缫丝蚕蛹蛋白酶解产物体外抗氧化能力研究

目的:研究缫丝蚕蛹蛋白酶解产物的抗氧化能力,为缫丝蚕蛹蛋白的深度开发利用提供参考。方法:还原力法、DPPH自由基法、超氧阴离子自由基法、羟自由基法。结果:五种水解度较高的缫丝蚕蛹蛋白多肽中,蚕蛹蛋白水解专用酶的水解产物(E1)的还原力能力最强,酶解原液稀释100倍后吸光度为0.75;对O-2·和DPPH·的清除率也最高,酶解原液分别稀释10倍和100倍,其清除率分别为34.54%和79.38%,·OH的清除率次之,酶解原液稀释10倍清除率为43.77%。结论:蚕蛹蛋白水解专用酶水解得到的缫丝蚕蛹蛋白肽在体外表现出较好的抗氧化活性。     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

脱脂羊脑蛋白酶解条件优化及酶解产物体外抗氧化活性

以脱脂羊脑蛋白为原料,采用响应面（response surface method,RSM）法建立脱脂羊脑蛋白的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶水解回归模型,优化酶解工艺条件,在体外研究脱脂羊脑中性蛋白酶酶解产物的抗氧化性能。结果表明：脱脂羊脑蛋白底物质量浓度为3.03 g/100 mL,酶添加量为5 653.20 U/g,温度为39.4 ℃时,脱脂羊脑蛋白水解度最高,达到（14.59±1.26）%。当脱脂羊脑蛋白水解度为（14.39±1.17）%时,酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和羟自由基（•OH）清除能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时 ,酶解产物对超氧阴离子自由基（O2－•）清除能力和总还原能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时,酶解产物对DPPH自由基、•OH、O2－•、亚硝酸根阴离子的IC50分别为2.49、3.13、10.37、10.89 mg/mL,酶解产物对Fe2+螯合率的IC50为7.48 mg/mL,证明脱脂羊脑蛋白酶解产物具有一定抗氧化活性。     

响应面优化鱿鱼须脱皮液胶原肽酶解工艺及抗氧化活性

目的：研究秘鲁鱿鱼须脱皮液胶原肽酶解工艺及抗氧化活性。方法：以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,利用单因素试验和响应面法对其酶解工艺进行优化,并采用2,2’-联氮-二（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt,ABTS）自由基与•OH清除率及亚铁还原能力评价其酶解产物抗氧化活性以及通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和凝胶排阻色谱分析其分子质量分布。结果：最适酶解工艺为酶解温度50 ℃、初始pH 7.4、底物蛋白质质量分数3.2%、酶解时间3.7 h、酶添加量3 000 U/g。在此条件下,水解度和酶解产物DPPH自由基清除率分别为（37.23±0.08）%和（43.61±0.09）%,对ABTS＋•和•OH清除率的IC50分别为0.37 mg/mL和0.41 mg/mL,且表现出较强的亚铁还原能力;SDS-PAGE显示最适酶解工艺下,蛋白质基本被水解为小分子多肽;凝胶排阻色谱分析可知,酶解产物分子质量在1～5 kD之间。结论：酶解产物具备较强的抗氧化活性,可作为抗氧化活性物质基料,充分开发利用。     

鸭肉蛋白源抗氧化肽的酶法制备工艺

以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,采用响应曲面法（response surface methodology,RSM）优化胃蛋白酶制备鸭肉抗氧化肽的最佳酶解工艺条件。结果表明：以底物质量浓度、酶与底物质量比和酶解时间为自变量,以DPPH自由基清除率为响应值,得到的回归方程拟合度高（R2=0.995 7,R2Adj=0.992 7）。其中酶与底物质量比对DPPH自由基清除率的影响最大,其次是酶解时间,底物质量浓度的影响最小。胃蛋白酶的最优酶解工艺条件为底物质量浓度10.89 g/100 mL、酶与底物质量比0.013%、酶解时间3.54 h,此时DPPH自由基清除率的理论值可达84.23%,通过优化验证实验测得,在最优酶解条件下,DPPH自由基清除率的实际值为（83.57±0.20）%。     

大鲵肽酱香酒酶解工艺优化及抗氧化活性研究

为研发一种具有抗氧化活性的大鲵肽酱香酒,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率为主要指标,多肽含量为辅助指标,比较酸水解、酶水解和直接浸泡等不同预处理方式对大鲵肽酱香酒抗氧化活性的影响,并在单因素试验基础上采用响应面法对大鲵肽酱香酒酶解条件优化。结果表明,酶水解法优于酸水解法和直接泡制,其最佳酶解工艺为木瓜蛋白酶添加量6 126 U/g、酶解时间4 h、酶解温度55 ℃、酶解pH 4.5。在此优化条件下,大鲵肽酱香酒多肽含量为（14.20±0.11） mg/mL,对DPPH自由基的清除率为（77.98±0.99）%,羟自由基清除率为（70.66±0.70）%,还原能力（吸光度值A700 nm）为0.651,表明大鲵肽酱香酒具有一定抗氧化性。     

石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及其抗氧化性

以冰鲜石斑鱼肉为原料,采用碱性蛋白酶酶解的方法制备蛋白肽。以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用正交试验设计优化肽的制备工艺;利用DPPH自由基法、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid）ammonium salt,ABTS）自由基法、羟自由基（·OH）法和铁氰化钾还原法评价酶解物的抗氧化性。结果表明：石斑鱼肉肽的最佳制备条件为：酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶用量5 000 U/g、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h;石斑鱼肉肽酶解物具有较强的抗氧化性,清除DPPH自由基能力、ABTS+·能力、·OH能力和总还原力均随酶解物质量浓度的增加而增强;酶解物清除DPPH自由基、ABTS+·、·OH的半抑制浓度（IC50）值分别为（1.18±0.26）、（0.89±0.05） mg/mL和（0.35±0.02） mg/mL。     

超滤对缫丝蚕蛹蛋白肽感官品质的影响

目的：分析酶解缫丝蚕蛹蛋白所得肽经超滤处理后的性质,为其深度开发利用提供参考。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白肽,气相色谱-质谱联用仪（gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS）测定挥发性成分。结果：缫丝蚕蛹蛋白肽经超滤后各组分（5.0 mg/mL）的明度（L*值）、偏向绿程度（a*值）、偏向黄程度（b*值）均为大于3 000 D组分＞酶解原液＞200～3 000 D组分,且颜色由中黄色（酶解原液）变为深黄色（大于3 000 D组分）和浅黄色（200～3 000 D组分）;121 ℃灭菌处理对它们的色泽无显著影响（P＞0.05）;各组分吸湿性强度为200～3 000 D组分＞酶解原液＞大于3 000 D组分,其中200～3 000 D组分的最高吸湿率达到42.24%;超滤后缫丝蚕蛹蛋白肽的气味由刺激性难闻气味（脱脂蚕蛹蛋白粉）转变为有肉香（200～3 000 D组分）、果香及甜香味（大于3 000 D组分）。结论：超滤提升了缫丝蚕蛹蛋白肽的感官品质。     

黄玉米粗类黄酮提取工艺正交试验优化及其体外抗氧化活性

以黄玉米纪元1号为材料,采用单因素试验与三元二次正交试验,考察乙醇体积分数、料液比、浸提温度及浸提时间对粗类黄酮提取量的影响及黄玉米粗类黄酮清除1,1-二苯基-2-苦肼基（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和•OH的能力。得出最优工艺参数为料液比1∶35.5（g/mL）、69 ℃浸提1.85 h,此条件下粗类黄酮提取量为85.88 mg/g。当粗类黄酮质量浓度为20 mg/mL时,对DPPH自由基和•OH的清除率分别为76.47%和32.62%,分别相当于芦丁标准品（0.1、0.2 mg/mL）清除能力的81%～84%和40%～50%。黄玉米粗类黄酮对DPPH自由基的清除率明显大于对• OH的清除率,且随质量浓度提高,清除率显著提高（P＜0.05）。     

驼乳与牛乳乳清蛋白酶解工艺优化及其产物抗氧化能力分析

为了研究不同蛋白水解酶对驼乳和牛乳抗氧化能力的影响,向驼乳和牛乳乳清蛋白中添加不同蛋白水解酶,探究乳清蛋白抗氧化活性肽的最佳制备条件,并对其抗氧化能力进行比较分析。首先从3种蛋白酶中筛选出最佳用酶,在此基础上以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-Trinitrophenylhydrazine,DPPH)自由基的清除率为响应值,进行单因素和响应面试验,同时研究了驼乳和牛乳乳清蛋白抗氧化肽对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子的清除效果。结果表明,木瓜蛋白酶水解物的能力最强,水解度可达15%。驼乳乳清蛋白最佳酶解工艺为酶解pH6.4,酶解温度55 ℃,底物浓度2.73%,DPPH自由基清除率可达71.9%。牛乳乳清蛋白最佳酶解工艺为酶解pH6,酶解温度54 ℃,底物浓度4%,DPPH自由基清除率达69.9%。在最佳酶解条件下,驼乳乳清蛋白酶解液的·OH清除率为58.2%,O₂-·清除率为67.2%;牛乳乳清蛋白酶解液·OH清除率为52.2%,·O₂-清除率为60.7%。驼乳乳清蛋白酶解液的抗氧化性在不同程度上均高于牛乳乳清蛋白酶解液,驼乳和牛乳乳清酶解液的DPPH自由基清除能力较强,其次是O₂-·清除能力,·OH清除能力最弱。     

银合欢果皮总黄酮含量测定及抗氧化活性

目的：建立测定银合欢果皮中总黄酮含量的方法,研究其体外抗氧化活性。方法：运用NaNO2-Al(NO3)3显色法,检测总黄酮含量,并采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）法和还原力分析其抗氧化活性。结果：芦丁在0.01～0.05 mg/mL（r=0.999 1）质量浓度范围内,吸光度与质量浓度之间呈良好线性关系,平均回收率为99.35%（相对标准偏差为1.37%）,总黄酮含量为1.76 mg/g;银合欢果皮具有显著的抗氧化活性,且呈剂量依赖性,其抑制DPPH自由基的半数抑制浓度（IC50）为0.32 mg/mL,还原力IC50为70.12 μg/mL。结论：所建立的方法简单快捷、准确、灵敏、重复性好,适合银合欢果皮中总黄酮含量的测定。银合欢果皮中含有丰富的黄酮类化合物,且具有良好的体外抗氧化活性。     

鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的抗氧化活性

选取铁离子还原体系和3 种自由基体系为指标,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体外清除自由基效果和抗氧化作用。采用超滤膜分离鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽组分,筛选出体外清除•OH活性最好的组分,再建立小鼠衰老模型,将分离得到活性最好的组分采用灌胃法,测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）和羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）的含量,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内抗氧化和清除自由基作用。结果表明：鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O－2•、DPPH自由基、•OH具有清除效果,质量浓度为10 mg/mL时对•OH、DPPH自由基、O－2•的清除率和对Fe3+ 的还原能力分别为70.48%、68.78%、42.53%和0.676;分子质量小于2 000 D的鮟鱇皮胶原蛋白肽组分对•OH具有较好的清除效果,IC50为15.7 mg/mL;剂量为100 mg/（kg•d）时,显著提高了皮肤中SOD、GSH-Px、CAT的活性,较模型组分别增加20.9%、41.3%和58.1%,且显著抑制MDA的形成。     

石榴皮木醋液的化学成分及抗氧化活性

为探索石榴皮资源利用的新途径,以石榴皮为原料经干馏（350～500 ℃）制备了木醋液,并采用气相色谱-质谱联用仪分析其化学成分,通过对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和羟自由基清除实验评价其抗氧化活性。结果显示,石榴皮木醋液的总酚、总酮和有机酸含量分别为10.92、7.81 mg/mL和2.53%;共检测出27 种有机化合物,包括酚类、有机酸、醇类、烷烃、醛类及酮类化合物等。石榴皮木醋液对DPPH自由基和羟自由基清除力的VC当量分别为10.22 μg/mg和45.19 μg/mg。结果表明,石榴皮木醋液可作为一种天然抗氧化剂资源,具有一定的开发利用价值。     

鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性

为了解酶解时间、蛋白酶种类对鸭肉蛋白酶解产物抗氧化特性的影响,分别用复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰酶对鸭肉进行单酶酶解和双酶分步酶解（胰酶＋复合蛋白酶、胰酶＋风味蛋白酶）,制备不同时间段的酶解产物,并对其自由基清除能力（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl radical,·OH）和超氧阴离子自由基（superoxide radical,O2－·））和总还原力进行分析。结果表明：各鸭肉蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率随着酶解时间的延长而增加,但·OH和O2－·清除率及总还原力随着酶解时间的延长先增加后降低（P＜0.05）。在5 种鸭肉蛋白酶解产物中,复合蛋白酶酶解物表现出最强的DPPH自由基清除能力（75.70±1.54）%、·OH清除能力（59.41±1.24）%和O2－·清除能力（98.50±4.51）%,但用双酶分步酶解得到的酶解产物表现出最强的总还原力（0.330±0.017）。因此鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性受酶解时间和蛋白酶种类的影响,复合蛋白酶是制备鸭肉蛋白源抗氧化肽的最适蛋白酶。     

响应面试验优化超声辅助提取连钱草多糖工艺及其体外抗氧化活性

通过中心复合试验优化超声辅助提取连钱草多糖的工艺,以1,1-二苯基-2-苦肼基（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和2,2’-连氮基-双-（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）自由基（2,2’--azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) radical,ABTS＋•）清除能力、Fe2＋螯合力、铁离子还原抗氧化力（ferric reducingantioxidant power,FRAP）和N,N-二甲基-对苯二胺（N,N-dimethyl-p-phenylenediamine,DMPD）自由基清除能力为指标,研究连钱草多糖的体外抗氧化活性。结果表明,超声辅助提取连钱草多糖的最优工艺为pH 7.2、液固比32∶1（mL/g）、超声功率270 W、超声时间8 min,此条件下多糖提取率在4.95%～5.12%范围内。体外抗氧化活性结果显示,连钱草多糖DPPH自由基清除能力为（0.51±0.04）μmol Trolox/mg,ABTS＋•清除能力为（0.69±0.04）μmolTrolox/mg,Fe2＋螯合力为（0.51±0.29）μmol EDTA/mg,FRAP值为（3.45±0.03）μmol Trolox/mg,DMPD自由基清除能力为（0.17±0.01）μmol Trolox/mg。     

厚朴多糖提取工艺及其体外抗氧化活性

通过Box-Behnken试验优化提取厚朴多糖的工艺;以超氧阴离子自由基、1,1-二苯基-二苦基肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和2,2’-连氮基-双-（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（ABTS＋•）清除能力,Fe2＋螯合力、铁离子还原抗氧化力（ferric reducing antioxidant power,FRAP）为指标,探究厚朴多糖的体外抗氧化活性。结果表明,提取厚朴多糖的最佳工艺条件为pH 7.3、液固比32∶1（mL/g）、提取温度78 ℃、提取时间139 min,此条件下多糖提取率达3.35%～3.52%。体外抗氧化活性结果表明,厚朴多糖超氧阴离子自由基清除力为（18.72±2.12） μmol VC/mg,DPPH自由基清除能力达（0.59±0.05） μmol Trolox/mg,ABTS＋•清除能力为（0.57±0.04） μmol Trolox/mg,Fe2＋螯合力为（0.38±0.02） μmol EDTA/mg,FRAP值为（2.19±0.31） μmol Trolox/mg。     

4 个葡萄品种葡萄籽冷榨油的性质与体外抗氧化活性

目的：评价4 种葡萄籽冷榨油脂肪酸组成、总酚含量及体外抗氧化活性。方法：收集单品种葡萄籽榨油,气相色谱法测定脂肪酸组成,Folin-酚法测定总酚含量,用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl,DPPH）法、2,2’-联氮双-（3-乙基苯并噻唑林-6-磺酸）二胺盐（2,2’-azinobis(3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid)ammonium salt,ABTS）法、Fenton反应和总抗氧化能力法分析其体外抗氧化能力。结果：4 个品种葡萄籽冷榨油均富含亚油酸（72.77%～77.36%）,不饱和脂肪酸含量为88.12%～91.06%;总酚含量为60.77～100.53 μg GAE/g,爱格丽葡萄籽冷榨油总酚含量最高,其次是北冰红、媚丽、赤霞珠葡萄籽冷榨油;4 个品种的葡萄籽冷榨油都有良好的清除DPPH自由基和ABTS＋·的能力,且随着葡萄籽冷榨油浓度的增大,清除能力增强,清除DPPH自由基的IC50变化范围为10.19～13.82 mg/mL,清除ABTS＋·的IC50变化范围为11.62～19.25 mg/mL;清除羟自由基（·OH）的能力范围为13.18～27.08 U/mL;总抗氧化能力范围为1.08～3.68 U/mL。4 个品种的葡萄籽冷榨油的体外抗氧化能力强弱顺序为爱格丽＞北冰红＞媚丽＞赤霞珠。     

益智仁总黄酮超声辅助提取工艺优化及其抗氧化活性

为优化益智仁总黄酮的超声辅助提取工艺,通过单因素试验考察乙醇体积分数、液料比、超声时间和超声功率对总黄酮得率的影响,在单因素试验的基础上,通过Box-Behnken试验设计,获得益智仁总黄酮超声辅助提取的最佳工艺;以总抗氧化能力、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical,DPPH）自由基能力、清除超氧阴离子自由基能力、螯合铁离子能力为指标,评价了益智仁总黄酮的抗氧化活性。结果表明：超声辅助提取益智仁总黄酮的最佳工艺条件为乙醇体积分数65%、液料比40∶1（mL/g）、超声时间35 min、超声功率360 W,在此条件下益智仁总黄酮得率为0.50%;益智仁总黄酮具有较好的抗氧化活性,总抗氧化能力、清除DPPH自由基能力、清除超氧阴离子自由基能力和螯合铁离子能力均与黄酮质量浓度表现出一定的量效关系;益智仁总黄酮清除DPPH自由基、清除超氧阴离子自由基和螯合铁离子能力的半数有效浓度（EC50）分别为（2.85±0.20）、（0.87±0.05）g/L和（2.45±0.30）g/L。