槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响

为观察槲皮素对人宫颈癌细胞HeLa增殖及其放射敏感性的影响,以人宫颈癌细胞株HeLa为研究对象,以MTT比色法和克隆形成实验检测槲皮素对HeLa细胞生长的抑制作用,并以克隆形成实验观察槲皮素对HeLa细胞株放射敏感性的影响。结果表明槲皮素能明显抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖,存在剂量依赖和时间依赖性。克隆形成实验显示槲皮素对HeLa细胞的作用可分为两部分,一部分抑制HeLa细胞增殖,另一部分为诱导HeLa细胞死亡。克隆形成实验也显示槲皮素联合X射线照射能著显降低照射后HeLa细胞的存活率。本实验研究认为槲皮素具有放射增敏作用,为临床开展放射线联合槲皮素治疗肿瘤的研究提供了实验依据。     

青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa和Siha细胞辐照后DNA损伤水平的影响

为研究青蒿琥酯联合照射对人宫颈癌HeLa和Siha细胞DNA损伤的影响,取对数生长期细胞,通过MTT比色法测定不同浓度青蒿琥酯作用24h对HeLa和Siha细胞生长的抑制效应,将细胞分为单纯照射组和联合治疗组,每组分别给予0、2、4、6Gy四个剂量的60↑Coγ射线照射,应用单细胞凝胶电泳（SCGE）法检测青蒿琥酯对HeLa和Siha细胞照射后DNA损伤的影响。MTT结果表明,青蒿琥酯对宫颈癌HeLa和Siha细胞的生长抑制呈剂量依赖性。单细胞凝胶电泳法检测发现：联合治疗组HeLa细胞经0、2、4和60↑Coγ射线辐照后彗星细胞的尾部DNA百分数及Olive尾矩明显大于单纯照射组,差别有统计学意义（P〈0．05）,而Siha细胞联合治疗组与单纯辐照组相比,无明显差异。实验结果表明,青蒿琥酯对p53突变型予宫颈癌HeLa细胞具有明显的放射增敏作用,而对p53野生型子宫颈癌Siha细胞没有明显的放射增敏作用。     

抗增殖蛋白Tob1对人类宫颈癌细胞系HeLa放射敏感性影响的实验研究

为探讨抗增殖蛋白家族成员Tob1(transducer of ErbB2,1)对宫颈癌细胞系HeLa放射敏感性的影响,构建可表达Tob1基因全长的重组质粒pcDNA3.0-Tob1(pc3/Tob1),采用脂质体介导转染入HeLa细胞,经G418筛选出阳性耐抗克隆。通过集落形成实验研究Tob1对HeLa细胞放射敏感性的影响,借助流式细胞术和WesternBlot法检测相关分子机制。结果显示,较之HeLa母细胞和转染"空"质粒pcDNA3.0的HeLa/pc3细胞,转染pc3/Tob1后HeLa细胞放射敏感性明显增加;Tob1蛋白高表达增加了HeLa细胞中由辐射诱导的细胞凋亡,提高了由辐射引起的Bax蛋白的表达,降低了Bcl2蛋白表达。上述结果提示Tob1提高了HeLa细胞对电离辐射的敏感性,其机制可能与其上调Bax蛋白的表达、下调Bcl2蛋白的表达,从而增加由辐射诱导的细胞凋亡有关。     

他莫昔芬联合~(60)Co γ射线辐照下调脑胶质瘤细胞PKCα蛋白表达的实验研究

研究他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)联合Y射线辐照对脑胶质瘤细胞PKCα蛋白表达的影响,初步探讨TAM降低辐射抗性的机制.采用Western-Blot法检测PKCα和G1期调控蛋白CylinD1的表达;碱性单细胞凝胶电泳法检测DNA链断裂.结果提示,TAM联合γ射线辐照可诱导PKCα蛋白和CyclinD1蛋白表达量降低,增加单纯照射对DNA的损伤并抑制其修复.结果提示,TAM联合Y射线辐照能够增强TAM或辐照单独处理对PKCα蛋白表达的下调、诱导CyclinD1低表达和抑制DNA损伤修复,与TAM降低SHG-44细胞的辐射抗性有关.     

Smac基因对γ射线照射诱导的宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

将Smac基因全长cDNA转染HeLa细胞,以探讨Smac基因过表达对γ射线诱导的宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其可能机制.转染24小时后 Western Blot结果表明,转染Smac基因全长cDNA的HeLa/Smac细胞其Smac基因表达量与转染pcDNA3.1空载体的HeLa/pcDNA3.1细胞Smac基因表达量相比上调,而相反Smac基因的底物Survivin基因表达量下调.γ射线照射后HeLa/Smac细胞与HeLa/pcDNA3.1细胞相比凋亡率显著升高,Caspase-3活性上调,但HeLa/Smac细胞与HeLa/pcDNA3.1细胞相比DNA损伤及修复无显著变化,对细胞周期也无明显影响.     

微波辐射诱导HeLa细胞凋亡机制的初步研究

采用2.5、5、10、15和20 mW/cm2强度微波辐射HeLa细胞20 min,观察了不同强度微波辐射对HeLa细胞增殖、细胞周期的影响。结果表明,受微波辐射的细胞生长受到抑制,数量明显减少,细胞皱缩变形,体积缩小。随着微波辐射强度的增加,细胞增殖受到明显抑制,呈现剂量依赖性。5、10和20 mW/cm2微波辐射的HeLa细胞培养24 h后,G2/M期的比例分别为11.6%、14.5%和18.2%,与对照组相比有显著性差异(p<0.05),由此可见微波辐射可将细胞阻滞于G2/M期。微波辐射后,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平下降,Bax和Caspase-3表达水平逐渐升高,证明其作用机制可能与Bcl-2表达水平下调,Bax和Caspase-3表达水平升高相关。     

12C^6＋离子束诱导HeLa细胞DNA损伤效应

本文研究了HeLa细胞经过12C^6＋离子柬辐照之后的DNA损伤效应,及辐照后p53激活的分子机制。运用中性单细胞电泳技术,检测了HeLa细胞经过4Gy12C6＋离子束辐照间隔0、3、6和12h之后DNA的损伤情况,及0.5、1、2和4Gy12C^6＋离子束辐照后即时的DNA损伤情况。同时运用细胞生长实时监测仪监测了HeLa细胞在经过0、0．5和1Gy也C6＋离子束辐照之后的生长变化,并运用AO／EB双染检测了辐照细胞24h后的凋亡情况。另外,利用8mmol／L的咖啡因[抑制ATM（ataxia-telangiectasia,mutated）和ATR（ATMand Rad3．relatedkinase）1和20μmol／L的wortmannin[抑制ATM和DNA—PK（DNA-dependent protein kinase）】处理HeLa细胞后再进行1Gy12C^6＋离子束辐照,通过westernblot检测p53的表达。结果显示,12C^6＋离子束辐照可造成HeLa细胞的DNA损伤,损伤随剂量升高而升高但随测定间隔时间降低,诱导HeLa细胞发生凋亡;而且辐照后p53表达升高。结果证明12C^6＋离子束辐照可造成HeLa细胞的DNA损伤并诱导损伤修复及凋亡等效应,损伤效应相关因子p53被激活,并且激活依赖于ATM。     

NU7026对肝癌细胞放射增敏作用及机制研究

为给研制新的抗癌和放射增敏药物提供理论依据,采用Westernblot检测DNA—PKcs在肝癌细胞中的表达水平及NU7026对DNA—PKcs活性的影响,以彗星实验表达检测细胞DNA受损的情况,微核实验观察染色体损伤,克隆形成实验观察对细胞株放射敏感性的影响。结果表明,DNA．PKcs在肝癌细胞中呈高表达,NU7026能抑制辐射所诱发的p-DNA—PKcs／S2056的活化,微核实验及彗星实验检测表明,NU7026能有效延长辐照后细胞的修复时间,并能明显降低放射后细胞的克隆形成率。提示NU7026对肝癌细胞有放射增敏作用,其作用机制与抑制DNA-PKcs活性有关。     

AS1411辐射增敏机理的研究

为研究AS1411对宫颈癌HeLa细胞的辐射增敏机理,采用γ-H2AX免疫荧光法观察HeLa细胞DNA损伤情况;流式细胞术检测AS1411对HeLa细胞周期及凋亡的影响。结果显示:经AS1411预处理的HeLa细胞核内DNA断裂点数目明显增多;AS1411预处理不影响由辐射引起的细胞周期阻滞,但能够促进辐射诱导的HeLa细胞凋亡率的增长。AS1411通过阻止由辐射引起的DNA损伤的修复及诱发细胞凋亡增加HeLa细胞的辐射敏感性,但此作用机理与细胞周期无关。     

青蒿琥酯对人宫颈癌细胞放射增敏作用的影响研究

本工作主要涉及青蒿琥酯对体外培养人宫颈癌HeLa、Siha细胞株的放射增敏作用.实验选择人宫颈癌细胞HeLa、Siha作为实验细胞.利用四氮唑盐比色试验(MTT)确定细胞辐射损伤实验最佳药物浓度;常规染色体畸变法、胞质分裂阻滞微核法(CB法)分别研究青蒿琥酯对辐射诱发人宫颈癌细胞染色体畸变、微核的影响.确定了青蒿琥酯的...     

MG132联合X射线对非小细胞肺癌生长转移和凋亡的影响

探讨蛋白酶体抑制剂MG132联合X射线对非小细胞肺癌H1299细胞生长、转移侵袭和细胞凋亡的影响及机制。采用MTT法检测不同MG132浓度不同时间处理后肺癌H1299细胞的增殖;Transwell小室实验测定肺癌细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术测定肺癌细胞的凋亡;Western—blot法测定蛋白表达水平。结果表明,MG132能明显抑制H1299细胞的生长,并呈现剂量-效应和处理时间-效应关系;MG132在无毒性剂量下联合X射线可显著抑制H1299细胞的迁移及侵袭能力,并明显诱导细胞凋亡;MG132能明显降低H1299细胞的基质金属蛋白酶-2、-9的表达水平,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,同时增加凋亡蛋白Bax的表达水平。提示MG132可以显著抑制人非小细胞肺癌H1299细胞的生长,且在无毒性剂量下联合X射线可以明显降低癌细胞转移和侵袭能力,能显著加强X射线诱导的细胞凋亡作用。     

X射线全身照射对小鼠胸腺细胞Cyclin B1和p34cdc2蛋白表达的影响

本文采用免疫组织化学法研究了低、高剂量X射线全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞CyclinB1和p34^cdc2蛋白表达的变化。结果表明,与假照组相比,75mGy X射线全身照射后8h小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达开始升高,12h达高峰,48h恢复至正常水平;而2Gy照射后4h小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达开始降低,12h降至最低,24h有回升趋势,48h恢复至假照水平。p34^cdc2蛋白的表达,与假照组相比,75mGy照射后4～48h未见明显变化;而2Gy照射后的时程变化与相同剂量照射后CyclinB1蛋白表达的变化基本一致。提示：低剂量X射线全身照射可诱导小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达增强,从而促进细胞周期进程,但对p34^cdc2表达无影响;相反,较高剂量照射导致CyclinB1和p34^cdc2蛋白表达均下降,最终发生G2阻滞。     

干扰ATM基因表达增强胃癌细胞AGS的放射敏感性

为探讨RNA干扰共济失调毛细血管扩张性突变(Ataxia-telangiectasia mutated,ATM)基因表达后对胃癌细胞AGS放射敏感性的影响,通过构建ATM基因RNA干扰质粒转染AGS细胞,获得干扰效率高的克隆细胞AGS-Ri-ATM,并采用RT-PCR和Western blot分别检测m RNA和蛋白表达水平,平板克隆形成实验观察细胞经放射后对细胞生长的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。检测结果显示其ATM基因表达被干扰下调。经X射线照射至不同吸收剂量,AGS-Ri-ATM平板克隆形成数量/率远低于AGS-Vector的平板克隆形成数量/率,差异显著(p0.05),具有统计学意义。流式细胞术检测显示当吸收剂量为4 Gy时,AGS-Ri-ATM被阻滞在G1期,同时在12 h后出现明显的凋亡想象。结果表明,ATM基因被干扰后可以诱导细胞周期的阻滞,以及凋亡的增加而增强AGS细胞的放射敏感性。     

Study of substrate topographical effects on epithelial cell behavior using etched alpha-particle tracks on PADC films

Micrometer-size pits on the surface of a polymer (polyallyldiglycol carbonate or PADC) substrate created by alpha-particle irradiation and subsequent chemical etching were used to study the topographical effects alone on cell behavior. Vinculin, the cell adhesion and membrane protrusion protein, was used as an indicator of cytoskeletonal reorganization on the substrate and localization of vinculin was used to demonstrate the presence of focal adhesions. In our experiments, vinculin expressed in epithelial HeLa cells cultured on PADC films with track-etch pits, but not in cells cultured on the raw or chemically etched blank films. In other words, vinculin expression was induced by the topography of track-etch pits, while etching of the substrate alone (without alpha-particle irradiation) did not cause up-regulation of vinculin protein expression. HeLa cells cultured on PADC films with track-etch pits also showed changes in cell proliferation, cell area and cell circularity, and were largely contained by the pits. In other words, the cell membrane edges tended to be in contact with the pits. By comparing the correlation between the positions of HeLa cells and the pits, and that between the positions of cells and computer-simulated pits, the tendency for membrane edges of HeLa cells to be in contact with the pits was recognized. This could be explained by inhibition of membrane protrusion at the pits. In conclusion, substrate track-etch pits were an important determinant of epithelial cell behaviors.     

白藜芦醇对肺癌A549细胞的放射增敏作用及其机制研究

摘要采用MTT法检测不同浓度白藜芦醇对肺癌A549细胞的毒性;克隆形成实验测定白藜芦醇对A549细胞增殖抑制作用;碱性单细胞凝胶电泳实验（彗星实验）检测细胞DNA受损情况;采用Westernblot法检测白藜芦醇与辐射联合作用对抑制凋亡蛋白Survivin的影响。结果表明,白藜芦醇对肺癌A549细胞的抑制作用随着白藜芦醇浓度升高及时间延长而增加：白藜芦醇与辐射联合作用可以明显增加辐射所致A549细胞的DNA损伤（p〈0．05）,并降低克隆形成率及抑制凋亡蛋白Survivin的表达。表明白藜芦醇对A549细胞具有放射增敏作用,且放射增敏作用可能是通过抑制Survivin蛋白的表达实现的。     

ELAC2对乳腺癌细胞MCF-7浸润转移和放射敏感性的影响

为了探讨ELAC2对乳腺癌细胞MCF-7浸润转移和放射敏感性的影响,利用脂质体转染法将ELAC2基因转入MCF-7细胞,Western blot法检测ELAC2、cyclinB、CDC2和P53蛋白表达水平,细胞划痕法和Boyden小室法检测细胞浸润转移能力,集落形成法检测细胞存活分数,流式细胞仪检测细胞周期。结果表明,成功构建了ELAC2高表达的MCF-7/ELAC2细胞株;ELAC2高表达明显抑制细胞的浸润和转移;细胞受X线照射后,ELAC2高表达使细胞放射敏感性增强,G2期细胞比例增多,同时cyclinB表达降低,P53和Tyr-15磷酸化CDC2表达升高。提示ELAC2高表达可明显抑制细胞浸润和转移;ELAC2高表达使细胞辐射敏感性增加很可能与下调cyclinB、上调P53和Tyr-15磷酸化CDC2蛋白水平有关。     

辐射诱导分子lnc-RI稳定敲低细胞系建立及其功能

制备lnc-RI干涉表达的慢病毒颗粒,建立lnc-RI稳定下调的He La细胞系,探索lnc-RI对细胞辐射敏感性的作用。首先将lnc-RI特异性干涉序列插入干涉表达载体p GLV2中,并制备慢病毒颗粒;然后,将慢病毒颗粒感染He La细胞,建立lnc-RI稳定下调的细胞系,并通过RT-PCR检测不同干涉序列对lnc-RI表达的干涉效果;最后,通过平板克隆形成实验分析lnc-RI表达下调对He La细胞放射敏感性的影响。结果显示,成功制备了携带lnc-RI干涉序列的慢病毒颗粒,并成功感染He La细胞,通过RT-PCR实验鉴定获得两株lnc-RI稳定敲低细胞系。克隆形成实验发现,与对照相比,lnc-RI敲低的He La细胞系的放射敏感性增加。因此,初步证实lnc-RI表达下调增加He La细胞放射敏感性。