SOD对肿瘤细胞凋亡影响和抗氧化损伤的研究:Ⅱ.SOD对荷瘤小鼠脾淋巴细胞的辐射防护效应

以受照射荷瘤小鼠为实验对象,研究外源性超氧化物歧化酶(SOD)对荷瘤小鼠脾淋巴细胞分化、增殖、亚群间调节的影响,测定了抗氧化酶活性和氧化还原产物含量,观察了SOD对荷瘤小鼠脾脏超微结构的影响,同时检测SOD对射线杀伤肿瘤细胞效应的影响。结果显示,SOD能够促进受全身照射的H22肝癌荷瘤小鼠淋巴细胞分化、增殖及亚群间调节,同时增加脾脏组织中GSH-Px、T-SOD活力和GSH含量,降低MDA含量,并提高其免疫活性;SOD可明显减轻电离辐射对荷瘤小鼠脾淋巴细胞超微结构的破坏,并通过延迟s期时相对改变其细胞周期。实验结果提示,SOD通过清除自由基降低ROS浓度,减轻脾淋巴细胞脂质过氧化,延迟脾淋巴细胞S期时相而提高其辐射抗性,同时SOD可提高抗氧化物酶活性,并通过影响细胞凋亡信号转导途径,进而影响细胞凋亡基因的表达。     

白细胞介素-6对荷瘤小鼠正常组织的辐射保护效应

以受全身照射的S180肉瘤荷瘤小鼠为研究对象,利用化学比色法测定荷瘤鼠肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肺、脑和骨髓组织的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平和谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性,探讨白细胞介素-6(IL-6)对荷瘤机体正常组织辐射防护效应及机理。结果显示：荷瘤鼠受照射后其肝脏、肾脏、脾脏、骨髓、脑、肺组织匀浆中ROS、MDA含量明显升高,而GSH-Px和CAT活性明显降低,其机制是电离辐射造成抗氧化酶的损伤及机体内自由基含量上升。IL-6能够显著降低受照射荷瘤小鼠肝脏、脾脏、骨髓、脑组织匀浆中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平,提高谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性。对肾脏、肺组织匀浆中ROS、MDA含量和GSH-Px、CAT活性无明显影响。本实验提示IL-6通过清除ROS和保护抗氧化酶的损伤起辐射保护作用,IL-6对不同组织细胞辐射保护作用程度不同。是由于机体细胞中IL-6R的数量、亲和力及IL-6信号传导途径存在差异。     

LDR辐射后脾细胞裂解成分对淋巴细胞NK活性的影响

研究了低剂量辐射(LDR)后脾细胞裂解成分对淋巴细胞自然杀伤细胞(NK)活性的影响。用McAb直接法分离出CD57细胞和非CD57细胞(除CD57外的所有淋巴细胞)并以两者为效应细胞，K562细胞为靶细胞，将CD57与非CD57杀伤肿瘤细胞的作用进行比较；测定计算各自的杀伤活性并观察LDR辐射后脾细胞裂解成分对杀伤活性的影响。结果表明，CD57及非CD57细胞均对肿瘤细胞有杀伤作用，且非CD57细胞的作用更强；LDR辐射后脾细胞裂解成分能分别增强CD57及非CD57细胞体外抗肿瘤细胞效应(NK细胞活性及NK活性)。     

SOD对肿瘤细胞凋亡影响和抗氧化损伤的研究:Ⅲ.SOD对受分次照射的荷瘤小鼠肿瘤细胞脂质过氧化影响及分子机制

以荷瘤小鼠为动物模型,研究了全身照射下注射超氧化物歧化酶(SOD)对肿瘤细胞脂质过氧化、肿瘤组织端粒酶活性、肿瘤原癌基因c-Jun蛋白表达的影响。研究发现,SOD能增加S180肉瘤及Lewis肺癌组氧化产物丙二醛(MDA)含量,降低S180肉瘤谷胱甘肽(GSH)含量及血清超氧化物歧化酶总活力(T-SOD)、匀浆谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-Px)活力;降低Lewis肺癌组GPX-Px及T-SOD活力,不影响GSH含量;降低H22肝癌组GPX-Px的活力,不影响MDA、GSH含量及T-SOD活力。SOD明显降低接受电离辐射的S180肉瘤及H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织中端粒酶的阳性表达率,减少原癌基因c-Jun蛋白在S180肉瘤、Lewis肺癌荷瘤鼠中的表达。这一辐射增敏作用因肿瘤的种类而不同,可能与SOD在不同肿瘤中对癌基因c-Jun蛋白表达和端粒酶活性影响及药物在不同器官的代谢差异有关。     

雅安藏茶茶褐素对~(60)Co γ辐射损伤的防护作用

通过建立~(60)Co γ辐射损伤小鼠模型,探究雅安藏茶茶褐素对~(60)Co γ辐射损伤的防护作用。实验选取48只雄性SPF级小鼠,随机分成正常对照组、辐射对照组、阳性对照组,以及雅安藏茶茶褐素低、中、高三个剂量组,连续灌胃相应受试样品15 d,其中在灌胃第6 d,除正常对照组外,其余各组均进行全身一次性剂量为5 Gy的~(60)Co γ射线照射。第16 d称量体重后,小鼠眼睑取血、解剖后,测定其外周血细胞、骨髓脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)含量、胸脾指数、肝脏组织总抗氧化能力等相关指标。结果表明,与辐射对照组相比,雅安藏茶茶褐素能极显著提高辐射损伤小鼠血液的白细胞(White Blood Cell,WBC)、血小板(Platelets,PLT)、淋巴细胞(Lymphocytes,LYM)数量以及血液超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性(p0.01),极显著增强小鼠肝脏组织的总抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,T-AOC)、总超氧化物歧化酶(Total Superoxide Dismutase,T-SOD)活性(p0.01),并使股骨骨髓DNA含量极显著升高(p0.01);同时,使肝脏丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量极显著降低(p0.01),明显缓解了小鼠免疫器官胸脾的萎缩。其效果随茶褐素浓度而提高,其中高剂量茶褐素的效果达到或优于阳性药物的效果。结果表明,茶褐素对~(60)Co γ照射的辐射损伤小鼠的抗氧化系统和造血系统有较好的防护作用,以高剂量的效果最好。     

白介素-6对受全身分次照射荷瘤小鼠肿瘤细胞增殖与凋亡的影响

以受分次全身照射的三种荷瘤小鼠为研究对象,探讨白介素-6(IL-6)对不同肿瘤细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因p53、bcl-2表达的影响。本实验采用流式细胞术检测IL-6对S180肉瘤、H22肝癌、Lewis肺癌三种荷瘤小鼠经6MVX线分次全身照射后肿瘤细胞凋亡及增殖指数的影响,以免疫组织抗生蛋白链霉素?过氧化物酶?生物素(SP)法检测以上三种荷瘤小鼠肿瘤组织中p53、bcl-2的表达水平,及IL-6对经照射的三种荷瘤小鼠肿瘤组织p53、bcl-2表达水平的影响。结果表明:在接受全身分次照射的三种荷瘤小鼠中,Lewis肺癌IL-6组SPF值及PI值均较对照组低,AI值较对照组高(P<0.05),S180肉瘤荷瘤鼠结果相反(P<0.01),而在H22肝癌两组肿瘤细胞凋亡及增殖指数未见明显差异(P>0.05)。其机理可能与IL-6改变了肿瘤细胞所处的周期时相的比例有关。IL-6对凋亡相关基因p53、bcl-2的表达在不同肿瘤组织中具有不同影响,Lewis肺癌荷瘤鼠IL-6组肿瘤细胞p53表达水平较对照组低,S180肉瘤荷瘤鼠IL-6组肿瘤细胞bcl-2、p53表达水平较对照组高,而H22肝癌荷瘤鼠两组肿瘤细胞bcl-2、p53表达水平无明显差异。其作用可能与IL-6对不同肿瘤组织中凋亡相关基因p53、bcl-2的表达产生不同影响有关。     

小剂量辐射对荷瘤小鼠免疫功能的影响

研究了小剂量辐射对艾氏腹水癌小鼠免疫功能的影响。结果表明,荷瘤小鼠经10cGyγ射线照射后24h,脾细胞NK活性显著升高。经10cGy照后24h和5d,脾细胞对ConA的转化反应增强。经10cGy照后24h,30cGy照后24h和5d,外周血中肿瘤坏死因子含量明显增加。荷瘤鼠经5～50cGy的γ射线整体照射后,脾细胞对LPS的转化反应、胸腺细胞自发性~3H-TdR掺入、脾指数、肿瘤重量等指标均无明显变化。表明小剂量辐射对荷瘤小鼠的免疫功能具有一定的刺激作用,10cGy的γ射线整体照射对荷瘤小鼠免疫功能的刺激效应最明显。     

小剂量辐射对荷瘤小鼠免疫功能的影响

研究了小剂量辐射对艾氏腹水癌小鼠免疫功能的影响。结果表明,荷瘤小鼠经10cGyγ射线照射后24h,脾细胞NK活性显著升高。经10cGy照后24h和5d,脾细胞对ConA的转化反应增强。经10cGy照后24h,30cGy照后24h和5d,外周血中肿瘤坏死因子含量明显增加。荷瘤鼠经5～50cGy的γ射线整体照射后,脾细胞对LPS的转化反应、胸腺细胞自发性~3H-TdR掺入、脾指数、肿瘤重量等指标均无明显变化。表明小剂量辐射对荷瘤小鼠的     

低剂量~(60)Coγ线照射对人淋巴细胞质膜的效应

本文报道了低剂量~(60)Coγ线照射后人外周血淋巴细胞质膜表面受体功能和结构的变化。结果表明,25拉德照射后淋巴细胞活性 E 玫瑰(E_a)花环形成百分率显著减少(p<0.01),100拉德照射后未见进一步减少;25拉德照射后淋巴细胞小鼠红细胞玫瑰(M_E)花环形成百分率明显下降(p<0.01),100拉德照射后下降更显著;25拉德照射后淋巴细胞膜表面免疫球蛋白 G 阳性(S_mI_gG~+)细胞百分率减少,100拉德照射后减少更显著(p<0.01);100拉德照射后由电镜可见淋巴细胞质膜膨出,细胞核未见异常。     

甘草甜素镁对小鼠辐射损伤的防护作用

考察甘草甜素镁(Glycyrrhizin magnesium,Gly-Mg)的抗氧化活性及其对DNA损伤的防护作用。将小鼠分为空白对照组(生理盐水)、照射对照组(抗氧化实验:生理盐水+6.0 Gy;彗星实验:生理盐水+7.2 Gy)和照射给药组(抗氧化实验:50 mg/kg Gly-Mg+6.0 Gy、75 mg/kg Gly-Mg+6.0 Gy;彗星实验:50 mg/kg Gly-Mg+7.2 Gy、75 mg/kg Gly-Mg+7.2 Gy)。采用抗氧化试剂盒检测小鼠血清、肝组织和肺组织中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)的活性和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、脂质过氧化物丙二醛(Methylene dioxyamphetamine,MDA)的含量。结果表明:Gly-Mg能够提高小鼠血清和组织中SOD、CAT的活性;增加抗氧化低分子清除剂GSH含量,并降低MDA的含量。彗星实验结果表明,与照射对照组相比,照射给药组小鼠的彗星尾长、彗星尾矩、Olive尾矩、尾部DNA含量和尾部DNA含量百分比均显著降低(p0.01)。实验结果提示,目标化合物Gly-Mg对辐照导致的氧化损伤有一定的防护作用,而对小鼠外周血淋巴细胞的DNA损伤则具有显著的防护作用。     

SOD对肿瘤细胞凋亡影响和抗氧化损伤的研究:Ⅳ.SOD对荷瘤小鼠正常组织氧化损伤的保护效应

探讨超氧化物歧化酶(SOD)对电离辐射和肿瘤化疗药物对荷瘤机体正常组织损伤的保护效应及机制,测定荷瘤鼠肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肺、脑和骨髓组织的活性氧(ROS)、氧化产物丙二醛(MDA)水平和谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性,并观察SOD对荷瘤小鼠肝脏超微结构的影响。结果表明,荷瘤小鼠受照射和化疗药物后其骨髓、肝脏、肾脏、脾脏、组织匀浆中ROS、MDA含量明显升高,而GSH-Px和CAT活性明显降低,其机制是电离辐射和化疗药物造成抗氧化酶的损伤及机体内ROS含量上升。加入SOD与对照组相比,显著降低荷瘤小鼠骨髓、肝脏、脾脏组织匀浆中ROS、MDA含量,略微升高GSH-Px和CAT活性,而对肾脏组织匀浆中ROS、MDA含量和GSH-Px和CAT活性无明显影响,同时SOD可明显减轻电离辐射对荷瘤小鼠肝细胞超微结构破坏,SOD通过直接清除自由基和保护抗氧化酶的损伤起辐射保护作用。     

低剂量辐射对小鼠肠道损伤的影响

采用3种不同低剂量(L组0.04 Gy/d、M组0.12 Gy/d、H组0.2 Gy/d)辐射对3组Balb/c小鼠进行连续5天的照射(分别累积照射0.2、0.6、1.0 Gy),设立对照组(NC),照射结束后测定小鼠体重、外周血象、脏器指数、小肠组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、免疫细胞因子(IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α)、DNA损伤、细胞凋亡等指标的变化。通过比较不同低剂量辐射下小鼠肠道损伤指标的变化,以探讨低剂量辐射小鼠肠道损伤最佳照射剂量,为低剂量辐射小鼠肠道损伤模型的建立提供科学依据。结果表明,连续照射5天后,各照射组相比于对照组,小鼠体重、脏器指数均有不同程度下降(脾脏指数L组p＜0.05、M、H组p＜0.01);小肠组织中MDA含量明显升高(L组p＜0.05、M、H组p＜0.01);SOD含量有不同程度下降;TNF-α、IL-2、IL-1β和IL-6作为代表性促炎因子呈剂量依赖性升高(IL-1β:M、H组p＜0.05,IL-2:M组p＜0.05、H组p＜0.01,TNF-α:M、H组p＜0.05);M、H组有明显DNA损伤及细胞凋亡。通过以上结果得出本次低剂量辐射小鼠肠道损伤模型的最佳照射剂量及方法为0.12 Gy/d连续照射5天累积0.6 Gy。     

小鼠受100rad照射后组织荧光产物含量和硒谷胱甘肽过氧酶活性的变化

本文中实验测定了100rad受照小鼠肝、脾和睾丸组织的荧光产物含量以及肝和脾组织的Se-GSHPX活性。与对照组相比,在照后的15天内肝荧光产物的含量无明显变化;在照后7天至15天脾荧光产物含量明显增加(P<0.01);睾丸除照后3天降低外(P<0.05),在观察的7天内无明显变化。从照后1天至5天肝SeGSHPx活性增高(P<0.05),到照后7天有恢复趋势;脾Se-GSHPx活性在照后3天明显升高(P<0.01),照后5天和7天转为降低(P<0.05)。     

超氧化物歧化酶与阿米福汀对小鼠急性放射损伤预防作用的比较

本研究建立了小鼠全身放疗的损伤模型,以比较预给药超氧化物歧化酶(SOD)和阿米福汀对小鼠放射治疗损伤的防护效果。C57BL/6小鼠用6 Gy X射线进行全身一次性照射,在放射后24 h处死,测定小鼠外周血红、白细胞数量,胸腺指数和脾脏指数,以及肝脏抗氧化活力。结果表明:与放疗对照组相比,放疗前给药SOD组对放疗鼠的外周血白细胞数量和胸腺指数有显著的保护作用,使之分别增加66.7%和19.1%。测得放疗前给药阿米福汀对放射鼠的外周血白细胞数量和脾脏指数有显著的保护作用,使之分别增加106.9%和22.6%。此外,与放疗对照组相比,放疗前给药SOD对放疗鼠的肝脏抗氧化能力也有显著提高,可使肝脏的MDA水平下降12.7%,SOD活力增加10.8%,T-AOC活力增加45.0%,放疗前给药阿米福汀可使放疗鼠肝脏的MDA水平下降22.3%。     

人参三醇组甙对雄性大鼠阿片肽与免疫功能的辐射防护作用

采用５ＧｙＸ射线全身照射雄性大鼠模型，大鼠于照射前２４ｈ及照射后，每天腹腔注射５ｍｇ／０．２ｍｌ人参三醇组甙，共注射１４ｄ，观察人参三醇组甙对其阿片肽与免疫功能的辐射防护作用。结果表明，照射组下丘脑阿片肽含量及胸腺和脾脏免疫参数均降低；而在照射加人参组下丘脑阿片肽组水平，所有的免疫参数虽降低但却高于照射组。结果提示，人参三醇组甙可减轻下丘脑网片肽含量及含量接近对照胸腺和脾脏免疫参数的降低，具有辐射防护作用。     

GM-CSF/IL-3融合蛋白、GM-CSF和IL-3抗辐射诱导Tf-1细胞凋亡的分子机制

摘要探讨造血生长因子GM-CSF／IL-3融合蛋白、GM-CSF及IL-3抗γ射线辐射诱导Tf-1细胞凋亡的分子机制。采用荧光强度比色法检测辐射后Tf-1细胞内Caspase-3活性;RT-PCR半定量及免疫组化实验方法分别观察Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平的变化。GM-CSF／IL-3融合蛋白、GM-CSF、IL-3以及GM-CSF与IL-3合用均可使辐射后Tf-1细胞内Caspase-3活性明显降低,其活性是不加入任何细胞因子对照组的15．71％-43．65％。在Tf-1细胞辐射后48h时,各细胞因子组Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平较对照组明显提高;其中GM-CSF／IL-3融合蛋白10μg／L组在辐射后24h时观察到Bcl-2 mRNA表达增强。细胞辐射后48h时,GM-CSF／IL-3融合蛋白10μg／L、100μg／L及IL-310μg／L组Caspase-3 mRNA的表达明显增强;辐射后48h时,各细胞因子组均观察到Caspase-3蛋白表达增多。三种细胞因子可通过明显抑制Caspase-3活性、促进Bcl-2、Caspase-3mRNA、蛋白质的表达以及抑制Caspase-3酶原激活而发挥抗辐射诱导的Tf-1细胞凋亡。     

N-乙酰基-S-烯丙基-L-半胱氨酸的合成及其抗辐射活性

以L-半胱氨酸为原料,经取代和酰化两步反应合成目标产物N-乙酰基-S-烯丙基-L-半胱氨酸(N-acetyl-S-allyl-L-cysteine,NAc-SAC)。以~(137)Csγ射线照射至不同剂量的ICR小鼠作为研究对象,通过30 d存活率实验、血相和免疫系统实验、各项脏器指数以及外周血淋巴细胞彗星实验,研究目标化合物分别在200、400、600 mg/kg给药剂量下的抗辐射活性。ICR小鼠经伽马射线照射至致死剂量7.5 Gy后,其存活率由单纯照射对照组的41.6%,分别提高到NAc-SAC给药组的58.3%、50.0%和66.7%,平均存活天数明显延长。~(137)Csγ射线照射至亚致死剂量6.0 Gy后,NAc-SAC在不同程度上增加了受照小鼠的脾指数、脾结节数(CFU-S)、骨髓DNA含量和白细胞数。彗星实验中7.0 Gy伽马射线照射联合NAc-SAC给药组小鼠外周血淋巴细胞的尾长、尾矩、Olive尾矩和尾部DNA百分含量明显低于7.0 Gy伽马射线单纯照射组(p0.01),提示NAc-SAC可明显降低辐射导致的DNA损伤。本研究表明,目标化合物NAc-SAC具有一定的抗辐射损伤作用。     

碳离子全身辐照对小鼠血清及肝脏中超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量和脑组织中还原性谷胱甘肽浓度的影响

用12C6 离子束对小鼠进行吸收剂量分别为0.05、0.1、0.3、0.5、0.75、1、1.5、2Gy的一次性全身照射,5d后测定血清及肝脏中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(Maleic dialdehyde,MDA)含量,以及脑组织中还原性谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的浓度.结果显示,吸收剂量小于0.75 Gy小鼠的血清及肝脏中SOD活性高于对照组,大于0.75 Gy则低于对照组;吸收剂量小于0.3 Gy小鼠的血清及肝脏中MDA含量小于对照组,大于0.3 Gy则大于对照组;吸收剂量小于0.5 Gy小鼠的脑组织GSH浓度大于对照组,大于0.5 Gy则小于对照组.低剂量的重离子全身辐照对小鼠的抗氧化系统有一定的激活作用,随着照射剂量的增大,抗氧化酶活性明显降低,脂质过氧化水平增高.