食品中金黄色葡萄球菌及肠毒素的检测方法

食品中金黄色葡萄球菌及肠毒素的常规检测方法包括传统的微生物分离培养及生化鉴别,肠毒素的免疫学检测等。本文简要介绍了各种方法及其原理和优缺点。     

产气荚膜梭菌肠毒素基因地高辛探针制备与检测方法建立的初步研究

产气荚膜梭菌（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ,ＣＰ）是人类和家畜重要的厌氧性病原菌,产生肠毒素的ＣＰ是人类食物中毒病原菌。本研究用地高辛标记肠毒素基因制备探针,并建立了原位杂交检测方法,直接检测肠毒素基因（ｃｐｅ）。这是继ＰＣＲ检测方法后又一项特异性基因诊断技术。由于利用了光学显微镜观察结果,形态学上比较直观,增加了实验的准确性。与ＰＣＲ、乳胶凝集相比,原位杂交检测方法具有较高的敏     

金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法及前处理技术研究进展

金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌之一,肠毒素是导致金黄色葡萄球菌食物中毒的最主要原因。现有肠毒素检测方法包括免疫学方法、分子生物学方法、生物传感器方法和质谱法等。各方法均存在优劣,酶联免疫学作为现有国家、行业标准推荐方法,虽然灵敏度高,但存在交叉反应,且价格昂贵。而质谱分析技术法具有高通量、专属性强等优点,已成为近年肠毒素检测技术研究热点。由于食品基质含有脂质,糖类等多种复杂成分,对肠毒素的分离与检测具有较强的干扰,因此选择恰当的样品前处理方法是实现肠毒素的准确检测的关键。本文分别从肠毒素性质、肠毒素检测方法及原理、样品前处理方法等方面对现有研究进展进行阐述。通过对现有技术方法的比较分析,基于高效液相分离技术结合质谱检测技术开发肠毒素检测方法,不仅能够从食品中实现多种肠毒素的高效分离富集,还具有灵敏度高、专属性强等优点,是未来肠毒素检测方法的主要研究方向。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌分泌的肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)作为与食品中毒相关的重要毒素之一而被广泛报道。同时由于其具有热稳定性、易制备、高毒及易传播等特点引起科研人员的高度重视,因此,建立SEB高效的检测方法非常重要。本文对SEB的检测方法进行了综述,主要讨论了生物学检测、免疫凝集实验、琼脂糖扩散法、酶联免疫检测技术、放射性免疫检测技术、免疫荧光检测技术、胶体金试纸条检测技术、基因探针、仪器分析、生物传感检测等检测方法的原理及相关国内外研究进展的应用和局限,这对提前预防金黄色葡萄球菌肠毒素B引起的食物中毒具有重要意义,同时也为今后开发新型检测方法提供理论参考和技术支持。     

食品中金黄色葡萄球菌快速检测方法的研究进展

介绍金黄色葡萄球菌及肠毒素常见快速检测方法的原理、优缺点及其应用,并对各种方法在特异性、检测速度、简便性等方面进行了比较.最后对金黄色葡萄球菌检测方法进行了展望.     

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素是引起人类疾病和细菌性食物中毒的主要致病因子,目前已知有10个血清型。在食品卫生检验工作中,曾有过多种检测肠毒素的方法,通过对各种检测方法的原理及特点的概述,介绍了各种方法的应用范围和优缺点。     

环介导等温扩增法快速检测产肠毒素大肠杆菌的研究

建立环介导等温扩增技术快速检测食源性致病菌不耐热型产肠毒素大肠杆菌的方法.选用不耐热肠毒素(LT)编码基因的6个保守区设计LAMP引物,优化dNTPs浓度、BstDNA聚合酶浓度、反应温度、反应时间等反应条件,评估该方法的特异性和灵敏性.结果显示该方法检测不耐热型产肠毒素大肠杆菌时间短,特异性较好,灵敏性高.     

金黄色葡萄球菌B型肠毒素间接竞争ELISA 检测方法的建立

以金黄色葡萄球菌B型肠毒素免疫Balb/c小鼠,待血清效价达到要求后,腹腔注射骨髓瘤细胞,制备抗金黄色葡萄球菌B型肠毒素抗体,并建立快速检测金黄色葡萄球菌B型肠毒素的间接竞争ELISA(ciELISA)方法。经方阵滴定确定B型肠毒素的最佳包被浓度为0.31μg/ml,抗B型肠毒素抗体的稀释度为1:1.2×104,羊抗鼠IgG-HRP的稀释度为1:103。本实验建立的B型肠毒素的间接竞争ELISA检测方法的最低检测量为1ng/ml,线性检测范围为1～103ng/ml,相关系数R2=0.9951,人工污染样品的平均回收率为94.5%。     

多重PCR检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的研究

目的:为了建立一种简单、快速检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法。方法:根据相关文献和Genebank报道的编码金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E、H的基因序列,选择合成了6对特异性引物,建立多重PCR体系,并对反应条件进行了优化。结果:6对引物能同时特异地扩增出120、478、257、319、170、375bp的目的片段,表明6对引物具有良好的特异性。结论:成功地建立了一种同时检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法,在金黄色葡萄球菌肠毒素快速筛查方面具有良好的应用前景。     

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素是引起人类疾病和细菌性食物中毒的主要致病因子，目前已知有10个血清型。在食品卫生检验工作中，曾有过多种检测肠毒素的方法，通过对各种检测方法的原理及特点的概述。介绍了各种方法的应用范围和优缺点。     

PCR检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因

目的:检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱携带情况,探讨与食物中毒发病相关的金黄色葡萄球菌基因类型。方法:取食品中检出的金黄色葡萄球菌进行分离培养鉴定,通过PCR技术检测样本18种不同型的肠毒素基因的携带情况,并进行统计学分析。结果:食品中检出的金黄色葡萄球菌肠毒素基因有较高的阳性检出率,主要检出sea、seb、sei、seg、sel、sem、sen等基因,其中sea基因检出率最高,达到77.27%;sei、seg、sem、sen基因具有相关性,检出率为9.09%;seb、sel基因的检出率为4.55%。结论:在食品中主要检出金黄色葡萄球菌肠毒素sea、sei、seg、sem、sen、seb、sel等基因,其中,sei、seg、sem、sen基因的相关性还有待进一步深入研究。     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素及其检测方法

金黄色葡萄球菌是一种重要的食源性致病菌,在自然界中广泛分布,其引起的食物中毒是世界性的公共卫生问题。金黄色葡萄球菌肠毒素是引起金黄色葡萄球菌食物中毒的主要致病因子。目前共发现22种金黄色葡萄球菌肠毒素或类肠毒素(SEA-SEE、SEG-SET、SElU、SElU_2和SElV),其中具有催吐活性的被定义为肠毒素,没有催吐活性或者尚待验证的被定义为类肠毒素(SEl)。传统肠毒素SEA~SEE被报道是引起金黄色葡萄球菌食物中毒的主要肠毒素类型,但是大多数新型肠毒素或类肠毒素与食物中毒的关系还没有被真正认识。本文对近几年关于金黄色葡萄球菌肠毒素与食物中毒的关系、肠毒素的表达调控以及肠毒素检测方法的研究进展进行了总结,以期更好地了解金黄色葡萄球菌新型肠毒素致病性,为今后金黄色葡萄球菌食物中毒的预防和控制提供依据。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C在草莓中 表达的研究

目的研究金黄色葡萄球菌在草莓中生长情况及与3种肠毒素SEA、SEB、SEC产生的相关性。方法将实验菌株进行肠毒素分型确认后,分别制备10~4 CFU/g(高)、10~2CFU/g(低)两个浓度菌液,采用浸泡方式人工污染到草莓上,分别于8℃、25℃下贮存,贮存过程中参照GB 4789对草莓进行金黄色葡萄球菌计数和金黄色葡萄球菌肠毒素(A-C)检测。结果适宜条件下,无论初始污染程度高低,金黄色葡萄球菌都能在草莓上正常生长代谢并产生肠毒素,特别是SEA的产生较SEB和SEC迅速。其中,25℃贮存条件下,金黄色葡萄球菌累计到10~4 CFU/g以上就可从样品中检测到SEA,累计到10~5 CFU/g以上可以检测到SEC,累计到10~7CFU/g以上可以检测到SEB;8℃贮存条件下,48 h内未检测到肠毒素。结论以草莓作为金黄色葡萄球菌培养基质,获得了金黄色葡萄球菌生长及与3种常见肠毒素产生的相关性,对草莓微生物风险评估及相关标准制订具有参考意义。     

一起由生化异常的金葡菌产生的肠毒素引起的食物中毒

９５年１１月我站接到顺义县防疫站送来的食物中毒样品美式炸鸡一件,据介绍中毒者为一家五口人,症状为头痛、呕吐、颈项强直,神志不清,经实验室检测出样品每１００ｇ含金葡菌肠毒素１０μｇ,并检出一株色素及生化不典型的金黄色葡萄球菌,检测出该菌产生ＡＤ型肠毒素。     

乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素的PCR检测

介绍了PCR技术在检测乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素方面的研究进展，并对其今后的发展方向和前景进行了展望。     

金黄色葡萄球菌肠毒素与多位点序列分型分子分型研究进展

金黄色葡萄球菌是引起临床疾病、社区感染和食物中毒的常见革兰氏阳性菌;肠毒素是参与金黄色葡萄球菌引起食物中毒、猩红热、全身感染等疾病的重要毒力因子;目前已发现27种金黄色葡萄球菌肠毒素/类肠毒素,不同来源金黄色葡萄球菌携带肠毒素/类肠毒素存在差异;多位点序列分型(MLST) 是一门新兴的基于细菌多个管家基因位点差异性分析、可长期监测细菌遗传进化趋势的分子分型技术;截至2021年初MLST已建立128种细菌的分型数据库,金黄色葡萄球菌数据库中已有6583种分型,金黄色葡萄球菌ST分型存在明显的地区流行性,各地已形成独特优势克隆。目前研究表明金黄色葡萄球菌肠毒素/类肠毒素携带与MLST分型间存在一定的相关性,本文将围绕金黄色葡萄球菌肠毒素/类肠毒素、MLST分型及相关性进行综述。     

LAMP技术检测食品中产肠毒素大肠埃希氏菌

产肠毒素大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一种重要的引起人畜共患病的致病菌,能引起水样便及酸中毒,建立快速、准确的检测方法对预防和控制产肠毒素大肠埃希氏菌的感染具有重要意义。基于ETEC不耐热肠毒素LT基因序列,设计LAMP引物检测产肠毒素大肠埃希氏菌。结果表明:LAMP检测产肠毒素大肠埃希氏菌的检出限为32.9cfu/mL,人工污染生猪肉的检出限为55cfu/g。LAMP将可以成为替代PCR的核酸扩增新技术,为快速检测产肠毒素大肠埃希氏菌构建了一个技术平台。     

基于qPCR检测金黄色葡萄球菌3种肠毒素基因的方法研究

目的建立同时检测3种可引起食物中毒金黄色葡萄球菌肠毒素sea、seb、sec基因的方法。方法对GenBank中公布的sea、seb、sec基因序列进行分析,针对3种肠毒素基因分别设计3对特异性引物和探针,通过条件优化建立检测肠毒素sea、seb、sec基因的三重qPCR方法。结果该方法可以特异性检测到sea、seb、sec基因,而与其他病原菌或肠毒素基因无交叉反应;对肠毒素sea、seb、sec基因的最低检测量分别为10.2、1.63、9.4 copies/μL;组内和组间的变异系数均小于5%。结论该方法快速灵敏、准确可靠,为金黄色葡萄球菌肠毒素的快速检测及多重qPCR试剂盒的开发奠定基础。     

利用简并引物检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因

通过设计简并引物建立一种PCR技术同步快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A和B基因的方法。根据金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因编码序列,设计一对特异性简并引物SEAB来扩增靶基因片段,长度分别为105bp和135bp,通过对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B菌株和4株对照菌株进行PCR检测,评价该引物的特异性;对金黄色葡萄球菌肠毒素B的DNA系列10倍稀释,对其灵敏性进行PCR检测。结果显示,金黄色葡萄球菌肠毒素A和B菌株的DNA检测结果呈阳性,4株对照菌株的检测结果呈阴性,通过基因测序证实了PCR产物的特异性,SEB的DNA最低检测浓度为3.58ng,整个检测过程不超过20h。建立了一个特异、快速灵敏的在同一条件下,金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因的PCR检测方法。     

研究开发出抑制葡萄球菌毒素中毒的新蛋白

美国伊利诺斯大学生化教授DavidM．Kranz最近在NatureMedicine上发表文章声称获得一种治疗肠毒素B感染的新方法。肠毒素B是一种由金黄色葡萄球菌产生的毒素，是导致食物中毒的常见原因之一。金黄色葡萄球菌肠毒素B（sEB）是超级抗原，在人体和其它动物体内引起剧烈的免疫反应，与T细胞受体的可变区结合，导致一系列级联反应事件，包括释放各类细胞因子，如IL-1，IL-6等，甚至因过度免疫反应导致中毒或死亡的发生。