肌动球蛋白解离的影响因素研究

研究可能影响鸭肉肌动球蛋白解离的多种因素,包括内部因素（AMP、IMP、ADP、ATP、Ca2+、PO43-）和外部因素（NaCl腌制、不同种类磷酸盐腌制）。以肌动球蛋白提取物和鸭肉为原料,主要应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）法进行检测。结果表明：在4 ℃条件下,经过8、16 mmol/L的AMP、IMP处理和25～50 mmol/LPO43-处理的肌动球蛋白,检测到肌动蛋白条带浓度明显增加;经过8、16 mmol/L ADP处理和0.1～5.0 mmol/L Ca2+处理后的肌动球蛋白,检测到肌动蛋白条带浓度无明显变化。腌制对肌动球蛋白解离无明显影响。     

鸭肉肌动球蛋白解离的影响因素研究

研究可能影响鸭肉肌动球蛋白解离的多种因素,包括内部因素(AMP、IMP、ADP、ATP、Ca2+、PO43-)和外部因素(NaCl腌制、不同种类磷酸盐腌制)。以肌动球蛋白提取物和鸭肉为原料,主要应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)法进行检测。结果表明:在4℃条件下,经过8、16 mmol/L的AMP、IMP处理和25~50 mmol/L PO43-处理的肌动球蛋白,检测到肌动蛋白条带浓度明显增加;经过8、16 mmol/L ADP处理和0.1~5.0 mmol/L Ca2+处理后的肌动球蛋白,检测到肌动蛋白条带浓度无明显变化。腌制对肌动球蛋白解离无明显影响。     

一磷酸腺苷与肌动球蛋白相互作用的荧光光谱研究

目的：采用荧光分光光度法研究了一磷酸腺苷（adenosine 5’-monophosphate,AMP）与肌动球蛋白相互作用的情况。方法：根据分子间的相互作用力与相关热力学参数间的关系,结合AMP与肌动球蛋白相互作用的焓变和熵变,讨论AMP对肌动球蛋白荧光的猝灭机理,测定AMP与肌动球蛋白的猝灭常数、结合常数和作用力类型,考察AMP对肌动球蛋白构象的影响。结果：Western blotting证明了不同浓度AMP对肌动球蛋白解离的促进作用;AMP与肌动球蛋白结合反应中ΔG＜0,ΔH＞0,ΔS＞0,两者之间结合主要通过疏水相互作用,且AMP的存在使得肌动球蛋白的构象发生变化,疏水环境极性降低;荧光光谱分析表明AMP与肌动球蛋白的结合使肌动球蛋白内源荧光发生了有规律的猝灭,298 K和313 K温度条件下AMP与肌动球蛋白的静态猝灭常数分别为8.70×102、4.07×102 L/mol,结合常数KLB分别为9.253×102 L/mol和3.142×102 L/mol。结论：AMP通过疏水相互作用力和肌动球蛋白形成复合物,从而促进肌动球蛋白的解离。     

缺氧诱导因子对滩羊肉宰后初期能量水平及肉色的影响

为研究缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor 1，HIF-1）对滩羊肉宰后成熟48 h内糖酵解关键酶、能量水平、pH值及肉色的影响，本实验以4 ℃成熟2、6、12、24、48 h的滩羊背最长肌为研究对象，测定不同成熟期HIF-1表达量，磷酸丙糖异构酶（triose-phosphate isomerase，TPI）活力，能量物质三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）、二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）、单磷酸腺苷（adenosine monophosphate，AMP）水平，肌肉pH值及肉色的变化，并对HIF-1表达量与TPI活力，ATP、ADP、AMP含量，pH值及肉色进行相关性分析。结果表明，宰后2～24 h内HIF-1表达量迅速升至最高值，24 h后有所下降；TPI活力于宰后6 h升至最高，随后逐渐降低；宰后48 h内能量物质ATP、ADP、AMP水平均随成熟时间延长逐渐降低；宰后48 h内pH值显著降低（P＜0.05）；肉色指标L*、a*值及b*值均随成熟时间延长显著升高（P＜0.05）。宰后成熟2～48 h内滩羊肉HIF-1表达量与TPI活力、能量物质水平、肉色及pH值均显著相关（P＜0.05、P＜0.01），可能是由于受宰后缺氧信号诱导，HIF-1表达量于宰后6 h内迅速升高，HIF-1复合体转移至细胞核与糖酵解基因结合，促进糖酵解相关基因表达，促使糖酵解途径增强，提高了糖酵解相关酶活力，并降低肌肉pH值。综上，HIF-1可能通过调控宰后糖酵解及肌肉pH值影响肉色。     

焦磷酸钠对腺嘌呤核苷三磷酸解离氧化肌动球蛋白的影响

研究焦磷酸钠（sodium pyrophosphate,TSPP）对肌动球蛋白的氧化和解离程度,及对腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate,ATP）解离氧化肌动球蛋白效果的影响。结果表明,TSPP处理能抑制蛋白适度氧化（1?mmol/L?H2O2）,但氧化程度加深（10、20?mmol/L?H2O2）时抑制不明显。TSPP和ATP分别处理时,未氧化肌动球蛋白的特性黏数分别下降了30.4%和41.9%,平均粒径分别下降了21.2%和48.4%。二者相继处理后,特性黏数和平均粒径反而上升。所有氧化样品中由ATP引起的相对黏数变化量几乎都稍高于未氧化样品,但TSPP处理使升高幅度减弱。无论是否经过ATP处理,TSPP样品中均存在未解离且呈纤维状的肌动球蛋白,氧化后形成大的聚集物。可见,TSPP解离效果远不及ATP,且能抑制ATP的解离作用,氧化在一定程度上能促进ATP解离,但受TSPP抑制。研究结果为利用TSPP改善肉制品品质提供了理论依据。     

冷藏条件下缢蛏、文蛤ATP关联产物的变化及降解途径的探究

为了研究冷藏条件下,缢蛏、文蛤三磷酸腺苷(ATP)及关联产物的变化和降解途径。采用高效液相色谱法对贮藏在4℃下的缢蛏和文蛤的9种ATP关联物进行测定,分别为:三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP),二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP),单磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP),肌苷酸(inosine monphosphate,IMP),腺嘌呤核苷(adenosine,AdR),次黄嘌呤核苷(inosine,HxR),次黄嘌呤(hypoxanthine,Hx),黄嘌呤(xanthine,Xt)和腺嘌呤(adenine,Ad)。研究发现,在4℃下,从缢蛏和文蛤中检测到的产物都为ATP、ADP、AMP、IMP、AdR、HxR、Hx和Xt,未测到Ad。ATP的初始值分别为1.033和0.824μmol/g,试验前4 d下降较快,之后缓慢下降;ADP呈下降趋势;AMP、IMP、AdR和HxR含量先上升后下降;Xt呈上升趋势;缢蛏中Hx呈上升趋势,文蛤则先上升后下降。根据ATP关联物的变化,推测2种贝类的代谢途径为ATP→ADP→AMP→IMP→HxR→Hx→Xt和ATP→ADP→AMP→AdR→HxR→Hx→Xt,因文蛤中IMP含量极少,所以推测文蛤以第2条途径为主。结合感官评价和TVB-N实验发现,2种贝类的Kax值与感官评分和TVB-N均存在显著相关性,Kax值可用于2种贝类的鲜度评价。     

葡萄果肉组织的能量水平和细胞壁代谢对其自溶软化的影响

为研究葡萄采后贮藏过程中自溶软化与能量水平及细胞壁代谢的关系,比较贮藏初期和末期果皮超微结 构的变化。采后葡萄经钙联合涂膜和热处理后,低温（（4.0±0.5） ℃）贮藏,定期测定果肉自溶指数、硬度、 腐烂率、膜透性、能量物质（三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）、二磷酸腺苷（adenosine diphosphate, ADP）、单磷酸腺苷（adenosine monophosphate,AMP））含量及能荷（energy charge,EC）、细胞壁降解酶活 力和细胞壁成分的变化,扫描电子显微镜观察贮藏初期和末期不同处理果实内果皮的超微结构,以未处理组为对 照。结果显示：随贮藏时间的延长,果实自溶指数、腐烂率和膜透性升高,硬度和能量物质下降,多聚半乳糖醛 酸酶（polygalacturonase,PG）、果胶甲酯酶（pectinesterase,PE）和纤维素酶（cellulase,Cx）活力上升,β-半 乳糖苷酶（β-galactosidase,β-Gal）活力在贮藏30 d内下降,之后急剧升高。细胞壁组分原果胶、纤维素和半纤 维素含量下降,水溶性果胶含量前期上升,后期下降;葡萄内果皮的超微结构破坏,出现了大的孔洞。葡萄果实 自溶指数与能量水平、细胞壁降解酶活力和细胞壁组分紧密相关,果实自溶指数与ATP、ADP含量极显著负相关 （P＜0.01）,和AMP显著负相关（P＜0.05）,与EC无明显相关性（P＞0.05）;与PG、PE、Cx活力极显著正相 关（P＜0.01）,与β-Gal活力无明显相关性（P＞0.05）;与原果胶、水溶性果胶、纤维素和半纤维素含量极显著负 相关（P＜0.01）。钙联合涂膜和热处理能够维持组织的高能量状态和致密的超微结构,抑制PG、PE和Cx活力的升 高,延缓细胞壁降解,延缓自溶软化,其中涂膜显著优于热处理（P＜0.05）。     

AMPK活性对宰后牛肉糖酵解、肌肉内环境及品质的影响

为探究牛肉宰后成熟过程中单磷酸腺苷活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）对糖酵解、肌肉内环境及品质的影响,以0.50 mol/L 5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷（5-amino-4-imidazolecarboxamide,AICAR）处理的西杂牛背最长肌为对象,于4 ℃进行成熟,测定宰后成熟期间肌肉AMPKα基因（PRKAA1、PRKAA2）转录量、P-AMPK表达量、AMPK活性、糖酵解水平及品质指标的变化情况。结果表明：宰后24～120?h,处理组AMPKα基因转录量、P-AMPK表达量及AMPK活力均显著高于对照组（P＜0.05）;72～168?h,处理组pH值和肌糖原含量显著低于对照组（P＜0.05）,乳酸含量显著高于对照组（P＜0.05）;12～168?h,处理组L*、b*值及ATP、ADP、AMP和IMP含量均显著高于对照组（P＜0.05）,a*值显著低于对照组（P＜0.05）;24～120?h,处理组蒸煮损失率和肌原纤维小片化指数显著高于对照组（P＜0.05）,剪切力显著低于对照组（P＜0.05）。AICAR通过激活AMPK并加快宰后糖酵解影响肌肉内环境、肉色、剪切力及肌纤维微观结构变化,加快宰后肌肉成熟进程,说明AMPK活性对宰后肌肉糖酵解及品质变化具有重要影响,且可通过调控宰后肌肉AMPK活性来调节肌肉品质。     

高效液相色谱法同时测定烟酰胺单核苷酸中5种有关物质

目的 构建同时检测烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)中5种有关物质[烟酰胺氧化物、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、一磷酸腺苷(adenosine monophosphate, AMP)及烟酰胺]含量的高效液相色谱法。方法 采用C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以50 mmol/L磷酸二氢钾缓冲盐溶液(用磷酸调节pH为4.5)-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速为1 mL/min,进样量为20μL,检测波长210 nm,柱温20℃,试样盘控温:5℃,并对方法的专属性、灵敏性、准确性、重复性、耐用性及适用性进行验证。结果 烟酰胺氧化物、ATP、ADP、AMP及烟酰胺分别在质量浓度0.4060～16.2402、0.4110～16.4403、0.4150～16.6010、0.4163～16.6507、0.4028～16.1206μg/mL范围内,质量浓度与峰面积呈现良好的线性关系,线性系数r²     

鸭胸肌肉加热过程中肌动球蛋白解离研究

为了解鸭胸肌肉加热过程中肌动球蛋白变化情况,本实验以鸭胸肉为材料,研究了加热温度（45、50、55、60、65、70 ℃）和加热时间（0、1、10、20、30、60 min）对肉中肌动球蛋白解离的影响。采用蛋白质免疫印迹技术测定肌动蛋白的含量。结果表明：在45 ℃加热条件下,肌动球蛋白几乎未发生解离（P＞0.05）;而在50、55 ℃或60 ℃加热条件下,随着加热时间的延长,肌动蛋白含量先增加后降低,但均较对照组显著性增加（P＜0.05）;65 ℃加热60 min,肌动蛋白含量降至对照组水平;70 ℃加热条件下,加热时间为30 min或60 min,检测不到肌动蛋白的存在。因此,加热温度为50～60 ℃,加热时间为10～30 min时能显著促进肌动球蛋白解离。     

糖醇对结冷胶凝胶质构的影响

利用物性分析仪研究赤藓糖醇、木糖醇、乳糖醇对结冷胶凝胶质构的影响。结果表明：3 种糖醇都能使结冷胶凝胶强度和硬度降低,且都随糖醇质量浓度的增加而降低,3 种糖醇的影响力为乳糖醇>木糖醇>赤藓糖醇,但对结冷胶凝胶脆性的影响不显著。其次,15 g/100 mL的复合糖醇对结冷胶凝胶质构的影响皆小于相同质量浓度的单一糖醇对质构的影响,复合糖醇间不存在正协同作用。最后,在以K+为成胶离子时（40～400 mmol/L）,乳糖醇对结冷胶凝胶质构有影响;在以Ca2+为成胶离子时,只在低浓度时（2～10 mmol/L）,乳糖醇对结冷胶凝胶质构影响明显,当Ca2+浓度升高时（10～50 mmol/L）,乳糖醇对结冷胶凝胶质构几乎不产生影响。     

冷冻贮藏过程中氧化诱导牦牛肉肌原纤维蛋白结构的变化

探讨在普通包装和真空包装冻藏条件下的牦牛背最长肌和股二头肌的肌原纤维蛋白氧化变化。结果表明：羰基含量60 d时显著增加（P＜0.05）,除股二头肌普通包装组在90 d保藏时的羰基含量显著升高外,其他处理组都呈下降趋势（P＞0.05）;总巯基含量在冻藏60 d内总体上升（P＜0.05）,60 d之后呈下降趋势;采用真空包装的两个处理组的表面疏水性在冷冻贮藏90 d以后都比普通包装的低;背最长肌的Ca2＋-ATP酶活性比股二头肌的低,而K-ATP酶活性则无显著差异。背最长肌肌原纤维蛋白溶解性在整个实验周期中有显著变化（P＜0.05）,股二头肌肌原纤维蛋白溶解性的变化不显著（P＞0.05）。此外,冷冻贮藏期间的蛋白质条带发生了变化,肌球蛋白重链和肌动蛋白随着冻藏时间的延长都发生了不同程度的降解。该结果说明随着冷冻贮藏时间的延长,肌原纤维蛋白发生了氧化。且随时间延长,蛋白氧化越严重,表面疏水性和溶解性越低,总巯基含量、K-ATP酶活性和Ca-ATP酶活性含量越高。     

乳糖饮水对Sprague-Dawley大鼠糖、脂、尿酸代谢的影响

目的：探讨不同质量浓度乳糖饮水对Sprague-Dawley（SD）大鼠糖、脂、尿酸代谢的影响。方法：分别以清水,50、100、150 g/L乳糖水饲喂大鼠8 周,观察不同时间点大鼠的能量摄入及体质量等一般状态指标。取大鼠血清检测血糖（glucose,GLU）、尿酸（uric acid,UA）、甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（totalcholesterol,TC）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平。结果：与正常组相比,150 g/L乳糖组大鼠的能量摄入显著降低,且于实验第1、2周体质量显著降低（P＜0.05）。各剂量乳糖组大鼠的GLU水平均高于正常组（P＜0.05或P＜0.01）。50、100 g/L乳糖组大鼠的UA水平低于正常组（P＜0.05或P＜0.01）,150 g/L乳糖组大鼠的UA水平于第1周一次性升高（P＜0.05）。100 g/L乳糖组大鼠的TG水平于第6周显著升高（P＜0.05）,150 g/L乳糖组大鼠的TG水平于第1～3周显著升高且TC水平于第2、3、7周显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。乳糖组大鼠的LDL-C水平均显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论：不同质量浓度乳糖摄入可对大鼠血糖、血脂、尿酸代谢产生不同影响,使用时应控制乳糖适宜的摄入剂量。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷对人巨核细胞株Dami增殖分化的影响

目的：研究植物花色苷单体矢车菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g）对人巨核细胞株Dami的增殖、分化作用。方法：不同浓度的花色苷Cy-3-g（0.05、0.50、5.00、50.00、100.00 mmol/L）与人巨核细胞株Dami细胞共同培养,并将用完全培养基培养的细胞设为对照组。培养结束后,用台盼蓝染色法检测巨核细胞活性、噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）染色法检测细胞增殖能力,软琼脂细胞集落培养法观察巨核细胞集落生成情况。采用Giemsa染色法观察细胞形态、流式细胞术检测巨核细胞DNA多倍体的生成及细胞表面CD41阳性表达率。结果：与对照组相比,50.00、100.00 mmol/L的Cy-3-g可增强Dami细胞活性,差异具有统计学意义（P＜0.05）;各Cy-3-g剂量组与对照组相比,均可明显增强Dami细胞增殖能力（P＜0.01）;Dami细胞集落数目、DNA多倍体数目以及CD41的阳性表达率在50.00、100.00 mmol/L Cy-3-g作用下明显升高,且与对照组相比均具有统计学差异（P＜0.01）。结论：Cy-3-g能够明显促进人巨核细胞株Dami的增殖、分化,这可以为花色苷促进血小板生成提供可能的理论依据。     

金针菇菇脚对肉鸡血清生化指标和脂肪沉积的影响

目的：研究金针菇菇脚（Flammulina velutipes stembase,FVS）对Arbor Acres（AA）肉鸡血清生化指标、腹脂沉积、肝脏以及肌肉中脂肪含量的影响。方法：选用1 日龄AA肉鸡270 羽,随机分为5 个处理组（每个处理组3 个重复,每个重复18 只）：空白组（饲喂基础日粮）、抗生素组（基础日粮＋5 mg/kg黄霉素）、3 个水平的FVS组（基础日粮＋2%、4%、6% FVS,均为质量分数,下同）,实验期为42 d。结果：1）与空白组相比,日粮中添加2%和6%的FVS可显著降低肉鸡血清中甘油三酯（triglyceride,TG）含量（P＜0.05）;2）各剂量的FVS均可降低21 日龄肉鸡血清中总胆固醇（total cholesterol,TC）含量（P＜0.05）,显著提高21 日龄肉鸡血清中瘦素（leptin,LEP）含量（P＜0.05）,而对高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平无显著影响（P＞0.05）;3）与空白组相比,FVS可显著提高肉鸡体质量（P＜0.05）,各剂量的FVS可明显降低胸肌、腿肌、肝脏脂肪含量,而各组肉鸡粪便中脂肪含量无显著差异（P＞0.05）;4）与空白组相比,日粮中添加4%和6%的FVS可显著降低42 日龄肉鸡腹脂率（P＜0.05）,日粮中添加2%和6%的FVS可显著提高42 日龄肉鸡的激素敏感脂肪酶（hormone-sensitive lipase,HSL）活力（P＜0.05）。结论：在肉鸡饲粮中添加FVS能够促进肉鸡生长,同时起到一定的降血脂和减少机体脂肪沉积的作用。     

三丁酸甘油脂对宫内发育迟缓哺乳仔猪血液生理生化指标和胰腺的影响

研究宫内发育迟缓（intra-uterine growth retardation,IUGR）对哺乳仔猪血液生理生化指标、胰腺质量及其分泌酶活性的影响,以及日粮添加0.1%三丁酸甘油酯对其调控作用。选取8 头正常初生体质量仔猪和16 头IUGR仔猪,将IUGR仔猪随机均分为2 组,分别饲喂基础人工乳（IUGR组）、基础人工乳＋0.1%三丁酸甘油酯（IUGR＋tributyrin,IT组）,正常仔猪饲喂基础人工乳（NBW组）。7 日龄开始饲喂,21 日龄时每组选取6 头体质量相近的仔猪屠宰取样,并对血液指标和胰腺酶活力进行测定。结果表明：1）受IUGR影响,仔猪血液中尿素、总胆红素含量显著降低（P＜0.05）,总蛋白、肌酐含量显著上升（P＜0.05）;胰腺质量也较NBW组显著降低（P＜0.05）;胰淀粉酶、脂肪酶活力显著降低（P＜0.05）。2）IUGR仔猪日粮补充0.1%三丁酸甘油酯后,血液中尿素、总胆红素、总蛋白、肌酐与NBW组相比,均无显著差异（P＞0.05）;且胰腺质量得到增加（P＞0.05）,胰蛋白酶、胰淀粉酶和脂肪酶含量均显著提高（P＜0.05）。结果提示：IUGR可对哺乳仔猪血液生理生化造成一定的影响和阻碍胰腺的发育以及酶活性的分泌,日粮补充0.1%三丁酸甘油酯能对IUGR造成的损伤有一定的缓解作用。