山羊痘病毒囊膜的超微结构与形态发生

痘病毒可以作为研究生物膜形态发生的很好材料。我们应用冷冻蚀刻技术并附以超薄切片、负染色,细胞表面复型和扫描电镜等技术,对一种复制周期很长的痘病毒——山羊痘病毒囊膜的精细结构和发生过程进行了比较研究。病毒发育早期,毒浆周围出现的弧形膜样结构在冷冻蚀刻样品中呈现出间距为15—20nm均匀排列的二层颗粒;未成熟病毒囊膜为圆形,直径约400nm,因其常常从病毒中部断裂,因而可清楚地显示出病毒周缘仍由二层颗粒围绕;细胞质内成熟病毒囊膜为直径320—340nm的规则球体,其的PF面和EF面上均可见到大量直径为7—10nm的膜内微粒。释放到细胞外的成熟病毒囊膜的PF或EF面仅有少量的膜内微粒,囊膜形态呈不规则的球体     

GPV和IBRV的超微结构与形态发生的冰冻蚀刻研究

用冰冻断裂技术并结合其它电镜技术,研究了GPV和IBRV囊膜和核壳体的形态和发生。GPV发育早期,病毒从中部断裂,围绕病毒的膜样结构是均匀排列的两层颗粒,而成熟病毒在囊膜中间断裂,说明发育早期的囊膜脂质很少,主要成分是蛋白质颗粒,随后脂质才进入囊膜。而细胞质内成熟GPV囊膜的PF和EF都仍有大量膜内蛋白颗粒,GPV释放到细胞外后囊膜膜内蛋白颗粒大为减少。成熟的IBRV囊膜PF上膜内蛋白比EF上多。在囊膜周缘有时可见剌突样结构。在与疾毒接触的细胞质膜的区域有规则排列的颗粒,似与病毒释放有关。在感染细胞核内同时装配着IBRV的核心、空衣壳和核壳体。细胞核内核壳体固断裂部位不同可分为5种类型,深度蚀刻后对其形态进行了观察。文中还对不同方法制备的样品的形态进行了比较。     

用冷冻蚀刻技术研究几种病毒的形态发生

几种大型病毒的冷冻蚀刻研究(痘苗病毒、山羊痘病毒和疱疹病毒等)在我国已有报导。本文拟报导三种中小型病毒的形态结构及形态发生过程。<1>水泡性口炎病毒(vsv)、属弹状病毒科,有囊膜的病毒,大小70×170nm;<2>辜德毕斯病毒(sbv),属披盖病毒科,有囊膜的病毒,直径50—60nm;<3>人腺病毒,属腺病毒科,无囊膜的病毒,直径约70nm。在腺病毒感染的宿主细胞核内,可观察到处于不同装配和成熟阶段的病毒粒子(图A、左不)。在VSV和sbv感染的宿主细胞质中和细胞质空泡内可观察到病毒核衣壳装配的过程,尤其在宿主细胞的表面更清楚地显示出病毒以出芽的方式向细胞外释放的各个细节。(图A     

辛德毕斯病毒囊膜蛋白的免疫标记

辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,简称SbV)是最小的有囊膜的RNA病毒之一(图1),其囊幕含有二种病毒特异的囊膜蛋白(图1箭头)。病毒囊膜蛋白是在宿主细胞粗面内质网上合成的,经高尔基体加工后转运到细胞质膜上。研究SbV囊膜蛋白在细胞膜上的分布有助于进一步了解病毒的成熟与释放过程及其机制。我们曾参照P.Pinto da Silva的方法用抗病毒囊膜蛋白的抗体对SbV感染的细胞进行胶体金免疫标记,然后制备冰冻断裂复型样品,获得了宿主细胞质膜EF面复型与ES面的标记金颗粒的叠加图象(图2),进而我们探索了标记一复型技术和获得PF面复型与PS面标记金颗粒的叠加图象的方法,前者更有效地显示SbV囊膜蛋白在细胞质膜上的分布(图3),后者则可以把细胞内的免疫标记与冰冻蚀刻技术相结合,以对膜内微粒中的SbV囊膜蛋白进行定性定位的研究(图4),从而在一定程度上弥补了P.Pintoda Silva方法的不足。     

家兔三叉神经节的超微结构——冷冻复型透射电镜观察

本文应用冷冻复型电镜技术研究了家兔三叉神经节的膜结构。观察到节细胞核有大量密布的核孔,其形态在核膜的不同劈裂面上表现不一。经测算1μm～2,平均核孔数为38个,核孔直径为76nm,占核表面积的17.24 ％。胞质内细胞器膜结构的立体感很强。雪旺细胞核上有散布的核孔,1μm～2上有核孔14个,胞质内有线粒体、RER、小泡等结构。有髓神经纤维的不同断面立体构筑很清晰;观察到在大的同心圆板层中夹杂有小的旋涡样板层结构;相邻板层间有圆形空隙。轴索中微丝微管清晰,轴索膜有的向轴浆内陷入。髓鞘板层上的膜内微粒,PF面较EF面者为多。研究结果为该神经节的超微结构提供了新的资料。     

对豚鼠肝脏的冷冻复型电镜观察

本文应用冷冻复型电镜技术对豚鼠肝脏进行了观察。发现肝细胞不同部位的细胞膜有所差异。在肝细胞的狄氏腔面和微胆管腔面的微绒毛,其PF面上的膜内微粒较其余部PF上的多而密。紧密连接只存在于微胆管的四周。缝管连接只见于两肝细胞相邻面。肝细胞核的核孔每μm~2平均有12.8个。粗面内质网上未见核孔样结构,而高尔基复合体的扁平囊上则有。滑面内质网多有分支交织成网。线粒体很多。肝血窦内皮的筛板部有成群分布、大小不一的内皮孔,平均直径为105nm,密集处每μm~2有25个;在较厚的内皮细胞突上无孔,但有饮液泡及贯穿胞质的小管。内皮外无基膜,但可见内皮边缘部相互重叠,二者间有很窄的间隙。肝血窦腔内可见枯氏细胞的胞体及其长突附于内皮细胞上,胞体内除有大小不一的泡和小管状结构外,还可见有大小不等的胞膜凹陷与之相通。以上各种细胞膜PF面上的膜内微粒都远较EF面上为多,相对而言肝细胞的较枯氏细胞和内皮细胞的为多。本文根据观察结果与文献中其它动物肝脏和用其它方法对肝脏的电镜观察进行了对比和讨论。     

大白鼠视网膜视细胞紧密连接

大白鼠视网膜视细胞经冷冻蚀刻技术制备样品,质膜明显地被劈裂为PF面与EF面。质膜面上可见到排列整齐规律的紧密连接索条,它们构成两种几何形状的网纹(图)。园环形网纹,PF面上出现园环形嵴状索条,这些园环面积大小不等,有小有大,几乎都呈单环存在,不构成套环。在EF面上由浅沟勾划出园环状结构,使该区呈现出一片“浅印”式园环形图纹。长条形网纹,PF面上由蛋白质颗粒堆集而成的索条大都近似平行排列,因而构成众多近似长粒形网纹,这些索条几乎不出现纵横交叉,长条形网纹较为规律整齐,布满一些质膜表面,这些长条形网纹面积     

在昆明地区病毒性腹泻便中发现的病毒颗粒——“干海子”因子

本文报导了在昆明地区腹泻病人粪便中发现的一株病毒——“干海子”因子(Ganhaizi agent)。电镜下,病毒颗粒呈球形或六边形,直径32—38nm,无囊膜,中心有一直径32nm左右的核心,核心有子粒呈蜂窝状。病毒颗粒有一外圈,直径38nm左右,子粒呈放射状排列,边缘不整齐。病毒在粪便中呈大片堆积。经     

肾综合症出血热(HFRS)病毒的形态学研究

应用铁蛋白和辣根过氧化物酶标记抗体间接法染色免疫电镜超薄切片技术对经Vero E—6细胞从HFRS患者血清中直接分离到的二株病毒(H—8205及H—8278株)的形态作了观察。结果在细胞基质内、胞浆空泡内及细胞外查见为免疫复合物和铁蛋白颗粒或酶反应沉淀物包绕的病毒颗粒,园形或卵园形,平均直径108nm,变化范围50—156nm。颗粒有双层膜结构及表面突起,有的囊膜不连续,有小孔通过,颗粒内部为疏松的细颗粒状及微管状结构。两株病毒在形态上无差别。对照组(包括用正常人血清取代恢复期病人血清的对照)未见到类似     

十二指肠上皮细胞的亚显微结构

本文以健康家兔十二指肠为实验材料,在超薄切片透射电镜观察的基础上,采用冷冻蚀刻技术对十二指肠上皮细胞的亚显微结构及其膜表面特化结构,进行观察分析。实验方法取新鲜材料,经4％戊二醛和1％锇酸双固定后,为了提高样品的反差和较好地显示细胞的膜结构,将样品放入1％单宁酸浸泡60分钟,尔后再用丙酮逐级脱水,EPON812包埋,超薄切片后送H—500电镜观察。冷冻蚀刻样品,系用HFZ—1型冷冻蚀刻装置,按常规操作步骤制备复型膜。     

三种动物慢病毒形态及形态发生的比较研究

用电镜检查确定了不同感染时间的马传染性贫血病毒 (EIAV)、维斯纳 梅迪病毒 (MVV)和山羊关节炎脑炎病毒 (CAEV)的形态和形态发生。成熟的病毒粒子为电子致密的球形 ,有囊膜 ,直径约 10 0nm ,含有 1个 (有时有 2个或 2个以上 )的核芯。维斯纳 梅迪病毒和山羊关节炎脑炎病毒的核芯为球形 ,马传染性贫血病毒为杆形或锥形。在大部分病毒里能清晰地看到核芯壳 ,成熟的病毒从感染细胞的胞浆膜上出芽 ,在胞浆中还见到了花环状粒子和多板层结构     

三种动物慢病毒形态及形态性的比较研究

用电镜检查确定了不同感染时间的马传染性贫血病毒（EIAV）、维斯纳-梅迪病毒（MVV）和山羊关节炎脑炎病毒（CAEV）的形态和形态发生。成熟的病毒粒子为电子致密的球形，有囊膜，直径约100nm，含有1个（有时有2个或2个以上）的核芯。维斯纳-梅迪病毒和山羊关节炎脑炎病毒的核芯为球形，马传染性贫血病毒为杆形或锥形。在大部分病毒里能清晰地看到核芯壳，成熟的病毒从感染细胞的胞浆膜上出芽，在胞浆中还见到了花环状粒子和多板层结构。     

文昌鱼精子发生过程中高尔基体和线粒体的演变规律电镜观察

本文应用电镜超薄切片和冷冻蚀剂技术,研究厦门文昌鱼(Branchiostoma belcheri Gray)精子发生过程高尔基体和线粒体的演变规律。在文昌鱼精子发生过程中,高尔基体发生一系列的演变和转化过程。生精细胞发育分化为精母细胞,高尔基液泡数量明显增多,大部份集中在高尔基区及其附近。当冷冻劈裂这些高尔基液泡时,显示膜囊的两个断面,即内叶外面(PF面)和外叶内面(EF面),两面上的膜蛋白颗粒的分布和数量有着明显差异,前者分布均匀,颗粒密集,后者则较稀少。精细胞时期,高尔基液泡颇为发达。在精细胞变态早期阶段,     

应用高压冷冻-冷冻置换技术研究受Potyvirus侵染的寄主细胞超微结构

应用高压冷冻-冷冻置换技术（HPF-FS）制备了马铃薯Y病毒属的小西葫芦黄花叶病毒（ZYMV）和大豆花叶病毒（SMV）侵染寄主植物叶细胞的超薄切片样品,并与传统化学固定方法进行比较。透射电镜观察结果显示：病毒粒子和内含体的形态分布在两种方法处理的样品中无明显差异,但高压冷冻样品的细胞超微结构精细,细胞壁与细胞质之间边界清晰,质膜平滑而完整,细胞基质丰富;细胞核和叶绿体、线粒体等形态饱满,高尔基体潴泡结构及分泌小泡清晰,在ZYMV感染细胞的叶绿体中观察到囊泡结构。而化学处理的样品普遍存在细胞结构的收缩和变形,特别是质膜褶皱,与细胞壁分离,叶绿体呈梭形,片层结构发生改变,高尔基体潴泡结构及分泌小泡相当少见。实验结果有利于正确区别病毒所引起的细胞病理变化和化学处理而产生的人工假象。     

棉铃虫 H.Armigera 和大蓑蛾 C.Variegata 中肠上皮细胞微绒毛形态结构研究

用超薄切片及冷冻蚀该制样方法,对大蓑蛾C.Variegata中肠和棉铃虫H.Armigera中肠的超微形态结构研究中,发现两者的中肠微绒毛内含物和已报导的豚鼠,家兔胃内壁上皮细胞微绒毛内含有明显差异,现简述如下:大蓑蛾C.Varigata中肠冷冻蚀该观察能清楚地看到上皮层杯状细胞和柱状细胞的核、核孔、核膜、细胞膜及微绒毛。从核孔园柱状突出或边缘隆起四周有环形浅窝,核膜面微粒多少,可确定核膜的PF面和EF面以及细绒毛的PF面和EF面。在微绒毛的横断面,可看到排列整齐的线粒体(图略)。另外,棉铃虫H.Armigera中肠超薄切片观察,在杯状细胞和柱状细胞的纵切面和横切面同样看到大量排列整齐的     

牛传染性鼻气管炎病毒与山羊痘病毒在细胞表面释放的研究

用高分辨扫描电镜与细胞表面复型穿透电镜技术结合研究了牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)与山羊痘病毒(GPV)从细胞表面释放的详细过程,不仅为病毒多种释放形式提供了表面形态的细节,而且可为病毒的外部形态,病毒在细胞表面的释放数量,释放部位以及病毒与细胞表面关系等提供更多的信息。尤其是能揭示在超薄切片上无法弄清楚的“绒毛”释放形式。     

冰冻蚀刻胶体金标记技术

冰冻蚀刻技术主要的优越性之一是可以显示出镶嵌在细胞膜内的蛋白质颗粒,而对这些种类,数量繁多的膜内微粒的定性与定量研究,则是近几年刚刚建立的一个重要的电镜新技术。本实验用直径5nm的胶体金一羊抗兔抗体和直径20nm的胶体金一蛋白A的复合物,以及抗辛德毕斯病毒(sbv)表面糖蛋白E和抗sbv的抗体及抗水泡性口炎病毒(vsv),表面糖蛋白的抗体,分别标记了sbv或vsv感染的BHK—21单层细胞,经固定和甘油处理后,再把长有细胞单层的盖玻片小心裁成大小1～2mm的小块,在Balzars冰冻蚀刻仪中断裂、喷镀复型膜。仅用蒸馏水将复型膜连同细胞碎片漂起,即可捞在400目的载网上。     

辛德毕斯病毒（Sindbis Virus）成熟过程的电镜研究

辛德毕斯病毒(Sindbis Virus,以下简称 SbV)属于披盖病毒科,是最小结构最简单的有囊膜的病毒之一,其结构蛋白仅有三种即衣壳蛋白、囊膜蛋白E_1和E_2。病毒的核衣壳在宿主细胞的细胞质中装配,然后转移到细胞质膜下,以出芽的方式披上一层囊膜,发育成为成熟的病毒粒子,出芽成熟过程的动力来自于核衣壳上的衣壳蛋白与细胞质膜上的病毒囊膜蛋白的相互作用。SbV的这种成熟模式十几年前就已提出并得到后来的一些电镜观察结果的支持。近几年来分子生物学的研究结果进一步表明:病毒成熟过程是囊膜蛋白E_2(一种跨膜蛋白)在细胞质中的部分(C末端)与衣壳蛋白相互作用的结果。     

精索静脉曲张不育者精子的超薄切片和冷冻蚀刻的电镜观察

精索静脉曲张影响精子发生和精液质量,导致男性不育。为探讨不育的原因,本实验采用超薄切片和冷冻蚀刻复型膜的电镜观察。材料和方法:两例青年男性不育者,年龄为29岁,31岁,婚后三年不育,有双侧中度精索静脉曲张。超薄切片制备:2.5％二醛,1％锇酸双固定,酒精脱水,环氧树脂812包埋,超薄切片厚度500埃左右,铀、铅双染色。冷冻蚀刻复型膜制备:新鲜精液固定于2.5％戊二醛,经30％甘油生理盐水处理12小时,BAF—400D高真空冷冻蚀刻仪制成复型膜,电镜观察。观察结果:超薄切片:精索静脉曲张患者精液内可见头帽期和顶体期精子细胞,且形态异常,如顶体扩张,细胞核染色质松散,核内出现大空腔。发育成熟的精子头畸形,中段线粒体排列紊乱等。冷冻蚀刻复型膜:患者     

用高压电镜与立体视镜观察整装细胞内病毒与细胞骨架的关系

以前,我们曾发现牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)可诱导大量对松胞素B不敏感的微丝,而且病毒的释放与微丝结构有某种关系。在此基础上,我们用整装电镜技术对细胞骨架与成熟病毒的关系做了进一步地探讨。将牛肾次代细胞培养在敷有方华膜和鼠尾胶膜的金网或镍网上,接种病毒24小时后,在室温下用戊二醛和锇酸固定细胞,并用醋酸双氧铀染色1小时,再经脱水和临界点干燥后,于日本JEM—200CX电镜下观察,加速电压200KV,同一视野以8度之差,拍摄二张照片,用于立体视镜观察。正常牛肾细胞的边缘,细胞质膜完整,骨架系统层次分明,线粒体等细胞固定在细胞骨架网络上。在IBRV感染的细胞中,细胞骨架发生了明显的变化,其层次减少,微丝束增多,分布似乎更有方向性。许多区域细胞质