重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性研究

目的 研究重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性.方法 测定其酶学动力学参数Km和Vmax,最适pH和最适温度:研究不同pH和不同温度条件下酶的稳定性,以及金属离子和EDTA对酶的活性与稳定性的影响.结果 重组猪羧肽酶B的Km为0.27 mmol/L,Vmax为222.22 μmol/min,最适pH为7.65,最适催化温度为25℃;pH在5.0～9.0范围内,温度在4～30℃稳定性良好,Cu2+和EDTA抑制酶活性,Co2+促进酶活性.结论 重组猪羧肽酶B的酶学性质与报道的提取猪羧肽酶B的性质基本相同,pH5.0～9.0范围内稳定,在4～30℃时稳定性好.     

重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性研究

目的研究重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性。方法测定其酶学动力学参数Km和Vmax,最适pH和最适温度;研究不同pH和不同温度条件下酶的稳定性,以及金属离子和EDTA对酶的活性与稳定性的影响。结果重组猪羧肽酶B的Km为0.27 mmol/L,Vmax为222.22μmol/min,最适pH为7.65,最适催化温度为25℃;pH在5.0~9.0范围内,温度在4~30℃稳定性良好,Cu2+和EDTA抑制酶活性,Co2+促进酶活性。结论重组猪羧肽酶B的酶学性质与报道的提取猪羧肽酶B的性质基本相同,pH5.0~9.0范围内稳定,在4~30℃时稳定性好。     

雅致放射毛霉3.2778羧肽酶性质及其活性中心结构的研究

固态发酵雅致放射毛霉菌株(Actinomucor elegans)3.2778得到羧肽酶粗酶液,以N-苄氧羰酰基-L-苯丙胺酰-L-亮氨酸(N-CBZ-Phe-Leu)为底物,采用镉-茚三酮法测定羧肽酶水解产物。结果表明:雅致放射毛霉3.2778羧肽酶最适作用pH值范围为6.5～7.2,最适作用温度范围在40℃～45℃,最适作用温度为40℃,在30℃～40℃具有良好的温度稳定性。0.99mmol/L金属离子中,Mg2+对羧肽酶活力表现出显著的促进作用,酶活提高37%;而Cu2+、Fe2+、Fe3+、Hg2+可以抑制绝大部分酶活,残留的相对酶活力约10%。9.1mmol/L金属蛋白酶抑制剂1,10-邻菲啰啉(OP)和丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)和二异丙基磷酰氟(DFP)均可以完全抑制该酶活性,同时,对巯基有修饰作用的蛋白酶抑制剂PCMB、DTT、碘乙酸和β-巯基乙醇对羧肽酶有强烈的抑制作用。因此,推断该酶可能是一种丝氨酸羧肽酶,其活性中心有丝氨酸残基和二硫键结构,酶活受Mg2+激活。     

雅致放射毛霉羧肽酶Y的基因克隆、表达与酶学性质研究

本研究从雅致放射毛霉中克隆、表达和纯化羧肽酶Y(CPY),体外激活后检测其酶学性质。本文筛选并鉴定了一株腐乳发酵菌株,命名为雅致放射毛霉PEP001(Actinomucor elegans PEP001)。以相近种族来源的真菌羧肽酶Y保守序列设计简并引物调取部分目的基因序列,利用末端扩增技术(RACE)分别获得3’与5’端基因全长,克隆获得羧肽酶Y基因,全长为1557 bp,编码518 aa。将其酶原(pro CPY)在大肠杆菌Rosetta中重组表达,产物为包涵体;在毕赤酵母GS115中成功分泌表达pro CPY,产量为151.20±10.20mg/L。通过体外激活与纯化,获得电泳纯的成熟羧肽酶Y。成熟羧肽酶Y最适pH为6.0,最适温度为45℃,在40℃下有较高稳定性,在60℃下很快失活,在pH 4.0~7.0下都有较高的稳定性。本文中雅致放射毛霉PEP001羧肽酶Y为首次报道,为进一步研究其应用打下一定基础。     

曲霉羧肽酶的分离纯化研究

采用 (NH4) 2 SO4、酒精、DE52 和SephadexG1 0 0对AspergillusspCP 1发酵液进行分离纯化 ,并检测在分离纯化过程中酶的回收率和比活力 ,最后用SDS PAGE电泳检验酶的纯度。确定 (NH4) 2 SO4饱和浓度在 60 %～ 90 %之间 ,酒精浓度为 3 5 %～ 70 %之间用于粗酶液的提纯 ;电泳得到一个清晰的条带。它们的分子质量约为 15 942u。     

重组羧肽酶原B突变体C383A的纯化与性质研究

目的 纯化羧肽酶原B突变体C383A并研究其酶学性质.方法 用DEAE-FF离子交换树脂纯化C383A,测定其动力学参数,温度对酶活性的影响、温度稳定性、最适pH以及pH稳定性等酶学性质,并与野生型比较.结果 纯化后获得高纯度突变体C383A,与野生型相比,催化效率及稳定性均有提高,但与底物的亲和力降低,随着温度的上升催化速率的增长率低于野生型.结论 将重组羧肽酶原B第383位Cys突变为Ala可对酶的性质产生影响,与野生型比较,C383A提高了酶的催化效率及温度和pH稳定性.     

重组羧肽酶原B突变体C383A的纯化与性质研究

目的纯化羧肽酶原B突变体C383A并研究其酶学性质。方法用DEAE-FF离子交换树脂纯化C383A,测定其动力学参数,温度对酶活性的影响、温度稳定性、最适pH以及pH稳定性等酶学性质,并与野生型比较。结果纯化后获得高纯度突变体C383A,与野生型相比,催化效率及稳定性均有提高,但与底物的亲和力降低,随着温度的上升催化速率的增长率低于野生型。结论将重组羧肽酶原B第383位Cys突变为Ala可对酶的性质产生影响,与野生型比较,C383A提高了酶的催化效率及温度和pH稳定性。     

紫外线--氯化锂复合诱变选育羧肽酶高产菌株

对米曲霉3.042进行了紫外线-氯化锂复合诱变,筛选制霉素抗性突变株,并进行固体发酵筛选试验,共筛选出了5株正突变株。经固体发酵筛选实验,获得了一株遗传性状稳定的羧肽酶高产菌株。     

利用米曲霉羧肽酶由玉米蛋白粉制备高F值寡肽

本文简述了酶法水解玉米醇溶蛋白制备高F值寡肽的主要工艺步骤。重点考察了米曲霉固态发酵产生羧肽酶的影响因素,碱性蛋白酶和米曲霉羧肽酶两次酶解蛋白后的寡肽分子量分布,活性炭吸附去除寡肽中芳香族氨基酸的效果。     

重组羧肽酶B及其包涵体溶解性的研究

目的 构建重组羧肽酶B（rCPB）的表达质粒和表达菌株，表达羧肽酶B（CPB），并对表达CPB包涵体的溶解性进行研究。方法构建CPB重组质粒pET-21a—CPB，将其导入表达菌株BL21（DE3）中，分别在25℃和37℃进行诱导表达；所得包涵体分别用不同浓度尿素添加不同还原剂溶解，以溶液中的蛋白质浓度判定其溶解性，利用非还原SDS—PAGE分析其溶解性提高的原因。结果诱导后生长温度不同对rCPB包涵体的纯度及后期处理均有影响；rCPB包涵体在10mol／L尿素溶液中的溶解度比在8mol／L尿素溶液中提高2-3倍；添加0．75％β-巯基乙醇能显著改善rCPB包涵体的溶解效果。经非还原SDS—PAGE分析，添加β-巯基乙醇后，溶解rCPB聚体的含量减少。结论成功地表达了rCPB，并通过实验提高了rCPB包涵体的溶解度。     

棉改性技术的研究进展

文章重点介绍了棉纤维改性技术及改性产品的开发现状，分析了棉改性技术的发展趋势，得出经过改性后可以实现棉纤维性能的优良化、功能的多样化、产品的生态化。     

重组羧肽酶B及其包涵体溶解性的研究

目的构建重组羧肽酶B(rCPB)的表达质粒和表达菌株,表达羧肽酶B(CPB),并对表达CPB包涵体的溶解性进行研究。方法构建CPB重组质粒pET-21a-CPB,将其导入表达菌株BL21(DE3)中,分别在25℃和37℃进行诱导表达;所得包涵体分别用不同浓度尿素添加不同还原剂溶解,以溶液中的蛋白质浓度判定其溶解性,利用非还原SDS-PAGE分析其溶解性提高的原因。结果诱导后生长温度不同对rCPB包涵体的纯度及后期处理均有影响;rCPB包涵体在10mol/L尿素溶液中的溶解度比在8mol/L尿素溶液中提高2￣3倍;添加0.75%β-巯基乙醇能显著改善rCPB包涵体的溶解效果。经非还原SDS-PAGE分析,添加β-巯基乙醇后,溶解rCPB聚体的含量减少。结论成功地表达了rCPB,并通过实验提高了rCPB包涵体的溶解度。     

关于芦荟中的羧肽酶的研究

芦荟作为一种民间用药，已广泛被人们接受。目前它又作为一种药食同源植物得到广泛开发应用。本文综述有关芦荟中羧基酶的分离提纯、最适作用条件、底物专一性、抑制剂等一些理化性质，以及它的一些药用功效的研究情况。     

木素催化热解的研究现状

木素是一种富含芳环结构且来源广泛的可再生生物质资源。木素催化热解制备精细化学品和高品质燃料,是生物质资源全组分综合利用的重要组成部分。木素催化热解不仅可以提高木素热解产物的选择性,还可以提升热解产物的品质和拓宽应用途径。本文较详细地综述了木素催化热解催化剂的几种类型,从催化剂的种类、反应机理、催化效果等方面介绍了国内外的主要研究进展,并指出了木素催化热解工业化过程中存在的技术问题及今后研究工作的主要方向。     

黄油的研究进展

近年来国内黄油的贸易量、关注度和研究热度显著上升。黄油开发及创新面临着如何提升感官特性、健康品质和绿色发展水平等多重挑战。作者综述了黄油市场及国内外研究现状,分析了未来黄油研发的重点方向与解决方法,重点探讨了未来黄油的原料创新和技术创新方式,旨在为当前黄油生产和新型黄油开发提供参考。     

液态发酵法产Lovastatin的研究进展

Lovastatin是Aspergillus和Monascus等丝状真菌的次生代谢产物,在人体内通过竞争性地抑制胆固醇合成的限速酶3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶而阻断内源性胆固醇的合成,强烈降低血胆固醇浓度,是预防和治疗高血脂症和高胆固醇症及相关病症的有效药物。近年来,研究人员对液态发酵产Lovastatin开展了广泛深入的研究,取得了一系列重要研究进展,促进了工业化生产Lovastatin的发展。文中对Lovastatin高产菌种及选育、碳源和氮源及发酵培养条件对不同菌种产Lovastatin的影响等方面的研究进展进行了综述,为相关的研究与应用提供参考。     

转谷氨酰胺酶改性可食用膜的研究进展

转谷氨酰胺酶可催化蛋白发生交联反应,从而改性可食用蛋白膜和复合膜的组织结构和特性,如抗拉强度、断裂伸长率、阻水性、阻油性、透氧系数等,在食品工业中具有广阔的应用前景.本文介绍转谷氨酰胺酶改性对大豆蛋白可食用膜、乳清蛋白可食用膜、明胶可食用膜和复合膜的特性影响以及应用前景.     

燕麦淀粉研究进展

本文简要介绍我国燕麦资源状况,阐述燕麦淀粉的提取、应用以及结构与性质,重点阐述燕麦淀粉显微结构、化学组成与分子结构、糊化性质、燕麦淀粉糊的透明度、老化性质、流变性质,并对燕麦淀粉研究进行展望。     

亚麻纤维改性技术研究进展

亚麻纤维是一种绿色健康的可再生天然纤维,越来越受到人们的青睐.本文从物理方法、生物技术、化学方法三方面详细地介绍了国内外亚麻纤维的改性技术,并展望了亚麻纤维的发展方向.