菌物多糖对巨噬细胞和树突状细胞的免疫刺激作用及信号通路

菌物多糖能激活巨噬细胞和树突状细胞的成熟,提高表面CD80、CD86和组织相容性抗原(MHC)分子的表达,降低树突状细胞的内吞作用,提高巨噬细胞的吞噬能力;促进各种细胞因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-12(IL-12)和效应分子一氧化氮(NO)、活性氧中间体(ROI)的分泌。菌物多糖发挥作用的信号通路可能是菌物多糖通过与两种细胞表面的Toll样受体(TLR)作用,引发巨噬细胞和树突状细胞胞内丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的磷酸化,转录因子活化因子蛋白(AP-1)的磷酸化和核转位,以及促进IκB的降解,使转录因子NF-κB向核转移,来调控核基因的转录和表达,从而对巨噬细胞和树突状细胞发挥免疫刺激作用。     

黑灵芝多糖对脂多糖诱导巨噬细胞M1/M2表型转化的影响

目的：观察黑灵芝多糖对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞M1/M2表型转化的影 响。方法：中性红检测巨噬细胞吞噬;流式细胞仪检测细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）和甘露糖受体 （mannose receptor,MR）水平;Griess法测定NO水平;酶联免疫吸附实验测定细胞因子白细胞介素（interleukin, IL）-1β和IL-10水平。结果：与LPS组相比,黑灵芝多糖可显著降低巨噬细胞吞噬能力并抑制IL-1β、NO和ROS的生 成,提示黑灵芝多糖可抑制巨噬细胞向M1表型极化。同时,黑灵芝多糖可上调LPS处理的巨噬细胞MR表达和IL-10 水平,促进巨噬细胞向M2表型极化。在黑灵芝多糖＋LPS组中加入MR抑制剂,发现黑灵芝多糖抗LPS介导的炎症 反应有所减弱。结论：黑灵芝多糖对LPS致炎巨噬细胞极化表型具有调控作用,且其可通过MR抑制巨噬细胞向M1 表型极化而促进向M2表型极化。     

卵转铁蛋白对树突状细胞功能成熟的影响

目的：探究卵转铁蛋白（ovotransferrin,OVT）对树突状细胞（dendritic cells,DCs）功能成熟的影响。方法：通过混合淋巴反应检测OVT对DCs刺激T淋巴细胞增殖能力的影响,酶联免疫吸附分析（enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA）检测DCs上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素12p70（interleukin-12p70,IL-12p70）和IL-10细胞因子含量,Western blotting检测胞外信号调节激酶（extracellular signalregulated kinase,ERK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）信号蛋白表达量。结果：OVT可以提高DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力,并诱导DCs分泌TNF-α以及IL-12p70,且呈一定的剂量依赖关系。OVT可能是通过激活JNK和p38 MAPK信号通路以及抑制ERK信号通路上调细胞因子TNF-α、IL-12p70表达,从而促进DCs成熟。结论：OVT能促进DCs功能成熟,对机体的免疫具有调节作用。     

干酪乳杆菌胞外多糖诱导小鼠骨髓来源树突细胞成熟以及分泌IL-6、TGF-β和IL-23

为研究干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）胞外多糖（exopolysaccharide,EPS）促进体外培养的小鼠未成熟骨髓来源树突细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs）成熟的作用,分析不同剂量的EPS对BMDCs分泌细胞因子白细胞介素（interleukin,IL）-6、转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）和IL-23的影响,并检测EPS对BMDCs抗原提呈能力的影响。首先从干酪乳杆菌中分离纯化出EPS,并检测EPS的纯度;把从BALB/c小鼠体内分离出的骨髓细胞分化为BMDCs,未成熟BMDCs分别与磷酸盐缓冲液、不同剂量EPS和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）体外培养,采用流式细胞法检测了BMDCs成熟表面标记物MHC II和CD86的表达,酶联免疫吸附检测（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法分析了IL-6、TGF-β和IL-23的表达量,CCK-8法检测了BMDCs与小鼠脾淋巴细胞的混合培养体系中淋巴细胞的增殖率。结果表明：分离出EPS的纯度约为95%;EPS能够上调BMDCs表面MHC II和CD86的表达量;EPS可以显著促进BMDCs分泌IL-6、TGF-β和IL-23（P＜0.05）,但促进水平低于LPS;EPS可以明显促进BMDCs刺激异基因淋巴细胞的增殖。综上所述,在体外实验中,干酪乳杆菌EPS能够促进BALB/c小鼠BMDCs的成熟,诱导BMDCs分泌与辅助性T17细胞分化和增殖相关的细胞因子IL-6、TGF-β和IL-23,并且可以增强BMDCs的抗原提呈能力。     

植物乳杆菌C88联合人参多糖的免疫调节作用

以环磷酰胺诱导昆明小鼠建立免疫抑制模型后,分别给其灌胃人参多糖、人参多糖联合植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）C88。实验结束后,采用酶联免疫吸附实验检测了小鼠血清中的白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）,并利用碳廓清法检测了小鼠吞噬细胞吞噬能力,评价了人参多糖（water-soluble ginseng polysaccharides,WGPA）联合植物乳杆菌C88的体内免疫调节作用。结果表明WGPA联合益生菌C88可明显增强免疫抑制小鼠吞噬细胞的吞噬能力和迟发型超敏反应,显著上调血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α、IgG水平,下调IL-10水平,并呈现剂量依赖性,且联合用药组的作用明显强于人参多糖WGPA单独用药组。综上所述,植物乳杆菌C88联合人参多糖可以发挥一定的免疫调节作用。     

大粒车前子多糖对脂多糖刺激RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

采用脂多糖构建RAW264.7巨噬细胞炎症模型,研究大粒车前子多糖的抗炎作用。培养巨噬细胞RAW264.7,利用脂多糖构建细胞炎症模型,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;酶联免疫吸附法检测车前子精制多糖（Plantago asiatica L. crude polysaccharide,PLCP）处理前后细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）和IL-6的分泌量,Griess反应测定RAW264.7细胞释放NO水平。结果表明,PLCP可显著抑制RAW264.7炎症细胞的吞噬活性,降低炎症细胞因子TNF-α、IL-10和IL-6的分泌量及NO的释放量。     

花脸香蘑菌丝体多糖提取条件优化及其体外免疫活性

为探讨花脸香蘑菌丝体多糖提取工艺及其免疫活性,以花脸香蘑菌丝体为原料,在单因素试验的基础上采用正交试验优化多糖提取条件;将不同质量浓度的花脸香蘑菌丝体多糖溶液作用于小鼠巨噬细胞Ana-1,通过对其细胞存活率、细胞因子TNF-α和IL-6分泌量、中性红吞噬能力以及膜表面蛋白Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)TLR2和TLR4表达量能力的测定,研究花脸香蘑菌丝体多糖的免疫活性。结果表明,花脸香蘑菌丝体多糖最佳提取条件为浸提温度65℃、浸提时间2.5 h、液料比40∶1(m L/g),提取率最高为15.88%;在0.05~1.6 mg/m L的有效剂量范围内,花脸香蘑菌丝体多糖能够不同程度地促进小鼠巨噬细胞Ana-1的增殖,提高细胞因子TNF-α和IL-6分泌量,增强中性红吞噬能力、膜表面蛋白TLR2和TLR4表达量能力,其中以1.6 mg/m L效果最佳。表明花脸香蘑菌丝体多糖具有优良的免疫活性。     

车前子多糖对骨髓来源树突状细胞表型和吞噬功能的影响

目的:探讨车前子多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)表型和功能的影响。方法:从小鼠骨髓中分离单核细胞,加入细胞因子rmGM-CSF、rmIL-4诱导分化成未成熟树突状细胞,收集细胞加入促成熟刺激剂LPS(阳性对照组)或车前子多糖。倒置显微镜观察树突状细胞的形态,流式细胞术检测成熟树突状细胞的表面标志CD11c和MHCII的表达及吞噬FITC-dextran的变化。结果:经4种不同的车前子多糖作用40h后,显著促进CD11c+MHCII+双阳性细胞的比率,在浓度(0～50μg/ml)范围内呈现剂量依赖性,当浓度高于50μg/ml时,双阳性细胞表达率呈现降低趋势。经多糖作用后吞噬FITC-dextran的能力降低,其中PS3的作用效果最明显,表达PE-CD11c×FITC-dextran的细胞比率只有11.53%。结论:车前子多糖促进CD11c+MHCII+双阳性细胞的比率,降低对FITC-dextran的吞噬能力,初步表明车前子多糖可以促进树突状细胞的成熟。     

杏鲍菇提取物对小鼠巨噬细胞免疫活性的研究

本文中以杏鲍菇子实体为原料,将杏鲍菇不同极性的提取物(PEs)对小鼠巨噬细胞Ana-1进行了免疫活性研究。将PEs作用于小鼠巨噬细胞Ana-1,通过MTT法测定其对Ana-1细胞增殖活性的影响,Elisa法测定Ana-1细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)在不同提取物浓度和不同作用时间的分泌量变化情况,中性红法检测对细胞吞噬活性的影响,Elisa法测定Ana-1细胞表面膜蛋白Toll样受体(TLR2、TLR4)的表达量的变化情况。结果显示:杏鲍菇4种提取物(PEs)对小鼠巨噬细胞Ana-1有不同程度上的免疫刺激作用,甲醇提取物(PEM)表现出了最强的促进细胞增殖和促进细胞因子分泌的活性,在PEM质量浓度为12.5μg/m L的条件下,能够促进Ana-1细胞增殖作用最强,细胞因子TNF-α和IL-6均出现分泌高峰;但PEM对细胞因子分泌的作用时间不同,PEM作用于Ana-1细胞后,在12 h时出现TNF-α分泌高峰,而IL-6在24 h时出现分泌高峰。此外,PEM可以激活Ana-1,提高细胞吞噬活性,促进细胞表面膜蛋白受体TLR2、TLR4的表达。本研究结果表明了PEM能够通过促进巨噬细胞增殖、诱导细胞因子分泌和提高吞噬活性的方式实现免疫增强功能。     

鼠曲草总黄酮抑制疼痛模型小鼠炎症因子产生而致镇痛作用

目的：研究鼠曲草总黄酮的镇痛活性及其作用机制。方法：采用热板刺激、腹腔注射醋酸法构建小鼠疼痛模型,观察灌胃给予不同剂量的鼠曲草总黄酮对小鼠疼痛反应的作用,研究鼠曲草总黄酮对疼痛小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、一氧化氮（nitric oxide,NO）的作用,以及对腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）基因表达的影响。结果：鼠曲草总黄酮可明显延长热刺激引起的小鼠舔足时间,抑制腹腔注射醋酸后引起的小鼠扭体反应;降低腹腔注射醋酸致痛小鼠血清中TNF-α、IL-6、NO的含量,也抑制小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、iNOS基因表达。结论：鼠曲草总黄酮具有镇痛作用,其作用与减少血清中炎症因子的产生和巨噬细胞介导的炎症反应有关。     

嗜酸乳酸杆菌对自主活动受限型应激小鼠肠道黏膜免疫状态的影响

目的：探讨嗜酸乳酸杆菌（Lactobacillus acidophilus,LA）对自主活动受限型应激小鼠肠道黏膜免疫状态的影响。方法：以健康雌性BALB/c小鼠为受试动物,分为常规饲养组（NC组）、常规饲养条件灌胃LA组（NC＋LA组）、应激组（S组）、应激条件灌胃LA组（S＋LA组）,小鼠的LA灌胃剂量为108 CFU/d;应激组小鼠每天被限制自主活动3 h;15 d后取材,采用流式细胞术、酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）等方法,对肠系膜淋巴结（mesenteric lymph nodes,MLN）中CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和CD11c＋树突细胞（CD11c＋ dendritic cell,CD11c＋ DC）比例,结肠组织白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）和白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）水平,以及小肠总分泌型免疫球蛋白A（secreted immunoglobulin A,sIgA）水平进行检测。结果：常规饲养条件下,LA能极显著提高小鼠MLN中CD4＋T细胞比例（P＜0.01）,显著提高MLN中CD11c＋ DC比例、小肠总sIgA水平和结肠组织IL-10水平（P＜0.05）,显著降低结肠组织IL-17水平（P＜0.05）,而对MLN中CD8＋T细胞比例无显著影响（P＞0.05）;应激条件能极显著降低小鼠MLN中CD4＋T细胞比例和CD11c＋ DC比例（P＜0.01）,显著降低CD8＋T细胞比例（P＜0.05）,极显著降低小鼠结肠组织IL-10水平和小肠总sIgA水平（P＜0.01）,极显著提高结肠组织IL-17水平（P＜0.01）;应激条件下,LA能显著提高小鼠MLN中CD4＋T细胞比例和CD11c＋ DC比例（P＜0.05）,显著提高小鼠结肠组织IL-10水平和小肠总sIgA水平（P＜0.05）,并显著降低结肠组织IL-17水平（P＜0.05）,而对小鼠MLN中CD8＋T细胞比例无显著影响（P＞0.05）。结论：给予自主活动受限型应激小鼠LA干预,可提高小鼠MLN中CD4＋T细胞和CD11c＋ DC比例,上调结肠IL-10和小肠总sIgA分泌水平,下调结肠IL-17分泌水平,调节应激小鼠的肠道黏膜免疫状态。     

多穗柯三叶苷对脂多糖诱导小鼠炎症反应的保护作用

探讨多穗柯三叶苷对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的小鼠炎症反应的抗炎症作用。以3、30、300 mg/（kg·d）3 个剂量组的多穗柯三叶苷灌胃小鼠3 d后,腹腔注射0.1 mg/kg LPS,观察三叶苷预处理对LPS诱导的炎症因子表达的影响。酶联免疫反应测定小鼠血清中炎症因子肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的含量,实时定量聚合酶链式反应法检测肝组织中TNF-α和IL-6的mRNA水平,免疫组织化学染色检测小鼠肝组织中TNF-α和IL-6蛋白水平。结果表明,3 mg/（kg·d）三叶苷剂量组可显著抑制LPS诱导的小鼠血清中TNF-α和IL-6的分泌,降低肝组织中TNF-α和IL-6的表达水平。多穗柯三叶苷对小鼠的炎症反应具有一定的保护作用。     

硫酸氨基葡萄糖对口服透明质酸缓解小鼠佐剂性关节炎的增效作用

目的：探讨硫酸氨基葡萄糖（glucosamine sulfate,GS）对口服透明质酸（hyaluronic acid,HA）缓解小鼠佐剂性关节炎的增效作用。方法：将50 只8 周龄ICR雄性小鼠随机分成5 组：正常组、模型组、HA组、GS组和HA＋GS组。除正常组以外,其余4 组小鼠左后足注射弗氏完全佐剂（freund’s complete adjuvant,FCA）建立佐剂性关节炎模型,然后进行4 周的HA和GS口服给药,并分别对小鼠体质量、足跖肿胀度进行测定,同时采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测小鼠血清中白细胞介素-1（interleukin-1,IL-1）及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的含量。结果：口服HA和GS都能够减轻小鼠的足跖肿胀度,而同时口服HA和GS能起到更好的消肿效果,血清中IL-1及TNF-α的含量也显著降低。结论：给予小鼠口服HA＋GS,比单独服用HA、GS能更有效、更快地缓解小鼠的足跖肿胀症状,同时能够降低血清中IL-1及TNF-α含量,进而对小鼠佐剂性关节炎起到更好的治愈效果。     

药桑多糖对四氯化碳所致大鼠肝损伤的保护作用

目的：研究药桑多糖对四氯化碳（CCl4）所致大鼠肝损伤的保护作用。方法：取健康Sprague-Dawley（SD）大鼠40 只,根据体质量随机分为5 组：对照组、CCl4损伤组、药桑多糖低（50 mg/（kg•d））、中（100 mg/（kg•d））、高（200 mg/（kg•d））剂量组,每组8 只,连续灌胃7 d后,除对照组外,其余各组大鼠腹腔注射CCl4橄榄油溶液制造肝损伤模型。24 h后,取血清测定谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）活力以及胆红素含量,取各器官计算脏器指数并测定肝脏超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathionperoxidase,GSH-Px）活力,以及丙二醛（malondialdehyde,MDA）、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）含量,并对肝脏进行组织切片观察。结果：100、200 mg/（kg•d）剂量的药桑多糖能显著增加大鼠体质量（P＜0.05）,降低肝脏指数（P＜0.05）、肾脏指数（P＜0.05）和脾脏指数（P＜0.01）,能显著抑制CCl4所致肝损伤大鼠血清ALT、AST活力和胆红素含量的升高（P＜0.05）;肝脏MDA、IFN-γ、TNF-α含量显著降低（P＜0.05）,SOD、CAT、GSH-Px活力以及IL-10含量显著升高（P＜0.05）。50 mg/（kg•d）剂量的药桑多糖能显著降低肝损伤大鼠的肝脏指数、肾脏指数和脾脏指数（P＜0.05）,显著增加肝脏GSH-Px活力和IL-10含量（P＜0.05）,降低肝脏TNF-α含量（P＜0.05）。结论：药桑多糖对CCl4诱导的大鼠肝损伤具有明显的保护作用,其肝脏保护作用与提高肝脏抗氧化能力及抑制肝脏炎症有关。     

γ-谷维素对脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7炎症因子表达的影响

利用细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7形成炎症模型,评价γ-谷维素对巨噬细胞炎症因子表达的影响。在LPS刺激的RAW264.7细胞培养基中,添加不同浓度的γ-谷维素,分析培养基中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量,以及NO_2~-/NO_3~-含量,发现γ-谷维素能抑制炎症因子的分泌;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)分析mRNA表达水平,确定γ-谷维素能抑制炎症因子的基因表达;采用Western blotting分析进一步确定γ-谷维素能抑制炎症因子的蛋白表达。综上所述,γ-谷维素能明显抑制炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6、NO等分泌和表达。