梨形毛霉蛋白酶在大豆多肽制备中的应用

本文研究了腐乳生产菌种梨形毛霉所产蛋白酶对大豆分离蛋白的降解条件,并分析了酶解产物的疏水性、分子量分布及氨基酸组成。结果表明该蛋白酶酶促降解大豆分离蛋白的最佳条件是温度45℃、反应时间5h、pH6.0、酶用量750U;在此条件下制备的大豆肽经质谱检测其分子量在1000D左右,完全符合大豆肽产品的要求;经品尝,该产品无任何苦涩味,色泽淡黄,无需脱盐处理,可直接调配成酸性蛋白肽饮料。     

多酶复合水解法生产高水解度大豆寡肽的工艺优化

为提高大豆蛋白的水解度,生产低分子量大豆寡肽,采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶和中性蛋白酶对大豆分离蛋白进行水解,并采用中心组合试验和Box-Behnken试验对复合酶的组成和酶解工艺进行了优化。研究结果表明:复合酶的最佳组成为碱性蛋白酶38.4%、风味蛋白酶27.2%、中性蛋白酶34.4%。最佳水解条件为pH 8.79、温度50.46℃、底物浓度10%g/ml,在此条件下酶解6 h,大豆分离蛋白的水解度可达28.7%,寡肽收率高达83.56%,所得大豆寡肽产品中肽含量高达81.3%,数均分子量低至850,各理化指标均符合国标GB/T22492-2008对一级大豆寡肽产品的质量要求。     

微波双酶协同水解大豆分离蛋白制备小分子肽的研究

研究微波加热条件下，用碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶水解大豆分离蛋白。以氨基氮为评价指标，确定了单酶水解工艺，双酶分步水解的顺序和制备小分子大豆多肽的最佳条件，并通过毛细管电泳方法对水解多肽的分子量进行测定。实验表明：双酶水解优于单酶，制得的大豆肽分子量主要集中在5000以下。     

两种双酶切大豆分离蛋白技术路线的比较

本研究以碱性丝氨酸蛋白酶和蛋白酶Ⅱ作为水解酶对大豆分离蛋白进行两步定向酶切,以制备具有改善肝昏迷生物活性的高F值寡肽。本研究设定两种定向酶切的技术路线,即在酶解过程中维持碱性丝氨酸蛋白酶最适pH的时间分别设定为3h（技术路线Ⅰ）和30min（技术路线Ⅱ）,而蛋白酶Ⅱ分别在酸性及中性条件下继续酶解大豆分离蛋白水解液。结果表明,技术路线Ⅰ、Ⅱ蛋白质回收率分别为86.5%、87.8%;酸溶性氮得率分别为83.2%、86.4%;灰分含量分别为11.1%、7.0%;技术路线Ⅰ所得肽的相对分子质量分布范围为：分子量大于5000的肽占肽总量的20.6%,分子量在3000左右的肽占总量的3.3%,分子量在500～600之间的肽占肽总量的61.3%;技术路线Ⅱ所得的产物组分相对分子质量分布范围为：分子量在1000以下的占71.3%,且分子量主要在700～900之间,分子量在2000左右的占5.7%,分子量在5000以上的占12.8%。研究结果表明,技术路线Ⅱ的酶切效果优于技术路线Ⅰ的。     

碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对热变性大豆分离蛋白的酶解研究

采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对热变性大豆分离蛋白进行酶解,研究两种蛋白酶酶解温度对大豆分离蛋白酶解效果的影响。结果表明:碱性蛋白酶在60℃时比在70℃时对大豆分离蛋白的酶解更彻底,得到的相对分子质量小的肽段更多,大豆分离蛋白的水解度较高(14.73%);酶解温度对木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白的效果影响不明显;与木瓜蛋白酶相比,碱性蛋白酶酶解大豆分离蛋白可以得到更多的小分子肽段。     

大豆活性肽酶解制备的工艺条件研究

以大豆分离蛋白为原料,选用碱性蛋白酶和风味蛋白酶,分别从酶解pH 值、酶解温度、酶用量和底物质量分数因素研究其对单酶酶解大豆分离蛋白的影响。并通过Minitab 软件,利用响应曲面试验优化双酶酶解工艺条件。结果表明,其最佳酶解条件为酶解pH7.7、碱性蛋白酶用量为110mg/g 底物、风味蛋白酶用量为90mg/g底物、酶解温度56℃、底物质量分数8%、酶解时间7h,所得的大豆活性肽的分子量主要集中在1000D 以下。     

酶法水解制备植物蛋白肽粉的研究

以大豆分离蛋白和谷朊粉为原料,选择碱性蛋白酶(Alcalase)酶解制备植物蛋白肽粉。考察了pH、酶解温度、酶解时间对大豆分离蛋白、谷朊粉及二者混合物分别酶解的影响。结果表明:相同的条件下谷朊粉的酶解程度比大豆分离蛋白高,所得肽粉的相对分子质量整体分布更小一些;大豆分离蛋白和谷朊粉混合物酶解制备的肽粉,其氨基酸组成比例基本满足FAO推荐的必需氨基酸模式,且肽粉中游离氨基酸含量很少;肽粉的表面疏水性远小于大豆分离蛋白和谷朊粉。研究结果为通过调节蛋白原料比例(大豆分离蛋白、谷朊粉等)来制备具有合适氨基酸配比的植物蛋白肽粉提供了理论基础。     

酶解制备高得率大豆肽工艺条件优化

用Alcalage碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽.通过单因素实验研究了底物质量分数、酶解pH、酶解温度、加酶量对蛋白水解度和大豆肽得率的影响,并通过响应面分析法对酶解条件进行了优化,得出最佳条件为:底物质量分数5%,酶解pH9.5,酶解温度55℃,加酶量5 400 U/g蛋白.在此条件下,大豆分离蛋白水解度为20.16%,大豆肽得率为92.30%.     

大豆肽的分级膜分离及功能特性研究

本文采用不同截留分子量的超滤膜对大豆肽溶液进行分级分离 ,将Alcalase碱性内切蛋白酶水解大豆分离蛋白制得的大豆肽溶液分成分子量 >30kD、10kD～ 30kD、5kD～ 10kD和 <5kD四个组分 ,并对不同分子量段大豆肽的分子量分布和功能特性进行研究。结果表明 :膜分离方法能对大豆肽进行有效的分离 ;不同分子量的大豆肽在溶解性、起泡性和乳化性等功能特性方面也各不相同     

酶法制备大豆肽的相对分子量分布及降压作用研究

目的:为了研究双酶复合酶解大豆分离蛋白制备大豆肽的相对分子量分布及活性片段对实验性高血压大鼠的降压效果。方法:通过单因素实验优选,采取正交实验优化复合酶的酶解工艺,以酶解液对血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标优选最佳工艺;通过超滤、纳滤后得到最佳分子量片段,应用左硝基精氨酸(L-NNA)诱导大鼠高血压模型,分别给予不同剂量的活性片段进行实验。结果:双酶复合酶解的最佳条件为:在料液比为1:20 g/mL的情况下,酶解温度50℃,酶底比3.0%,酶解pH7.0条件下先用菠萝蛋白酶酶解2 h后,再以酶底比4.0%加入胰蛋白酶,控制温度为40℃、酶解pH为8.0条件下酶解4 h,大豆分离蛋白的水解度35.31%。经过高效液相对酶解液的相对分子量分布得出,大豆分离蛋白原液含有的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间在5000~1.0×105 Da,在双酶复合酶解下,酶解液的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间均在500~4000 Da;通过超滤得出最佳活性片段为1000~3000 Da,药理实验表明,与模型对照组相比各组血压均有降低,且大豆肽剂量组有显著性差异(p<0.05);其中大豆肽高剂量组和卡托普利组相当。结论:双酶复合酶解制备的大豆肽相对分子量较小,活性片段对高血压大鼠模型降压作用显著。     

大豆肽的生产新工艺研究

通过对酶解工序的研究,优化以大豆分离蛋白为原料同时生产两种大豆肽的生产新工艺。实验结果表明:产物大豆肽A的最佳工艺条件为酶解时间4h,体系pH8.0,温度60℃;产物大豆肽B的最佳工艺条件为酶解时间3.5h,体系pH8.5,温度55℃。另外,测定产物A和产物B的分子量分别在440u和650u。     

大豆分离蛋白肽-硒螯合物的制备及结构、抗氧化活性研究

对大豆分离蛋白酶解工艺及大豆分离蛋白肽-硒螯合物的制备工艺进行优化;采用吸收光谱和荧光光谱对大豆分离蛋白肽-硒螯合物的结构进行表征,并对其抗氧化性进行研究。结果表明,大豆分离蛋白经复合风味蛋白酶于温度50℃、底物浓度3%、酶/底物5g/100g条件酶解后,于pH 10、时间2h、温度78℃条件进行螯合时,所得螯合物螯合力为46.143mg/g,结构表征证明硒与大豆分离蛋白肽螯合并可引起荧光猝灭现象,且其具有高于大豆分离蛋白肽的抗氧化活性。     

大豆蛋白改性酶解制备大豆肽的研究

利用大豆蛋白改性酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽,以单因素试验和正交试验确定酶解最佳条件,通过高效液相法分析大豆肽的分子量分布,并检测了大豆肽的体外抗氧化效果。结果显示：在20g/L的底物浓度下的最佳条件为酶和底物比8 000U/g、温度55℃、pH值7.5、水解时间5h,水解度为51.4%。大豆肽主要为130～1 000u的短肽,占肽总量的86.3%。大豆肽对超氧阴离子（O2·^-）和羟自由基（.OH）的半最大清除浓度分别为1.3mg/mL和8.0mg/mL。表明大豆蛋白改性酶对大豆分离蛋白的水解能力较强,大豆肽有较强的抗氧化功能。     

高固形物浓度对大豆分离蛋白酸性蛋白酶酶解产物功能特性的影响

本文系统研究了提高固形物浓度对酸性蛋白酶酶法改性大豆分离蛋白分子量分布、氮溶解指数、分散稳定性、持水力、乳化性、起泡性和泡沫稳定性的影响。结果表明:大豆分离蛋白经过酸性蛋白酶控制酶解制备的改性大豆分离蛋白,其产物氮溶解指数、起泡性均有明显提高,分散稳定性略有提高;但持水力、乳化性、泡沫稳定性有所降低。在相同水解度下,随着酶解体系中固形物浓度的提高,改性大豆分离蛋白的分散稳定性、持水力、乳化活性均呈上升趋势,酶解产物中分子量小于10 kDa的肽段以及氮溶解指数呈下降趋势。当水解度小于8%时,低浓度酶解产物起泡性高于高浓度酶解产物,而水解度超过8%时,高浓度酶解产物起泡性大体高于低浓度酶解产物。     

应用双固定化酶制备大豆肽的研究

采用固定化胰蛋白酶和固定化木瓜蛋白酶分步对大豆分离蛋白进行水解，水解后酶解液中大豆肽含量为1．628～1．702mg／mL，水解度为54．4％～57．8％。多肽分子量在180以下水解度为11．1％～13．5％，181～2000为11．5％～14．5％，2000～5700为27．1％～27．2％，5700～10000为44．7％～49．6％。结果表明：双固定化酶对大豆分离蛋白的水解作用效率高，并能有效地将大豆分离蛋白降解为分子量更小的大豆肽。     

碱性蛋白酶对β-伴大豆球蛋白抗原性的影响

选用碱性蛋白酶处理大豆分离蛋白,间接竞争ELISA法测定水解物中β-伴大豆球蛋白的抗原性,响应面法优化降低β-伴大豆球蛋白抗原抑制率的最佳工艺条件。结果表明,碱性蛋白酶可以显著降低β-伴大豆球蛋白的抗原性,在一定程度上,水解度与β-伴大豆球蛋白抗原抑制率呈负相关关系。碱性蛋白酶在酶解时间40 min、加酶量3 000 U/g、温度55℃、p H 8.5条件下,β-伴大豆球蛋白抗原抑制率为33.48%,比大豆蛋白降低了64.16%。SDSPAGE结果显示,β-伴大豆球蛋白基本被酶解成小分子量肽段。     

定向双酶切制备高F值大豆寡肽工艺技术参数的研究

本研究采用碱性丝氨酸蛋白酶和蛋白酶II对大豆分离蛋白进行两步定向酶切,以制备具有改善肝昏迷生物活性的高F值寡肽。通过研究,确立了碱性丝氨酸蛋白酶和蛋白酶II定向酶切大豆分离蛋白的最适温度(T)、pH、底物浓度[S]、酶浓度和底物浓度比[E]/[S]等参数,并在此技术参数的基础上,设定两种定向酶切的技术路线,即在酶切过程中维持碱性丝氨酸蛋白酶最适pH的时间分别设定为3.5h(技术路线I)和30min(技术路线II),而蛋白酶II定向酶切大豆分离蛋白的技术参数不变。结果表明,技术路线I、II蛋白质回收率分别为87.0%、89.0%;蛋白质转化率分别为89.1%、90.5%;酸溶性氮得率分别为90.1%、90.6%;灰分含量分别为9.1%、5.9%;技术路线I分子量在500～610的肽含量为80.5%、技术路线Ⅱ分子量在450～650的肽含量为82.0%。研究结果表明,技术路线II的酶切效果优于技术路线I。     

酶解大豆蛋白工艺及其对面团流变特性的影响

采用响应面优化中性蛋白酶酶解大豆分离蛋白工艺条件,确定了最佳水解条件为加酶量6%、水解时间6 h、底物浓度3.7%、温度42℃、pH 7.0,得到水解度为7.74%。酶解得到水解度为3.1%、4.4%、5.2%、6.2%、7.4%的五种样品,并采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳来分析其分子量的变化规律。在小麦粉中分别添加2%的大豆分离蛋白和酶解样品,通过粉质仪和拉伸仪研究其对面团流变学特性的影响。结果表明,大豆分离蛋白酶解后产生两条新的肽段,其分子量约为30.5ku和26.4 ku;添加大豆分离蛋白的面团吸水率、稳定时间、面团拉伸能量、拉伸阻力、拉伸比例均有所增大;而添加酶解样品则均有所降低,并随着水解度的增加其对面团流变特性的破坏越严重。     

大豆肽的功能特性研究

报告了对采用酶水解法，由大豆分离蛋白制得大豆肽产品的部分功能特性的测定，其包括分子量分布、氨基酸组成，溶解度，粘度，吸水性及抗氧化性等。     

微波加热三酶分步水解制备小分子大豆肽

以大豆蛋白为底物,氨基氮含量为指标,确定微波加热三酶(碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶)分步水解的加酶方式和加酶顺序及制备小分子大豆多肽的最佳工艺条件,用荧光分析法测氨基氮含量(AN),葡聚糖G-50凝胶色谱法进行分离检测.结果表明:在各自最佳水解条件下,先加碱性蛋白酶,再加入木瓜蛋白酶,最后加入胃蛋白酶,三酶分步水解大豆蛋白,所得大豆肽氨基氮含量为2813.3506mg/L,明显优于单酶和双酶,制得的大豆肽分子量主要集中在1000u以下.用荧光分析法、G-50凝胶色谱可对大豆肽进行较好的分离检测.