖化酶菌基因的DNA及cDNA序列。序列分析表明,该生淀粉糖化酶基因组DNA 序列编码区长2 172 bp,cDNA编码区长1 923 bp,该基因含有4个内含子,共编码640个氨基酸,前18个氨基酸为信号肽序列,该氨基酸序列中共含有2个潜在的糖基化位点,软件预测出该酶的分子质量约为68 ku,等电点为pH值4.07。     

生淀粉糖化酶的研究

具有水解生淀粉能力的糖化酶的霉菌包括黑曲霉、泡盛曲霉、根霉、罗尔伏格菌和扣囊拟内孢霉等.分析了各种酶的特性及作用机理.并对应用于工业化糖化发酵的各个影响因素作了阐述.     

黑曲霉SP7-2固态发酵产生淀粉糖化酶工艺优化

实验以生淀粉糖化酶活力为考察指标,采用单因素实验结合正交设计探索SP7-2固态发酵产生淀粉糖化酶优化工艺。结果表明,麸皮为基质,复配20%(质量分数)豆饼粉,料水比1∶1. 1(g∶m L),添加0. 3%(质量分数)植酸,初始p H自然,每24 h翻抛1次,双控温培养60 h。上述条件下,30 L固态发酵罐中生淀粉糖化酶活力为7 870 U/g,是优化前的1. 31倍。该结果为生料酒曲的制备及生料酿酒提供了一定的实验数据及理论指导。     

产生淀粉糖化酶菌株的诱变选育

以黑曲霉vin-1为研究对象,通过紫外诱变（UV）和硫酸二乙酯（DES）两次诱变,获得产酶较高的菌株vin-1-24-72,酶活达到527u／g,比原始菌株提高154％,RDA％值为40％。菌株经过7次传代,酶活较稳定。     

生淀粉糖化菌的分离及产酶条件的研究

从土壤、牛瘤胃中分离到产生生淀粉梅的多种微生物，共有22株细菌、20株霉菌、1株酵母。其中黑曲霉Sx酶活达382u／g，其产酶的最适条件为：初始pH6．5，固水比为1：1．6的麸皮水培养基30℃培养24h酶活最高。     

甜高粱秸秆发酵菌种的诱变育种及其固态发酵工艺的研究

以耐酒精高活性干酵母为原始出发菌株进行60Co-γ辐射诱变处理,经逐级筛选和300g甜高粱秸秆固态发酵,确定H13为最佳诱变菌种;并对H13菌株的甜高粱秸秆固态发酵工艺进行研究,结果表明,粉碎后的甜高粱秸秆300g,5‰的菌体接种量、68％的基质含水量、36℃条件下发酵60h,乙醇产率达6.4g/100g鲜秸秆.     

从土壤中分离L-色氨酸生产菌株及其高产诱变选育的研究

根据微生物菌株生物合成L-色氨酸代谢途径的特性,设计了产色氨酸的细菌选择性分离筛选培养基,对从土壤中分离得到的832株细菌通过初筛和复筛,筛选到6株L-色氨酸产生菌株,并对其进行了初步分类鉴定,确定了这6株菌均为为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutanicum)。其中1株可产L-色氨酸0.85g/L,进一步通过NTG以及紫外线照射多重诱变育种得到苯丙氨酸和酪氨酸双重营养缺陷型与多种色氨酸结构类似物抗性突变株,遗传性状稳定,产酸量达到10.82g/L。     

产透明质酸菌的育种概况

近年发酵法生产透明质酸已成为透明质酸生产的主流,产透明质酸菌的育种技术也不断发展,本文综述了产透明质酸菌的育种概况。     

抗老化啤酒酵母菌株的诱变选育

谷胱甘肽（GSH）在啤酒中具有抗老化作用,选育高产谷胱甘肽的啤酒酵母菌株有助于改善啤酒抗老化性能。以啤酒酵母S5为出发菌株,经紫外诱变和硫酸二乙酯（DES）诱变后,获得突变株SC67,其GSH胞内生成量为15．238mg／L,胞内含量为11．292mg／g,较S5分别提高91．4％和57．8％。SC67发酵所得啤酒中胞外谷胱甘肽含量（6．43mg／L）较S5（1．35mg／L）显著提高,啤酒抗氧化性能得到明显改善,DPPH自由基清除率较s5提高1312％;TBA值下降7．1％;RSV值提高49．2％。     

L-乳酸高产菌株的诱变育种

对L-乳酸细菌(Lactobacillus casei FH2)进行诱变,得到产酸量高的突变株FH2-8-9,并与出发菌株FH2的性能进行比较,结果表明:①FH2-8-9的产酸速率明显高于FH2,且维持时间较长,具有更高的耗糖速率和糖转化率;②突变株FH2-8-9对乳酸的耐受性好,进入对数生长期的时间短,能保持更长的对数生长期,最终菌体浓度高于出发菌株FH2,FH2-8-9的菌体密度比FH2高55%.     

微波诱变选育耐热糖化酶菌株

采用微波诱变糖化酶生产菌株Aspgillus niger 3.4309,用SDS双层梯度平板进行筛选,最终得到比出发菌株糖化酶耐热性提高15～20 ℃的突变株9-1,经多次传代证明该菌株遗传性能稳定.     

微生物谷氨酰胺转胺酶高产菌株的诱变选育

以本实验室筛选的Streptomyces sp.WZFF.W—12(谷氨酞胺转胺酶活0．24U／ml)为出发菌株，孢子经预培养处理处于萌发状态后制备成单孢子悬浮液，用1—甲基—3—硝基—1—亚硝基服(NTG)单独和结合羟胺进行多次复合诱变处理。实验发现，诱变处理后菌落的形态变异等特征与产酶能力呈相关关系，并被用于最初的突变菌落挑选。接着先后采用蛋白质交联凝絮—沉淀性能分析的初筛试验和摇瓶测定酶活的复筛试验分离选育高产酶突变菌株，最后获得一产酶活力达2．18U／ml的高产菌株W—12var HZ3，酶活相对提高了8倍。对该菌株进行分类鉴定方面的理化性能测试和传代实验结果表明，该菌遗传性较为稳定，而且其理化性能与已报道的产酶菌种明显不同。     

L-苯丙氨酸解氨酶产生菌的原生质体诱变育种

原始菌株海洋红酵母M1202产生的L-苯丙氨酸解氨酶(PAL),能够逆反应催化反式肉桂酸(t-Ca)生成L-苯丙氨酸。对M1202进行原生质体紫外诱变获得一株转化率为原始菌株115%的菌株TM2,经6次传代,仍具有较好的遗传稳定性。     

甘薯糖蛋白分离纯化工艺研究

该文报道对甘薯活性成分糖蛋白提取纯化工艺研究;结果表明,甘薯糖蛋白提纯最佳条件为:室温条件下水浸提,料液体积比为1:6,提取时间为1h,提取次数3次,上清液加无水乙醇沉淀,透析3 d,经DEAE-52柱层析,再进一步经Sephadex G-100柱层析,经定性、定量分析得到甘薯糖蛋白纯品,这是一种可行的甘薯糖蛋白提纯生产方法。