羊奶源产细菌素乳酸菌筛选、鉴定及益生特性研究

以常见食源性致病菌（单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌）为指示菌,从鲜羊奶中筛选获得3株乳酸菌,并对其抑菌性质及益生特性进行了研究。结果显示：3株乳酸菌分别鉴定为粪肠球菌（命名为DH9003和DH9012）和乳酸乳球菌（命名为DH9011）。3株乳酸菌的抑菌产物具有细菌素的特征（耐高温和蛋白酶处理后失活）且在低质量浓度条件下（MIC50和4MIC50）可以阻止单增李斯特菌生长,其中2株粪肠球菌（DH9003和DH9012）产生的细菌素在高质量浓度（16MIC50）条件下可完全抑制单增李斯特菌生长。3株产细菌素乳酸菌均无溶血性,都对氨苄青霉素（50 mg/mL）和硫酸链霉素（100 mg/mL）敏感;在胆盐、模拟肠道和不同pH胃液（2.5,3.0,3.5）环境中均可存活;同时,3株乳酸菌均有较好的自聚集性,自聚范围为30%~55%,乳酸菌DH9003和DH9012与单增李斯特菌和大肠埃希氏菌的共聚集性相对较高,分别为52.6%、63.2%和68.5%、57.6%,而乳酸菌DH9011与单增李斯特菌的共聚集性为15.6%,与大肠埃希氏菌不聚集;3株乳酸菌均具有较高的β-半乳糖苷酶活力。上述试验结果表明：3株产细菌素乳酸菌的抑菌能力强,能够耐胆盐、人工肠胃液,有良好的黏附能力,安全可控,具有益生菌特质及应用价值。     

一种植物乳杆菌细菌素的特性研究

该文以植物乳杆菌G9菌株为试材,对其细菌素的产生条件及细菌素租提物的生物学特性进行了研究,发现在对数末期其抑菌活性最高,对热相对稳定（100C,20min）,易被胰蛋白酶、蛋白酶K失活,显示活性的pH值范围为4．0～6．0,细菌素粗提液表现为不仅抗明串株菌属、片球菌属、乳杆菌属的一些菌株,而且执一些非乳酸菌的革兰氏阳性菌,但对大肠杆菌（E．coli）等革兰氏阴性菌没有任何抑制作用。说明G9菌株产生的是一类抗广谱革兰氏阳性菌的细菌素。     

产细菌素植物乳杆菌菌株的筛选及其细菌素生物学特征研究

从甘蓝泡菜中分离到６９株乳酸杆菌,通过琼脂点扩散交叉拮抗试验,筛选出３株有明显抑菌活性代谢产物的植物乳杆菌。排除酸、过氧化氢等干扰因素后,离心发酵液对指示菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ９６Ｄ仍有抑菌作用,用胰蛋白酶对其透析液处理后活性丧失,说明它们产生的抑菌物质是细菌素。以Ｇ８菌株为试材,对其细菌素类物质的产生及细菌素粗提物进一步研究,发现在对数末期其抑菌活性最高,对热相对稳定（１００℃,２０ｍｉｎ）,易被胰蛋白酶、蛋白酶Ｋ和胃蛋白酶失活,显示活性的ｐＨ值范围为４．０～５．５,粗提液表现为不仅抗明串株菌属、片球菌属、乳杆菌属的一些菌株,而且抗一些非乳酸菌的革兰氏阳性菌,但对大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）等革兰氏阴性菌没有任何抑制作用。说明Ｇ８菌株产生的是一类抗广谱革兰氏阳性菌的细菌素     

筛选自泡菜的发酵乳杆菌细菌素纯化及抑菌特性分析

从中国传统发酵蔬菜中筛选鉴定对食源性致病菌有广谱抗性的细菌素（命名为BLF52）产生菌株并对细菌素分离纯化和抑菌特性分析。分子筛凝胶过滤层析和半制备高效液相色谱（RP-HPLC）纯化细菌素并用Tricine-SDS-PAGE法测定其分子量。筛选得到产细菌素的发酵乳杆菌（Lactobacilus fermentum） CH-16。MRS培养基中34℃发酵至稳定期前期即24~30 h对S.aureus抑制活性最大（875 AU/mL）。BLF52纯化至单一组分,分子量5.6 kDa,40~80℃（30 min）、pH2.0~7.0（2 h）有良好稳定性。胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性完全丧失,α-淀粉酶对其无影响,表明BLF52有典型的细菌素特性。BLF52对食源性腐败菌和致病菌如单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌和副溶血性弧菌均有抑制活性,通过杀菌模式抑制培养中的S.aureus生长。细菌素BLF52有潜力开发为适合酸性或中性食品使用的食品防腐剂。     

1株分泌细菌素屎肠球菌ZJ19的筛选和鉴定

从浙江大学医学院附属妇产科医院的健康初生婴儿粪便中分离获得76株乳酸菌,通过琼脂平板扩散法筛选到1株乳酸菌菌株,该菌不仅对革兰氏阳性菌,如单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有抑菌活性,同时对大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血性杆菌等阴性菌也有较好的抑菌活性。通过排除有机酸、过氧化氢等的干扰后,该菌发酵液离心后的上清液仍有较强的抑菌活性,用蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶分别处理后该上清液均失去抑菌活性,由此确定该乳酸菌产生的抑菌活性物质具有蛋白质属性,为1种细菌素。该细菌素具有热稳定性,在pH 3.75,121℃热处理30 min,抑菌活性仍保持在80%以上。经过生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定菌株为屎肠球菌,命名为Enterococcus faecium ZJ19。     

一株后生元菌株的抑菌特性研究及其细菌素基因簇的挖掘

本文旨在筛选一株可拮抗中国大鲵源嗜水气单胞菌的后生元菌株,并对其进行抑菌特性的研究和细菌素基因簇的挖掘。以中国大鲵病原性嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila, Ah2）为指示菌,筛选一株产细菌素乳酸菌株并评估其药敏特性;采用有机溶剂萃取法初步纯化菌株产细菌素;通过pH、温度和消化酶耐受性、贮藏稳定性、抑菌谱及最小抑菌（MIC）和杀菌浓度（MBC）共六类指标评价细菌素的抑菌特性;溶血反应与细胞毒性实验测试细菌素对Ah2的抑菌效果,经扫描电子显微镜初步探究细菌素的抑菌机制;经由紫外全波长扫描定性细菌素以及Tricine-SDS-PAGE电泳测定细菌素的分子量范围;最后根据菌株的全基因组序列挖掘其潜在的细菌素基因簇（RiPPs）。结果显示,从青岛市售腐乳中筛出一株产细菌素植物乳植物杆菌M4L1（Lactiplantibacillus plantarum M4L1）。初步纯化M4L1产细菌素并命名为LP01。细菌素LP01具备良好的消化酶耐受性,且在pH2~10、?20~121 ℃和9个月贮藏期内均表现出稳定的抑菌活性,并对单增李斯特菌、弗氏柠檬酸杆菌等14株革兰氏阳性和阴性菌均有不同程度的抑制作用;另外,LP01对Ah2的MIC和MBC分别为12.94和25.88 μg/mL。经MBC浓度的LP01处理后的Ah2,溶血活性和细胞毒性均得到明显缓解;SEM观察其通过破坏Ah2的细胞壁具有抑制或杀伤作用。LP01在波长200~220 nm处的肽类特征吸收峰显著,电泳后条带显示其分子量在3.3~4.0 kDa,LP01为小分子肽类细菌素。此外,基因注释到M4L1有2个细菌素基因簇（RiPPs）,对应产物分别为Plantaricin K和Plantaricin E,均属于植物乳杆菌II类细菌素。菌株M4L1不仅含有多种抗菌物质相关基因簇,而且其细菌素LP01具备了优良的抑菌性能,能有效抑制多种水产病原菌、食物腐败菌及食源性致病菌等。产细菌素植物乳植物杆菌M4L1作为一株潜在的后生元菌株具有较好的应用前景。     

丁酸梭菌优良菌株LXYB-2抑菌活性及抗逆性研究

该研究以一株丁酸梭菌（Clostridium butyricum）LXKJ-1为出发菌株,通过常压室温等离子体（ARTP）诱变得到的一株耐丁酸 钠突变菌株LXYB-2,采用牛津杯法比较菌株LXYB-2与菌株LXKJ-1的抑菌能力,同时采用活菌计数法对两株菌株的耐高温、人工胃 液、人工肠液及胆盐等抗逆性进行比较。 结果表明,两株菌株对9种常见致病菌均有较好的抑菌活性,除单核细胞增生李斯特氏菌和 金黄色葡萄球菌外,两株菌的抑菌活性差异显著（P＜0.05）。 在高温90 ℃处理5 min时,两株菌耐受性差异显著（P＜0.05）;人工胃、肠 液耐受性实验结果无显著差异（P＞0.05）;在胆盐质量分数达到0.4%时,两株菌胆盐耐受性差异显著（P＜0.05）。 优良菌株LXYB-2更 适合作为益生菌饲料添加剂产品应用于动物养殖业。     

辽西传统发酵食品中抗单增李斯特菌乳酸菌的筛选与鉴定

目的:从传统辽西发酵食品中筛选对单增李斯特菌具有良好拮抗作用的乳酸菌菌株。方法:采用双层琼脂扩散法筛选乳酸菌优良菌株。采用酸性实验、热处理实验、蛋白酶敏感性实验分析拮抗特性,利用生长曲线分析拮抗物质形成过程,扫描电镜分析细胞结构完整性。通过生理生化实验和16S rRNA序列进行菌株鉴定。结果:从13株乳酸菌中筛选出1株抗单增李斯特菌活性较强的菌株DL3,抗菌物质存在于无细胞上清液中。经胃蛋白酶处理后抑菌活性丧失了27.50%,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶可使抑菌活性完全丧失,经121℃处理15 min后,抑菌活性仍保留96.88%,在p H2.5~6.5时具有抑菌活性,表明菌株DL3产生的抑菌物质可能为细菌素。添加菌株DL3无细胞上清液可使单增李斯特菌的生长曲线延迟期和稳定期延长4 h,显著地缩短了其生长期。扫描电镜结果表明经菌株DL3无细胞上清液处理的单增李斯特菌菌体变小且边缘模糊不清,其中一端细胞原生质发生泄漏。经鉴定菌株DL3为植物乳杆菌。结论:获得1株对单增李斯特菌有较强拮抗活性的植物乳杆菌DL3,该菌的拮抗活性物质可能为细菌素,可作为食品防腐剂潜在的应用菌株。     

青枯菌无毒自发突变株接种花生引起的生化变化

花生经青枯菌无毒自发突变株ＡＰ７接种后，体内过氧化物酶的活性会增高，经无毒自发突变菌株ＡＰ７接种后的花生叶片组织粗提液对青枯菌的致病菌株有强烈的体外抑菌作用。将这种粗提液与致病菌株同时注入花生叶片内，亦表现出抑制发病作用，而且这种抑病作用随着粗提液浓度下降而减弱。     

乳酸菌细菌素Durancin GL对单增李斯特菌的抗菌活性及机制

单增李斯特菌广泛分布于肉类、禽类、蛋类、乳制品及蔬菜中,且适应能力强,即使在4 ℃的冷藏环境下仍可生长繁殖,是食品中主要的食源性致病菌之一。乳酸菌细菌素Durancin GL是由干酪中肠球菌产生的一种新型细菌素,对单增李斯特菌具有靶向抑制作用。本实验研究了Durancin GL对单增李斯特菌的抗菌活性及作用机制。通过最小抑菌浓度和抑菌动力学实验检测Durancin GL对单增李斯特菌的抑制作用,结合监测胞内物质泄漏、菌体存活情况以及形态学分析,探讨Durancin GL对单增李斯特菌的抑菌机制。Durancin GL对单增李斯特菌最小抑菌浓度为（2.5±0.4）mg/L,可引起李斯特菌细胞质泄漏,增加细胞外液电导率,导致菌体细胞死亡,从而发挥其抑菌活性。     

Inhibition of Listeria monocytogenes by in situ produced and semipurified bacteriocins of Carnobacterium spp. on vacuum-packed, refrigerated cold-smoked salmon

Listeria monocytogenes inhibition by Carnobacterium strains and crude bacteriocins on sterile and commercial vacuum-packed cold-smoked salmon stored at 4 degrees C and 8 degrees C was investigated. Carnobacterium piscicola V1 was bactericidal against L. monocytogenes at the two temperatures, whereas Carnobacterium divergens V41 presented a bacteriostatic effect. C. piscicola SF668 delayed L. monocytogenes growth at 8 degrees C and had a bacteriostatic effect at 4 degrees C. Listeria growth was not affected by a non-bacteriocin-producing C. piscicola. Crude extracts of piscicocins were bactericidal at 4 degrees C and 8 degrees C. Listeria growth was delayed by divercin V41 at 8 degrees C and was inhibited at 4 degrees C. Nisin delayed Listeria growth at 8 degrees C and was bacteriostatic at 4 degrees C. The present study demonstrates that L. monocytogenes growth could be prevented on vacuum-packed cold-smoked salmon by Carnobacterium and associated bacteriocins at chilled temperatures. Moreover, no product spoilage could be observed with the use of such bacteriocin-producing strains as demonstrated by good sensorial analyses and low biogenic amine production.     

抗食源性病原菌细菌素的筛选及特性研究

目的 筛选一种抗食源性病原菌的细菌素,并对其稳定性进行研究.方法 以食源性病原菌Bacillus cereus ATCC 14579、Listeria monocytogenes LM201、Listeria monocytogenes LM605为指示菌,采用琼脂扩散法筛选细菌素产生菌,通过离子交换树脂法和高效液相色...     

Application of bacteriocin-producing Enterococcus faecium isolated from donkey milk,in the bio-control of Listeria monocytogenes in fresh whey cheese

A total of 79 bacterial strains, previously isolated from donkey milk, were screened for their antimicrobial activity against several spoilage and foodborne pathogenic bacteria. Amongst them, 3 strains belonging to Enterococcus faecium displayed antimicrobial activity against Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus and Bacillus cereus. Mass spectrometry analysis demonstrated that all enterococci used in this study produced peptides with masses consistent with those for enterocins A and B. The cell-free supernatants of the identified bacteriocin-producing enterococci were equally active over a wide range of pH and heat treatments making them excellent candidates for potential applications in bio-preservation. Bacteriocins produced by these strains were tested for their capability to control post-processing contamination and growth of L. monocytogenes during refrigerated storage of artificially contaminated fresh whey cheese. One strain was considered bactericidal while the other two were classified as bacteriostatic.     

Antibiosis of some lactic acid bacteria including Lactobacillus acidophilus toward Listeria monocytogenes

Eleven strains of lactic acid bacteria were tested by the 'spot' on the 'lawn' method for their antagonistic activity against four strains of Listeria monocytogenes. Four out of the five strains of lactic acid bacteria most antagonistic toward the pathogen were those cultures known to produce bacteriocins. Four other strains of lactic acid bacteria were not antagonistic against Listeria by this method. Seventeen inhibition zones of the pathogen were obtained at 25 degrees C as compared to 10 at 32 degrees C. Lactobacillus acidophilus strains NU-A and 88, growing in the presence of L. monocytogenes in milk prevented the latter from attaining populations it would have in pure culture (P less than 0.01). 10(1.4)-10(3.5) lower numbers were noted. L. acidophilus in most cases exhibited a bacteriostatic effect toward the pathogen except for strain 88 which appeared to have a bactericidal effect (P less than 0.01) against Listeria strain OH. The lactobacilli reduced the pH of the milk to 4.7 over a 24 h period, showing that acid played a role in the observed antibiosis.     

实时荧光HDA法快速检测单核细胞增生李斯特菌

目的：建立一种用于单核细胞增生李斯特菌的实时荧光赖解旋酶恒温核酸扩增（helicase-dependentisothermal DNA amplification,HDA）快速检测方法。方法：针对单核细胞增生李斯特菌hly基因序列设计引物对,基于荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）仪的平台,提取单核细胞增生李斯特菌基因组DNA,以此作为模板,优化反应温度、反应时间及引物浓度。利用单核细胞增生李斯特菌及10 株对照菌株,并与实时荧光PCR对比,来验证实时荧光HDA方法的特异性和灵敏度,并初步用于样品检测。结果：实时荧光HDA体系的最适引物浓度为0.075 μmol/L,反应温度及反应时间为65 ℃、80 min（40 个循环）,具有良好的特异性和灵敏度。结论：建立了一种特异性强、灵敏度高的实时荧光HDA检测单核细胞增生李斯特菌的方法。     

免疫磁珠捕获PCR快速检测单核细胞增生李斯特氏菌

利用免疫磁珠富集单核细胞增生李斯特氏菌,采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增进行快速检测。所制备的免疫磁珠选取在37 ℃条件下均匀振荡1 h为最佳包被条件,1 mg磁珠偶联抗体的最佳量为100 μg/mg,制备的免疫磁珠捕获率为45%。所建立的免疫磁珠捕获-PCR技术在样品细菌浓度达到104 CFU/mL即可被检出,其灵敏度是直接PCR检测限（105 CFU/mL）的10 倍,可为病原菌的富集和快速检测提供新方法。     

荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌多重PCR检测方法的建立

针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3 种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3 种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌的hlyA基因设计3 对特异性引物,在确定引物特异性的基础上,对3 种标准菌株及在冷却肉上过夜富集后进行灵敏度检测。结果表明,该多重聚合酶链式反应方法对于同时检测这3 种有害微生物具有高度的特异性;同时检测这3 种菌时,纯菌DNA检测限可达1 pg/μL;将3 种菌一起接种到冷却肉中35 ℃过夜培养后,荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的检测限分别可达到9、5、70 CFU/mL。     

Antimicrobial activity of extracts of edible wild and cultivated mushrooms against foodborne bacterial strains

The antimicrobial activity of aqueous, methanol, hexane, and ethyl acetate extracts from edible wild and cultivated mushrooms against nine foodborne pathogenic bacterial strains (Escherichia coli O157:H7, Salmonella Enteritidis, Shigella sonnei, Vibrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica, Bacillus cereus, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, and Staphylococcus aureus) was screened with a disk diffusion assay. Twenty-nine of the 48 species tested had antimicrobial activity. Methanol, ethyl acetate, and aqueous extracts accounted for 92.8% of the positive assays, whereas the hexane extracts accounted for only 7.2%. Gram-positive bacteria were more sensitive than gram-negative bacteria to fungal extracts, and C. perfringens was the most sensitive microorganism. Aqueous extracts from Clitocybe geotropa and Lentinula edodes had the highest antimicrobial activity against all the bacterial strains tested.     

单增李斯特菌入侵宿主分子机理研究进展

单增李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）是四大高风险食源性致病菌之一;是致病菌致病机理研究模式生物;作为典型的胞内寄生菌,Lm可穿透肠道屏障、血脑屏障、胎盘屏障等宿主防御体系,并采用高超的生存策略逃逸宿主防御体系,保证其在宿主细胞内生存繁衍。本文从Lm毒力因子、宿主受体、信号转导等分子机理入手,就单增李斯特菌入侵免疫吞噬细胞、非免疫细胞以及实验动物三方面,对近年来Lm的致病机理研究进展予以评述。     

应用PEN3型电子鼻传感器快速检测食源性致病菌

为研究化学传感器在食源性致病菌快速检测中的应用,利用基于金属氧化物传感元件阵列的PEN3型电子 鼻传感器,根据其对不同食源性致病菌产生代谢产物的差异响应。对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪链球菌、单增 李斯特菌这4 种常见食源性致病菌在培养2、4、6、8、10 h以及稀释103 、105、107 倍后进行PEN3化学传感器响应 实验,建立指纹图谱。通过聚类分析、主成分分析（principal component analysis,PCA）、线性判别式分析（linear discriminant analysis,LDA）等方法,确定化学传感器对不同培养时间、不同浓度细菌是否产生有效响应。结果表 明,PCA和LDA这两种模式识别方法能够很好地将不同培养时间的细菌培养液区分开来,使组间变异和组内变异的 比率达到最大,并在较低浓度条件下,4 种食源性致病菌仍有较高的区分度,这表明化学传感器技术检测低浓度致 病菌具有一定可行性。