超高效液相色谱-四极杆串联线性离子阱质谱法测定乳制品中8种青霉素类药物及其主要代谢产物

目的建立一种超高效液相色谱-四极杆串联线性离子阱质谱技术测定乳制品中8种青霉素类抗生素(青霉素G、氨苄西林、青霉素V、阿莫西林、苯唑西林、萘夫西林、氯唑西林、双氯西林)及其相应的代谢产物青霉噻唑酸(青霉素G噻唑酸、氨苄青霉噻唑酸、青霉素V噻唑酸、羟氨苄青霉噻唑酸、苯唑青霉噻唑酸、乙氧萘青霉噻唑酸、氯唑青霉噻唑酸、双氯青霉噻唑酸)残留的方法,并对市售乳制品中青霉素及青霉噻唑酸残留情况进行调查。方法乳制品样品中青霉素及青霉噻唑酸采用纯水超声提取,经乙腈沉淀蛋白,正己烷液液萃取除去脂肪,用氮气吹至近干,用乙腈-水(10∶90,V/V)复溶后,经0.22μm微孔滤膜过滤,经超高效液相色谱C_(18)柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm)分离,选用乙腈-水(含0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱分离8种青霉素及相应青霉噻唑酸共16种组分;在优化的四极杆串联线性离子阱质谱条件下,采用ESI源、正离子模式、多反应监测方式,外标法定量,采用信息依赖采集扫描功能(IDA)结合增强子离子扫描(EPI)模式对检出阳性结果进行定性分析。结果方法的线性范围为1.0~200μg/L,8种青霉素及相应青霉噻唑酸在各种乳制品基质中均有良好的线性相关性,相关系数r在0.999 1~0.999 9之间,方法最低检测限为0.01~0.05μg/kg(固体乳粉)和0.002~0.010μg/kg(液体奶);方法回收率在80.0%~110.0%,相对标准差为0.16%~7.06%。结论该方法测定8种青霉素药物及相应代谢产物青霉噻唑酸的残留量简便、快速、定性准确,可以满足对青霉素类药物及其代谢产物残留的检测要求。     

离子液体在无抗奶检测中的应用

采用复分解方法合成疏水性离子液体1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐[(C_8MIM)(PF_6)],用活性炭和大孔树脂固相萃取小柱净化该离子液体,得到无色透明的[(C_8MIM)(PF_6)],产率87.6%。利用该离子液体萃取乳及乳制品中的青霉素及其酶解产物青霉素噻唑酸,并优化萃取条件。通过自建的高效液相色谱方法检测青霉素及青霉素噻唑酸的含量,间接判断乳及乳制品中是否为真正的"无抗奶"。离子液体萃取方法青霉素回收率为87.4%~92.6%,RSD为1.8%,检出限5ng/mL;青霉素噻唑酸回收率为83.5%~90.8%,RSD为2.4%,检出限5ng/mL,通过与杯碟法和液相质谱法作比较,更说明了该方法的优越性。     

乳及乳制品中残留青霉噻唑酸钾的检测方法

通过分光光度法检测乳及乳制品中青霉素钾的主要酶解产物青霉噻唑酸钾,间接检测了乳及乳制品中是否添加过β-内酰胺酶。通过实验该方法的工作曲线相关系数为0.9997,检测限为2.5 mg/L,回收率在93.2%～106.3%之间,RSD为2.9%～4.5%。在30组样品中应用效果良好,表明该方法简单、快速准确、灵敏度高,适用于乳及乳制品中青霉噻唑酸钾残留量的检测。     

UPLC-MS/MS法同时测定牛奶中青霉素G及青霉噻唑酸

利用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定牛奶中的青霉素G和青霉噻唑酸。样品经乙腈沉淀蛋白,上清液氮气吹干后,用水溶解,加入正己烷萃取除去脂肪;提取液经ACQUITYUPLCBEHC18柱分离,乙腈-1mmol/L乙酸铵+0.1%甲酸水溶液洗脱。青霉素G和青霉噻唑酸的检出限分别为1、2μg/kg,定量限分别为5、10μg/kg。在10～100ng/mL浓度范围内线性良好,相关系数均大于0.999,牛奶中的加标回收率在92%～103%,精密度(RSD,n=3)范围在2%～4%。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中4种β-内酰胺类抗生素及其主要代谢产物

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法检测牛奶中青霉素G、青霉素V、氨苄西林、阿莫西林及其代谢产物脱羧噻唑酸含量的分析方法。方法样品经0.2%氨水乙腈溶液超声离心提取,通过Oasis PRiME HLB固相萃取柱进行净化,采用超高效液相色谱-串联质谱法进行测定。结果青霉素G、青霉素V、氨苄西林、阿莫西林及其代谢产物脱羧噻唑酸在所考察的线性范围内线性良好,相关系数不低于0.999;方法回收率为70.9%~101.6%,相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为4.0%~7.5%。市售的35份样品中,均未检出青霉素G、青霉素V、阿莫西林、氨苄西林及其代谢产物。结论该方法操作简单、重现性好,可用于牛奶中青霉素G、青霉素V、阿莫西林、氨苄西林及其代谢产物脱羧噻唑酸的检测。     

壳聚糖复合解淀粉芽孢杆菌对扩展青霉生长的控制效果研究

目的:为探讨壳聚糖对病原菌的抑制作用及对拮抗菌的影响,以期为拮抗菌Bacillus amyloliquefaciens BA-16-8应用于苹果采后的防腐保鲜提供理论基础。方法:以日本红富士为实验材料,采用体外及体内实验方法,研究不同浓度的壳聚糖对扩展青霉(Penicillium expansum)的抑制作用及解淀粉芽孢杆菌BA-16-8对扩展青霉产毒的影响。结果:浓度2%的壳聚糖溶液抗P.expansum和青霉病的能力最强,且不会影响拮抗菌B.amyloliquefaciens BA-16-8的生长。拮抗菌B.amyloliquefaciens BA-16-8的菌悬液及无细胞发酵液均可抑制P.expansum,且菌悬液的处理效果要优于无细胞发酵液。抑制产毒实验结果表明,B.amyloliquefaciens BA-16-8菌悬液及其无细胞发酵液均可显著抑制P.expansum发酵液中展青霉素的积累,但对单纯的展青霉素并无降解作用。结论:B.amyloliquefaciens BA-16-8同壳聚糖联合作用可抑制扩展青霉的活性及产毒能力。     

酸度计法快速检测牛奶中残留的β-内酰胺酶

为了快速、准确地检测牛奶制品中残留的β- 内酰胺酶的含量,利用β- 内酰胺酶分解青霉素产酸使牛奶pH 值下降的原理,对人工添加了β- 内酰胺酶的牛奶制品与青霉素反应后pH 值的下降规律进行研究。得到牛奶中残留的β- 内酰胺酶与青霉素反应的较适宜条件,从而获得快速检测牛奶制品中残留的β- 内酰胺酶的方法。结果确定牛奶制品中残留的β- 内酰胺酶与青霉素反应的适宜条件为温度33℃、底物质量浓度10mg/mL,检测时间仅为60min。此方法对液态纯牛奶中β- 内酰胺酶的最低检出限为8.92U/mL。     

新生儿青霉素皮试判断标准的浅析

目的 :本文旨在通过实践探讨更改新生儿青霉素皮试标准,从而降低新生儿青霉素皮试假阳性率。结果 :更改新生儿青霉素皮试判断标准后在使用青霉素过程中未有新生儿发生过敏反应,新生儿青霉素皮试阳性率由更改前的24.16%降低为3.33%,二者进行比较P0.05,差异具有统计学意义,更改新生儿青霉素皮试标准后排除了一部分假阳性结果,使新生儿青霉素皮试阳性率显著降低。在抗生素频繁更迭,品种繁多的今天,青霉素仍是新生儿治疗的首选药物。青霉素通过抑制细菌细胞壁合成而发挥杀菌作用,临床应用广泛,具有疗效高,毒性低的特点,但青霉素易发生过敏反应,是各种抗菌药物中过敏反应发生率最高的药物。常见的青霉素不良反应为变态反应,变态反应发生的原因是青霉素溶液中的降解物青霉噻唑蛋白、青霉稀酸、6-APA高分子聚合物所致,机体接触后5-8天内产生抗体,当再次接触时即产生变态反应,即IgE介导的过敏反应,母体IgE不能通过胎盘或乳汁进入胎儿或新生儿体内,新生儿自身产生IgE能力较弱,故新生儿首次使用青霉素极少发生变态反应。有人观察到新生儿用常规皮试方法假阳性率偏高,并且成人的判断标准并不适用于新生儿,新生儿的判断标准应当适当放宽。田凤娥等认为4-20天的新生儿青霉素皮试价值不大,21-28天新生儿青霉素皮试判断标准也应较惯用标准放宽~([1])。除用皮试结果除按常规传统方法观察外,注射部位可发红,直径达1.5cm以上,但触之不硬,无伪足,皮丘规则为圆形,可判断为阴性~([2])。     

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中30种抗寄生虫类药物残留

目的：采用超高效液相色谱-串联质谱法,建立测定动物源性食品中30种抗寄生虫类药物残留的方法。方法：样品经乙腈、1%氨水乙酸乙酯提取,经QuEChERS净化。净化后采用Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18色谱柱分离,10 mmol/L甲酸铵（含0.1%甲酸）水溶液-乙腈:甲醇（50:50,v:v）为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源正负离子切换多反应监测（Multiple Reaction Monitoring,MRM）模式下进行检测,基质匹配外标法定量。结果：在优化的条件下,30种抗寄生虫类药物在各自的线性范围内线性良好,决定系数（r2）均大于0.99;回收率为70.1%～111%;相对标准偏差在0.10%～9.1%之间（n=6）;方法检出限为0.001～0.3μg/kg之间,方法定量限在0.004～1μg/kg。结论：该方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于动物源性食品中多种抗寄生虫药物残留的检测。     

高压电场低温等离子体对马拉硫磷的降解效能及降解途径

为探索高压电场低温等离子体对水中马拉硫磷的降解效能特性,以电压、作用时间及农药初始浓度为试验因素,采用气相色谱测定马拉硫磷的残留并建立降解动力学模型,利用气相串联质谱分析鉴定马拉硫磷降解产物,并结合傅里叶红外光谱研究低温等离子体对马拉硫磷的降解效能,解析其降解途径。结果表明:马拉硫磷在水中的降解效率随着低温等离子体电压强度及作用时间的延长显著增加(P<0.05);在初始浓度为0.1 μg/mL,50 Hz、80 kV处理180 s后,马拉硫磷降解效率达到79.62%±2.97%。马拉硫磷降解趋势符合一级动力学模型,产生的主要中间降解产物为马拉氧磷、磷酸三乙酯、顺-丁烯二酸二乙酯、反-丁烯二酸二乙酯、O,O,S-三甲基二硫代磷酸酯及2-二甲氧基膦硫酰磺基-4-乙氧基-4-氧丁酸。其中毒性较高的马拉氧磷可进一步降解为毒性较低的磷酸三乙酯。马拉硫磷降解过程中中间产物的形成主要经历了P=S键的氧化及C-S键的断裂两种途径。研究为降解水中农药残留研究提供了新的方法参考。

     

电解对兽药残留的降解作用

研究以两款市售电解清洗机为实验对象,观察该类清洗机对兽药残留降解能力。用酶联免疫试剂盒和胶体金试纸研究其对青霉素类、磺胺类、氟喹诺酮类、四环素类、β-受体激动剂类化合物等物质的降解效率及影响因素。用HPLC分析电解清洗机对猪肉和猪肝实际样本中兽药残留的作用效果。结果表明:电解清洗机能够有效降解水溶液中青霉素类、磺胺类、β-受体激动剂类化合物。对恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星等几种化合物降解效率低。对于50mg/L孔雀石绿溶液,清洗机一(功率:DC24V/2.5A)降解完全需要6 min,而清洗机二(功率:DC24V/5A)仅2 min即可降解完全。对于100 mg/L孔雀石绿溶液,100 mg/L NaCl条件下,2 min降解完全;50 mg/L NaCl条件下需要4 min;25 mg/L NaCl条件下10 min仍不能完全降解。在孔雀石绿溶液中添加0.5%血清,清洗机作用10min仍不能完全降解。猪肉和猪肝样本经电解清洗机作用后,沙丁胺醇、恩诺沙星、环丙沙星、磺胺甲噁唑和磺胺间甲氧嘧啶残留量在80%以上。试验结果表明:电解清洗机作用效果受仪器功率、电解质种类和浓度、血清、样本状态等影响大。电解清洗机用于肉类食品中化合物残留降解,受影响因素多,不能确保有效去除肉产品中兽药残留。     

采用液相色谱-串联质谱法准确测定原料奶中的舒巴坦

正舒巴坦是一种典型的竞争性不可逆的β-内酰胺酶抑制剂,与β-内酰胺环类抗生素联合应用,通过对酶的抑制,保护抗生素免受破坏,提高抗菌活性,被广泛应用于医疗行业。由于原料奶中的青霉素类抗生素残留量有限量要求,因此为消除这种青霉素类抗生素残留,不法商贩向原料奶中添加β-内酰胺酶来降解抗生素;而为了逃避质检机构对β-内酰胺酶的检测,商贩极     

氨基糖苷类药物多残留酶联免疫分析方法的研究

以新霉素的降解产物新霉胺作为半抗原,采用戊二醛法合成新霉胺免疫原,制备出针对多种氨基糖苷类药物的多克隆抗体.使用高碘酸盐法制备新霉胺的酶标抗原,建立氨基糖苷类药物的直接竞争酶联免疫方法.结果表明:该方法针对新霉素、庆大霉素和卡那霉素的检出限分别为0.2、0.15和O.35 mg/kg,低于我国制定的最高残留限量O.5mg/kg.此方法灵敏、准确,适用于氨基糖苷类药物多残留免疫检测的要求.     

雅致放射毛霉壳聚糖提取方法的研究

壳聚糖是甲壳素部分脱乙酰的产物,天然存在于一些真菌细胞壁中,具有良好的生物相容性和生物可降解性,被广泛用于食品、医药等领域。采用稀硫酸法、碱-酸法、碱-酸结合α-淀粉酶法对雅致放射毛霉壳聚糖提取的影响,得出碱-酸结合α-淀粉酶法提取壳聚糖效果最佳。对碱-酸结合α-淀粉酶法进行条件优化,结果表明,最佳提取条件为:1mol/L Na OH在121℃处理30min,4%(v/v)盐酸在95℃处理6h,添加4%(v/v)的α-淀粉酶在90℃处理2h。采用该方法提取壳聚糖,壳聚糖得率可达16.91%,利用茜素红法测得壳聚糖纯度为92.83%。     

展青霉素产生菌的产毒性能研究

展青霉素是一种有毒的真菌代谢产物,它是一种神经毒物,且具有致癌性和致畸性,常易污染水果及水果制品。国外从七十年代起,在这方面作了大量的工作,近年来,展青霉素在我国也逐渐得到重视。能产生展青霉素的霉菌有:扩张青霉、展青霉、棒形青霉、土壤青霉、新西兰青霉、娄地青霉、棒曲霉、巨大曲霉、土曲霉和雪白丝衣     

扩展青霉和展青霉素的生物防治研究进展

扩展青霉是水果中常见的腐败真菌,普遍存在于腐烂的梨果表面,由其侵染所引发的果实采后污染现象可导致严重的经济损失。扩展青霉的次级代谢产物展青霉素会残留在加工的水果制品中,食用后会诱发急慢性毒性损伤和引起细胞病变,严重威胁人类健康。目前,传统方法主要是利用物理方法和化学方法来抑制扩展青霉的生长繁殖以及对展青霉素的减除,但都存在一些弊端,限制了其在实际生产中的应用。生物防控作为新型控制手段,具有安全高效且对环境友好的特点,采用生物防治来控制扩展青霉和展青霉素的污染受到了世界各国的广泛关注。文章对扩展青霉和展青霉素的污染现状、传统控制方法和生物防控手段及其作用机制进行了综述,以期为生物防治技术在水果及其制品方面的开发应用提供理论参考依据。     

食品中硝基呋喃类代谢物检测方法研究进展

硝基呋喃类药物作为一种广谱抗生素,因其价格便宜、抗菌效果好等特点,曾作为饲料添加剂和治疗药物被广泛应用于畜牧业生产。但由于强毒性和致畸致癌致突变等毒副作用,对食品安全产生威胁,欧盟、日本和中国等国已严令禁止使用。早期研究侧重于对原型药残留的检测,近年来国内外学者对硝基呋喃类药物的代谢产物3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)和1-氨基-2-内酰脲(AHD)检测方法研究逐渐增多,这类代谢产物易与蛋白质结合后稳定残留且难降解,检测前处理繁琐,给检测带来极大的困难。本文主要综述了硝基呋喃类药物种类、检测前处理方法和当前最新的检测方法,并简述对该类药物代谢产物检测的展望。     

原料乳中β-内酰胺酶检测试剂盒的研究

目的制备原料乳中β-内酰胺酶的快速检测试剂盒,方法β-内酰胺酶分解青霉素钾的产物青霉噻唑酸具有还原性,能将二价铜还原为一价铜,2,2′-联喹啉与一价铜反应生成的是紫红色配合物,颜色深浅与β-内酰胺酶的量在一定范围内呈线性关系。结果利用可见分光光度法优化出试剂盒最佳检测条件为:0.05%2,2′-联喹啉添加量为2.4 mL,20 mmol/L的CuSO4最佳添加量0.2 mL,原料乳添加量为0.1 mL;配制β-内酰胺酶的标准品浓度梯度溶液0~200 U/mL进行显色反应后,利用分光测色仪测定颜色反应L*、a*和b*值数据,并应用色彩模块软件对其进行模拟,制作标准比色卡;原料乳样品显色15 min后与标准比色卡对比,确定牛奶中β-内酰胺酶浓度,试剂盒最低检出限为4 U/mL。结论β-内酰胺酶检测试剂盒法具有快速、操作简单、经济实用等特点,易于普及和现场测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定乳及乳制品中青霉素类药物残留量

建立了超高压液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定乳及乳制品中青霉素类药物残留量的方法。利用UPLC-MS/MS外标法进行样品中青霉素类药物的测定。乳制品经乙腈、乙酸锌、盐酸溶液提取,样品再经HLB固相萃取柱富集净化后,进行UPLC-MS/MS检测。结果表明,10种青霉素在1~50 ng/mL范围呈良好线性,线性相关系数大于0.9991。牛奶的平均回收率为88.8%~92.0%,测定结果的相对标准偏差为1%~7%;奶粉的平均回收率在88.7%~91.3%之间,相对标准偏差为5%~11%。研究表明,该方法操作简便、快速、灵敏度高,适用于牛奶和奶粉中10种青霉素类抗生素残留的同时测定。     

动物源性食品中青霉素类药物残留检测

建立动物源食品中同时检测4?种青霉素类药物残留的高效液相色谱法。以水合氨苄青霉素为内标,样品经乙腈-水（10∶1,V/V）提取,HLB固相萃取小柱净化。采用C18色谱柱,以0.02?mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱分离目标化合物进行定量分析。青霉素G、苯唑西林、乙氧萘青霉素、双氯青霉素在0.01～2?μg/mL范围内线性良好,线性相关系数均大于0.999,检出限和定量限分别为3?μg/kg和10?μg/kg;回收率在69.9%～100.3%之间,精密度的相对标准偏差在1.58%～9.15%之间。该方法前处理简单、快速、准确、灵敏,可以满足实际检测分析的需要。用于猪、牛、羊、鸡、鱼等不同基质中青霉素类药物残留的检测,取得了满意的结果。