SSH法获取水稻矮化突变体相关的cDNA片段

利用抑制性消减杂交（Suppressive subtraction hybridization,SSH)分离水稻矮化突变体dwarf69与其野生型对照品系特光矮-2（Oryza stiva,TGA-2indica)间表达有差异的cDNA片段,分别以dwarf69作为驱赶子,TGA-2为检测子,以及以dwarf69作为检测子,TGA-2为驱赶子建立了两个差异表达cDAN文库,分别代表在TGA-2和dwarf69特异表达的cDNA,经反式Northern检测这两个文库共得到10个阳必天色隆,序阢分析表明有两个序列为水稻中首次报道,一个序列有有相应的基因组序列报道,但其cDNA序列是首次报道。     

用差减抑制杂交方法鉴定太谷核不育小麦花药败育过程中的特异表达基因

以太谷核不育小麦败育花药为对照群体，可育花药为目标群体，进行抑制差减杂交。用经过败育花药差减的可育花药cDNA群体构建了一个差减抑制杂交文库。结果显示，插入片段的大小主要集中在300－500bp之间。随机选取8个克隆进行Northern杂交分析，结果其中7个克隆在可育花药和不育花药之间的表达存在差异。对其中16个插入cDNA片段测序后与GenBank同源性比较表明，共获得未重复序列13条，占81％，其中与已知功能基因同源的3条，与EST库中的序列同源的7条，新的cDNA片段3条。     

甜菜无融合生殖系花期差异表达基因cDNA文库的构建

为了克隆M14(M14是栽培甜菜与白花甜菜杂交产生的单体附加系,由于附加的白花甜菜第9号染色体上存在无融合生殖基因,其传递率可高达97.5%)品系中无融合生殖相关基因,应用抑制消减杂交方法,在甜菜开花的关键时期减数分裂期取样,建立了甜菜无融合生殖系M14与能够进行正常有性生殖的二倍体甜菜A2Y之间差异表达基因的cDNA文库,并对295个克隆进行了测序,共测得179个表达序列标签(Expressed Sequence Tags,ESTs),通过对生物信息学数据库资料的查询,共得到了89个与已知基因同源的ESTs,90个新的ESTs,选择其中2个EST进行了RT-PCR鉴定,证明在M14中特异表达.以上结果为以后克隆与无融合生殖相关的全长基因打下了基础.     

人TNF—α分泌型,膜型和膜稳定型重组体的构建,表达及杀瘤效应研究

通过用ＩＬ－２信号肽编码序列置换ＴＮＦ前导肽编码序列，构建出一种在真核细胞中仅产生分泌型ＴＮＦ的重组体；通过缺失二型ＴＮＦ转换的酶银部位而构建出跨膜表达的膜稳定型ＴＮＦ重组体，并建立分别只表达分泌型或膜型及可同时表达两型ＴＮＦ的真核细胞株，比较二型ＴＮＦ的杀瘤效应。结果显示，膜型ＴＮＦ主要经效－靶细胞间直接接触发挥胞毒效应，杀瘤谱比分泌型ＴＮＦ广，ＴＮＦ的分泌型和膜型具有协同效应，通过基因直接注射