L-色氨酸产生菌TQ2223的途径分析

应用途径分析方法分析了在稳态时谷氨酸棒杆菌TQ2223菌株由葡萄糖发酵生产L-色氨酸的途径，确定了L-色氨酸合成的最佳途径及其代谢流分布和最大理论产率．通过刺激所选途径的酶活来提高L-色氨酸产率，结果表明，经NH4 调节后，代谢途径流量发生显著变化，可以使色氨酸的代谢流从6提高到8.8．     

柠檬酸钠对L-谷氨酸发酵代谢流迁移的影响

为更全面深入地理解细胞内谷氨酸代谢的调控机制,以黄色短杆菌GDK-9为供试菌株,应用MATLAB软件和代谢流分析方法,定量研究了添加柠檬酸钠后L-谷氨酸发酵中后期胞内的代谢流迁移．在L-谷氨酸发酵中后期添加3．0g／L柠檬酸钠后,合成副产物L-丙氨酸和乳酸的代谢流量明显减少,分别降低了18．7％和27．4％,EMP途径和乙醛酸循环的代谢流分别减少了0．88和2．12,HMP途径的代谢流增加了0．88,而L-谷氨酸生物合成的代谢流从73．59增长至76．47,较未添加前提高了3．9％．添加柠檬酸钠能使关键节点发生代谢流迁移,提高L-谷氨酸合成中心代谢途径的代谢流量．     

稀土元素对谷氨酸棒杆菌生长及酶活性的影响

研究了单一稀土氯化亚铈(CeCl3)对谷氨酸棒杆菌的生长及谷氨酸脱氢酶(GDH)和乳酸脱氢酶(LDH)酶活的影响．结果表明：稀土元素在低剂量下能促进谷氨酸棒杆茵的生长；达到一定剂量会抑制菌体的生长；对酶活性的影响也是在低剂量下激活，在高剂量下抑制．     

谷氨酰胺产生菌NS611的代谢流分析

建立并完善了谷氨酸棒杆菌NS611生产谷氨酰胺的中心碳代谢网络。研究了菌体生长和生产阶段的代谢流分布，结果说明该菌葡萄糖的代谢以糖酵解途径为主，在产酸阶段丙酮酸羧化反应的代谢流量较大，NADPH不是谷氨酸棒杆菌NS611代谢的限制性因素。研究了氮饥饿处理对代谢流分布的影响，提出要提高谷氨酰胺的产量必须适当保留a－酮戊二酸的向下氧化的功能，以保证能量供给。     

柠檬酸钠对L-缬氨酸发酵及代谢流量分布的影响

以黄色短杆菌XV0505为供试菌,研究柠檬酸钠对L-缬氨酸发酵的影响,同时应用MATLAB软件和代谢流量分析方法,定量研究柠檬酸钠对L-缬氨酸发酵中后期胞内代谢流量分布的影响．结果表明,添加2．0g／L柠檬酸钠可提高L-缬氨酸产量,同时不影响菌体生长．添加柠檬酸钠后,L-缬氨酸生物合成的代谢流从41．42增长至45．87,较未添加前提高了10．74％．合成副产物L-丙氨酸和HAc的代谢流明显减少,分别降低了21．10％和32．47％．因此,添加柠檬酸钠能够扰动L-缬氨酸生物合成途径关键节点代谢流量分布,有利于减少副产物的生成,提高L-缬氨酸生物合成途径的代谢流量．     

柠檬酸钠对L-异亮氨酸发酵及代谢流量分布的影响

分析黄色短杆菌（Brevibacterium flavum）中L-异亮氨酸生物合成途径得知,添加柠檬酸钠利于L-异亮氨酸发酵．通过考察柠檬酸添加量对副产物含量、菌体生物量、菌体比生长速率及L-异亮氨酸产量的影响,得出柠檬酸钠的最适添加量为2．0g／L．应用代谢流分析方法研究了柠檬酸钠对L-异亮氨酸发酵中后期细胞内代谢流分布的影响．结果表明,在初始发酵培养基中添加2．0g／L柠檬酸钠后,合成副产物的代谢流量明显减少,EMP途径代谢流从63．34减弱至46．54．而L-异亮氨酸的生物合成代谢流增长至23.28,较添加前提高了5．91％,且产量提高了7．87％．因此,发酵过程中添加柠檬酸钠可有效减少副产物的生成,提高L-异亮氨酸生物合成途径的代谢流量．     

钝齿棒杆菌产精氨酸代谢途径中argB基因的扩增及其序列分析

根据GenBank报道的谷氨酸棒杆菌ATCC 13032序列，设计并合成一对引物，获得了全长argB基因片段．将其克隆到pGEM—T—Easy载体中，经测序鉴定后，以其为DIG标记探针，通过Southern Blot分析钝齿棒杆菌A．S1．542与谷氨酸棒杆菌ATCC 13032，argB基因核苷酸同源性高达99％，氨基酸序列95％相同。     

虾青素及其他类胡萝卜素的生物合成研究

应用高效液相色谱对法夫酵母合成产物中的虾青素和其他类胡萝卜素进行了定性和定量分析，并通过分析葡萄糖底物与代谢中间产物乙醇及总虾青素的含量变化对法夫酵母生物合成虾青素进行了研究。     

酿酒酵母胞内代谢关键酶对乙醇的耐受性

分别添加2％、4％、6％、8％乙醇的酵母细胞糖酵解途径和三羧酸循环中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶、异柠檬酸裂解酶活力等关键代谢节点处的酶活力,以期考查关键酶对酒精的耐受性.实验结果表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶对酒精的耐受能力较强,添加8％乙醇时的酶活力较无乙醇时提高23....     

植物乳杆菌乳酸脱氢酶的抽提与初步纯化

研究了从植物乳杆菌RS2—2中提取胞内乳酸脱氢酶的工艺过程，探讨了超声破碎时茵体质量浓度、处理量及处理时间对破碎效果的影响；对酶的提取工艺研究表明，0．05mol／L磷酸缓冲液(pH7．0)添加0．10～0．30mol／L NaCl可达到较好的抽提效果；对硫酸铵盐析去杂蛋白质及DEAE离子交换层析工艺进行了初步优化．在优化的工艺条件下，酶的总回收率为40．2％，比酶活提高到原来的18．9倍。     

虾青素及其他类胡萝卜素的生物合成研究

应用高效液相色谱对法夫酵母合成产物中的虾青素和其他类胡萝卜素进行了定性和定量分析 ,并通过分析葡萄糖底物与代谢中间产物乙醇及总虾青素的含量变化对法夫酵母生物合成虾青素进行了研究     

面包酵母生物合成ATP的影响因素及机理初探

在对面包酵母生物合成ATP的影响因素研究的基础上，初步探讨了生物合成ATP的反应机理。研究结果表明：在反应体系中直接添加终体积分数为0．5％的甲苯，可显著提高面包酵母细胞膜通透性。Mg^2＋对ATP的合成影响很大，当Mg计浓度为40mmol／L时，ATP合成量达到最大值，为9．02mmol／L。在面包酵母生物合成ATP的过程中，当葡萄糖磷酸化和腺苷磷酸化反应竞争时，葡萄糖磷酸化快于腺苷磷酸化，在体系中其它需能反应结束后ATP才开始大量积累。在面包酵母经糖酵解途径生物合成ATP的前期，NAD的再生主要通过形成甘油和乙醇来实现，而在生物合成ATP的中期和快速合成期，NAD的再生主要是通过形成乙醇来实现。     

磷酸盐对Escherichia coli TRJHL-色氨酸发酵代谢流分布的影响

应用代谢流分析方法研究了磷酸盐对Escheriehia coli TRJHL-色氨酸发酵中后期胞内代谢流分布的影响．结果表明：在发酵中后期添加4．0g／LKH2P04时,与不添加KH2P04相比,L-色氨酸合成的代谢流增加了19．3％,而副产物Lac、HAc和Ala的代谢流仅增加了6．0％、7．8％和6．8％．与添加8．0g／LKH2P04比较,副产物代谢流的增量明显减少,说明磷酸盐的过量添加会使EMP途径代谢流量超过TCA及L-色氨酸合成支路的代谢能力,从而导致副产物的生成增加,L-色氨酸生物合成的转化率相对降低．因此,在L-色氨酸发酵过程中应该严格控制磷酸盐的用量．     

酿酒酵母胞内代谢关键酶对乙醇的耐受性

分别添加2%、4%、6%、8%乙醇的酵母细胞糖酵解途径和三羧酸循环中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶、异柠檬酸裂解酶活力等关键代谢节点处的酶活力,以期考查关键酶对酒精的耐受性。实验结果表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶对酒精的耐受能力较强,添加8%乙醇时的酶活力较无乙醇时提高23.65%;丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶和乙醇脱氢酶表现出对酒精的耐受力较差,丙酮酸激酶和乙醇脱氢酶在添加2%乙醇时的酶活力较无乙醇时分别降低77.7%和62.72%,异柠檬酸脱氢酶在添加8%乙醇时的酶活力仅为0.003U;苹果酸脱氢酶和异柠檬酸裂解酶表现出对酒精良好的耐受性,在添加8%乙醇时的酶活力较无乙醇时分别提高256.25%和276.16%。     

过量表达苏氨酸脱水酶对谷氨酸棒杆菌合成L–异亮氨酸的影响

考察过量表达解除反馈抑制的苏氨酸脱水酶对谷氨酸棒杆菌发酵生产L-异亮氨酸的影响.将解除反馈抑制的苏氨酸脱水酶基因ilvA（F383V）连接大肠杆菌/谷氨酸棒杆菌穿梭质粒pXMJ19,过量表达于L-异亮氨酸生产菌株Corynebacterium glutamicum YILW.经5 L发酵罐分批补料发酵产酸实验,与出发菌株C.glutamicum YILW相比,耗糖高峰期滞后,L-异亮氨酸产量增加了10.3%,副产物L-蛋氨酸、L-赖氨酸含量分别降低了33.3%2、6.5%,发酵液中没有L-苏氨酸的累积,乳酸的累积量增加了41.7%.对发酵稳定期的代谢流分布研究表明,过量表达解除反馈抑制的苏氨酸脱水酶使HMP途径流量增加了31.7%,L-异亮氨酸生物合成途径的代谢流提高了8.5%.     

影响kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的因素

研究了酶反应的温度、pH值、底物浓度和反应时间等对kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的影响．结果显示，以乳糖为底物．kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的最适温度为60℃，最适pH值为6．0，酶法合成低聚半乳糖的产率随着底物浓度增加而增加．kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化低聚半乳糖合成的初速度较快．随着反应时间延长．反应速率降低，反应20h酶反应达到平衡．以660mg/mL乳糖为底物．在最适酪反应条件下，酪法合成低聚半乳糖的产率为207．12mg／mL。     

米根霉培养条件对脱氢酶活力和产物组成的影响

为提高米根霉的L-乳酸发酵产率，开展了米根霉培养条件对关键的脱氢酶(L-乳酸脱氢酶和乙醇脱氢酶)和末端产物(L-乳酸和乙醇)形成影响的研究．研究表明，初始葡萄糖质量浓度为60．0g／L时，胞内L-乳酸脱氢酶(LDH)的比活力达到最大值，过高葡萄糖质量浓度对LDH的合成有抑制作用．添加20．0g／CaCO3能够大大降低ADH的比活力，而对LDH的作用影响较小，明显提高了LDH／ADH的比值，从而增加发酵液中L-乳酸的累积，减少了副产物乙醇的生成．Zn^ 对ADH的比活力起促进作用，而抑制LDH，Fe^3 的作用正好相反．在添加CaCO3后，Zn^2 能够提高LDH的比活力，Fe^3 对LDH的比活力的刺激作用将有所减弱；增大摇瓶转速将使得LDH和ADH的比活力都有所下降，但LDH／ADH的比例明显增大，从而明显增加了L-乳酸的累积．     

L—异亮氨酸高产菌育种机理的初步研究

研究了黄色短杆菌生物合成Ｌ－异亮氨酸代谢控制途径。结果表明,选育Ｌ－异亮氨酸高产菌必须首先活化磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（ＰＣ）、天冬氨酸激酶（ＡＫ）,高丝氨酸脱氢酶（ＨＤ）、苏氨酸脱氢酶（ＴＤ）和乙酰羟基酸合成酶（ＡＳ）这五个关键酶,并减弱由丙酮酸激酶（ＰＫ）、柠檬酸合成酶（ＣＳ）、天冬氨酸β－脱羧酶（ＡＤ）、二羟吡啶二羟酸合成酶（ＰＳ）和高丝氨酸－Ｏ－转乙酰酶（ＨＴ）引起的五条分支代谢强度,从而强     

前体物质和碳氮源补加策略对钝齿棒杆菌发酵生产L-精氨酸的影响

研究了前体物质和碳氮源补加策略对钝齿棒杆菌Corynebacterium crenatumSYAN7发酵生产L-精氨酸的影响。结果表明，发酵24h后添加前体物质谷氨酸，以初始硫酸铵质量浓度20g／L，分别于24、48h补加20g／L硫酸铵的补氮方式，和以初始葡萄糖质量浓度100g／L，分别于24、48、72h均匀添加葡萄糖，使总糖质量浓度达175g／L的补碳方式，摇瓶发酵96h后，L-精氨酸产量最高达37．8g／L。     

白腐菌产木素过氧化物酶发酵条件的优化

在静置和振荡两种培养条件下研究营养条件对白腐菌合成木素过氧化物酶(1igninperoxidase，LiP)的影响。静置培养时，LiP在碳氮比(C／N)低的培养基中显示较高的酶活力，碳源以葡萄糖(0．02％)和糊精(0．18％)同时存在及分段加入要比单一葡萄糖作为碳源时获得更高的酶活；振荡培养时，在碳氮比高的培养基中LiP酶活最高，而类似于静置培养的氮源组合及分段模式却明显地抑制了LiP的合成。优化后，静置培养在第6天可获得7560U／L的酶活；振荡培养在第8天获得6500U／L的酶活。发酵液中LiP酶活力与菌体分泌的其同功酶的数量成一定的对应关系。