碱性蛋白酶产生菌的筛选鉴定及培养优化

通过对筛选的产碱性蛋白酶菌株进行形态观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析鉴定,确定高活力菌株为解淀粉芽孢杆菌.发酵碳源、氮源和金属盐的优化,确定优化培养组分.对接种体积分数、培养温度和培养pH进行研究,确定最佳培养条件.在最优条件下培养18h后获得最大酶活力为395.18 U/mL,产酶能力比优化前提高了2.55倍.该研究为深入研究工业发酵生产碱性蛋白酶提供了参考.     

一株产耐高温碱性蛋白酶菌株的筛选

通过形态观察和 16SrDNA序列同源性比较 ,将一株产耐高温碱性蛋白酶菌株GXD990 1初步鉴定为枯草芽胞杆菌 (Bacillussubtilis)。对GXD990 1菌株产蛋白酶的培养条件进行分析表明 ,最佳产酶培养基为 :麦芽糖 3%、NH4 H2 PO4 0 3%、MnCl2 0 0 5%、KCl0 0 5%、Fe2 (SO4 ) 30 0 0 1%、K2 HPO4 0 1% ,pH11 2。在 37℃培养 6 0h后 ,蛋白酶活力达到546 5U/mL发酵液     

一株碱性蛋白酶产生菌的分离与应用

从湖南耒阳哲桥镇茶籽油榨油坊内采集土壤样品,分离筛选出能耐受茶皂素并产生碱性洗涤用蛋白酶的菌株。通过对筛选出的菌株进行初步形态鉴定、蛋白酶活力测定和污布去污效果比较,挑选出一株符合要求的菌株,命名为SJP-5。该菌株为革兰氏阳性产芽孢杆菌,无荚膜,能耐受茶皂素,产生碱性蛋白酶,其酶活力为150 U/mL,将其添加到清洗剂中并测定去污能力,试验表明:污布去污值Ri达到18,是平行菌株去污力的2倍。     

鸡汤中一株耐热菌的分离与鉴定

实验室自制肉制品(鸡肉汤)中分离得到一株耐热菌,进行菌落形态、生理生化特征鉴定,并采用Biolog快速鉴定结合16S r DNA序列分析两种方式鉴定,16S r DNA序列分析结果表明此菌株属于芽孢杆菌属,Biolog快速鉴定结果显示此菌株属于芽孢杆菌属中的枯草芽孢杆菌。因此导致鸡汤高温加热后仍腐败变质的菌株为枯草芽孢杆菌。     

一株产羧酸酯酶菌的鉴定及酯酶特征的研究

目的:鉴定中国白酒发酵过程中的微生物种类,研究关键酶的特征与作用机制有利于提高白酒的优质品率。方法:本研究用形态学和生理学、16S rRNA、gyr B基因和antiSMASH分析的方法对酒曲中的一株微生物进行了验证;对该菌株的特性进行了研究,采用分子建模的方法获得了羧酸酯酶的3D模型,用分子对接的方法探讨了该菌株的羧酸酯酶的机理。结果:该菌株为产羧酸酯酶的革兰氏阴性菌Pb1（MW580690）;该菌株呈现典型的S型生长曲线,产物曲线为S型,羧酸酯酶活化最优pH范围为5.0~9.0。分子对接结果显示Phe21A为该酶具有催化活性的主要氨基酸,水解三丁酸甘油酯为丁酸和甘油。分子对接结果显示三丁酸甘油酯经过构象变化被转移到催化中心后,进一步被加工;酶的亲水性和疏水性的相互作用表面有利于配体向下转移,进而从疏水性通道释放产物到的酶表面。结论:产羧酸酯酶的菌株为贝莱斯芽胞杆菌,并为羧酸酯酶水解三丁酸甘油酯类物质的底物识别、转移和催化机理提供了新的见解。     

弹性蛋白酶产生菌的分离鉴定和发酵条件研究

从污水河的土壤中采集样品,分离得到一株产胞外弹性蛋白酶活性较高且稳定的细菌。经初步鉴定属枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis B1),其酶活力为74.25U/ml。对其进行物理诱变,诱变后的菌株(B9)产酶活性有较大的提高。B9酶活力为120.00U/ml,较原菌株提高了1.62倍。同时研究了其产酶最适条件,产酶最适碳源为蔗糖,最适氮源为干酪素,并对碳源、氮源和生长因子进行了正交试验,研究发现氮源对产酶的影响最大。当蔗糖的用量为4%、干酪素为3%、玉米提取液为0.1%时具有较高的产酶水平。最适发酵初始pH为8.0、300ml最适摇瓶装量为40ml、最适接种量为3%。经发酵条件的优化后,B9酶活达到311.54U/ml、提高了2.59倍;较以往国内报道的酶活要高。     

泰国发酵食品Tuanua中蛋白酶菌株的分离及初步鉴定

研究从泰国发酵食品Tuanua中分离蛋白酶菌株，在所分离的6个株菌株中，有3株在蔗糖废蜜培养基试管培养中即超过1000单位／ml，比1990年Margarita分离到的枯草杆菌BIOTECH113的235单位／ml和1993年Moon分离到的坚强芽抱杆菌NRS的234单位／ml高5倍多。该3株菌初步鉴定为芽孢杆菌属第一群的B亚群。其中一株用蔗糖废蜜培养基在3L搅拌通气发酵罐中发酵，于7h内产生250单位／ml的蛋白酶活性。通过补充大豆饼粉和蔗糖废蜜，培养到35h细胞数量和蛋白酶活力分别达到1010／ml和13770单位／ml。比我国蛋白酶生产用菌株枯草芽胞杆菌AS1．398和地衣芽胞杆菌2709的高近一倍。最佳发酵温度33．8℃,产酶活力随通气和搅拌速度的减小而减小，随通气和搅拌速度的增加而增加。所产蛋白酶的最佳作用pH为8．5。且在此pH8．5的条件下是稳定的，在0．05M、pH9．5的甘氨酸溶液中，20h活力仍然保持70％。最佳催化温度65℃，但只有在45℃以下时才稳定。     

一株低温蛋白酶产生菌的分离及该酶的鉴定与酶学性质表征

从低温环境中分离并鉴定出1株产低温蛋白酶的乙酰微小杆菌YD37(Exiguobacterium acetylicum YD37)。对该低温蛋白酶基因序列分析发现,其基因全长1 110 bp,编码370个氨基酸残基,分子量为41.5 kDa,属于氨肽酶,富含短侧链和带负电荷的氨基酸残基,二级结构含有14个α-螺旋和19个β-折叠,三级结构表面为带负电荷氨基酸构成的亲水表面。通过对E. acetylicum YD37发酵产酶的工艺进行优化,酶活提高8.26倍,达到273.5 U/mL。经硫酸铵沉淀和离子交换层析得到该低温蛋白酶的粗酶。粗酶的最适温度为35℃,但20℃仍能保持43.6%的酶活。酶活受到Mn2+和Co2+的促进和乙二胺四乙酸的完全抑制,表明该酶是一种金属氨肽酶。该酶的动力学常数Km和Vmax分别为1.38 mg/mL和4.41 mg/（mL·min）。     

一株降解南瓜多糖芽孢杆菌的分离鉴定

南瓜多糖具有降血糖功能,但由于其分子量大、结构复杂等特点,不利于南瓜多糖的加工利用。实验直接从南瓜样品中分离得到一株芽孢杆菌,命名为J-6菌株,该菌能够有效地降解南瓜多糖,酶活可达3.268U/mL。通过形态观察、生理生化实验、16SrDNA同源性序列分析,初步确定J-6菌株属于芽孢杆菌属。      

一株降解南瓜多糖芽孢杆菌的分离鉴定

南瓜多糖具有降血糖功能,但由于其分子量大、结构复杂等特点,不利于南瓜多糖的加工利用。实验直接从南瓜样品中分离得到一株芽孢杆菌,命名为J-6菌株,该菌能够有效地降解南瓜多糖,酶活可达3.268U/mL。通过形态观察、生理生化实验、16SrDNA同源性序列分析,初步确定J-6菌株属于芽孢杆菌属。     

具有胆盐水解酶活力乳酸菌的筛选及16SrDNA分子生物学鉴定

对分离自内蒙古地区牧民家庭自制的2份酸马奶中的9株乳酸菌,进行胆盐水解酶活力的研究.采用定性和定量两种方法,筛选具有胆盐水解酶活力菌株,并对筛选出的茵株进行16S rDNA分子生物学鉴定.结果表明:9株菌中只有菌株18-1-3有白色颗粒状沉淀生成,其余8株均没产生.游离胆酸的生成量和牛磺胆酸钠的消失量分别为0.8524 mmol/L和0.8520 mmol/L.即游离胆酸钠的生成量和牛磺胆酸钠的消失量成比例.18-1-3菌株鉴定为发酵乳杆菌(Lb.fermentum).     

高温大曲中产耐热性蛋白酶芽孢杆菌的筛选和鉴定

从高温大曲样品中通过分离纯化,在牛奶琼脂平板上初筛得到产耐热性蛋白酶的菌株,然后液体发酵培养测定蛋白酶酶活挑选出产酶较强的菌株A1。在经过菌株形态特征、生化鉴定、16SrDNA分子生物学鉴定为芽孢杆菌属苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。选择三个主要影响因子葡萄糖、酵母浸出粉和pH,运用响应面法优化发酵培养基,最佳产酶培养基为pH为8.4,葡萄糖添加量为1.092%,酵母浸出粉添加量为0.902%,最佳酶活力为142.81u/mL。测定蛋白酶酶作用的最适温度是61℃,且在55～70℃之间有较高的酶活力,60℃相对酶活为97.63%。      

汾酒大曲中高产四甲基吡嗪菌株的筛选与鉴定

从汾酒大曲中分离出15株可以产生TTMP的芽孢杆菌。通过观察菌落形态的基本特征和细胞的显微形态图对其进行纯种确认,采用气相色谱法筛选出3株高产TTMP的芽孢杆菌,并利用16SrDNA序列测定法进行菌种鉴定,得出3株高产TTMP的芽孢杆菌中2株为枯草芽孢杆菌、1株为弯曲芽孢杆菌,该结果增加了TTMP高产菌株的类型范围,为TTMP的生产实践应用提供了依据。     

基于NRPS基因筛选鉴定产生环脂肽葡萄附生细菌的研究

本研究采用平板稀释法和斜面分离纯化技术,从夏黑葡萄中筛选分离到5株附生细菌,提取菌株的基因组DNA,PCR扩增16S r DNA序列,产物纯化后进行克隆测序,利用MEGA 6.0软件对序列进行同源性比对分析,构建系统进化树后,将5株附生细菌分别鉴定为克雷伯肺炎杆菌（Klebsiella pneumoniae）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、克考氏菌（Kocuria marina）、嗜气芽孢杆菌（Bacillus aerophilus）、类芽孢杆菌（Paenibacillus agaridevorans）。在此基础上,以非核糖体多肽合成酶基因（non-ribosomal peptide compounds synthetase,NRPS）为靶点,筛选到含有目的条带的菌株PTWA2,经系统发育树预测该菌株能够产生环脂肽类化合物。该菌株发酵产物经有机溶剂萃取、常压硅胶柱层析、Sephedex LH-20等分离手段纯化得到一个单体化合物,采用核磁共振和质谱方法鉴定该化合物为环脂肽Surfactin A。该研究结果为以功能基因定向筛选产生环脂肽化合物的菌株提供了新的研究方法与理论依据。      

高产酸性脲酶菌株的分离、筛选与鉴定

为了筛选高产酸性脲酶菌株,通过酸性平板的初筛和中性平板的复筛,从土壤中分离到17株产酸性脲酶的菌株。通过比较它们所产酸性脲酶的活性,确定了产酶能力最强的菌株ZJU-5,发酵液中酸性脲酶活性可达(17.17±0.185)U/mL。为了了解该菌株的特性,通过生理生化方法及16SrDNA分子生物学方法对ZJU-5进行鉴定,结果表明ZJU-5为肺炎克雷伯氏菌。     

一株硫化物氧化细菌的分离、鉴定和脱硫效果初步验证

从无锡市某硫酸厂采集的土样中分离到一株具有硫化物氧化能力的细菌,对该细菌的16S rDNA序列进行测定,并根据16S rDNA构建了系统发育树.结果表明,TL-1与硫杆菌属有较高的同源性,与那不勒斯硫杆菌 (Thiobacillus neapolitanus) 同源性为95.3%,结合菌落、细菌形态鉴定菌株为硫杆菌属( Thiobacillus ),并命名为TL-1.同时,对TL-1的脱硫效率进行了初步研究.结果表明,在硫化物为惟一硫源且其质量浓度分别为60,120,180,240 mg/L时,4 h时硫化物去除率分别达到87.92%、71.25%、63.45%和13.31%.     

白肋烟晾制期间烟叶中细菌的分离和鉴定

对晾制烟叶中分离到的33株优势菌株进行16S rDNA鉴定,鉴定结果为Pseudomonas、Bacillus、Enterobacter、Rhizobium、Corynebacterium、Pantoea、Acinetobacter、Arthrobacter、Xanthomonas、Paracoccus、Achromobacter、Rhodococcus。经硝酸盐和亚硝酸盐还原能力测定,结果表明:6株不能还原硝酸盐和亚硝酸盐,占总菌株数的18.18%;20株能还原硝酸盐而不能还原亚硝酸盐,占总菌株数的60.61%;7株既可以还原硝酸盐又可以还原亚硝酸盐(2株Rhizobium、1株Paracoccus、4株Pseudomonas),占总菌株数的21.21%,可能是抑制白肋烟叶中TSNA形成的菌株。      

纤溶酶高产菌株的筛选与鉴定

作为一种新型的溶血栓药物,大豆类发酵食品中所含有的纤溶酶具有安全性好、作用迅速,成本低,以及可通过液体发酵大规模生产等优点。采用酪蛋白平板法与纤维蛋白平板法相结合的方法,从市售纳豆产品中分离筛选出一株高产纤溶酶生产菌,发酵48 h后,测得其粗酶活为483.72 IU/mL,通过形态学,生理生化特征,16S rDNA序列鉴定及系统发育树的分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。