5＇-磷酸二酯酶的应用与进展

5’-磷酸二酯酶是一种能将单链DNA和RNA水解为5’-核苷酸的磷酸二酯酶，也是酶法生产5’-核苷酸的主要工业用酶。文章对5’-磷酸二酯酶的来源、制备方法、应用及研究进展进行了综述。     

5''''-磷酸二酯酶的研究进展

5'-磷酸二酯酶是水解磷酸二酯键生5'-磷酸物质的酶,用于水解核酸得到5'-核苷酸,随着核苷酸产业的发展,该酶的研究和应用也愈发显得重要起来,重点论述了在5'-核苷酸生产中常用的5'-磷酸二酯酶的作用方式、酶的性质和酶的制备及应用.     

麦芽根提取5'-磷酸二酯酶对RNA酶解工艺研究

从麦芽根提取中的5′-磷酸二酯酶,原酶液酶活达到300U/mL。将提取的酶液用于水解酵母RNA,得到5′-AMP、UMP、CMP、GMP四种核苷酸,并系统研究了麦芽根5′-磷酸二酯酶对核酸的酶解条件。结果表明,最佳反应条件为:底物浓度3%,酶用量5%,温度68℃,pH6.5,水解时间为4～5h,在此条件下,酶解率可以达到84%。在酶解2h内补加RNA底物可提高酶利用率。     

5'-磷酸二酯酶的应用与研究进展

5'-磷酸二酯酶是一种能将单链DNA和RNA水解为5'-核苷酸的磷酸二酯酶,是酶法生产5'-核苷酸的主要工业用酶.文中对5'-磷酸二酯酶的来源、制备方法、应用及研究进展进行了综述.     

双酶法呈味核苷酸的研制 第1报 高产5′-磷酸二酯酶菌种选育、酶的形成及其作用条件的研究

5′-磷酸二酯酶是指能降解核糖核酸(简称RNA)为5′-核苷酸的酶。它是酶解法制造呈味核苷酸的关键酶。因此选育高产5′-磷酸二酯酶(简称为PD酶)是主要的技术关键之一。我们首先收集了国内现有的几株菌种,如M71、AS3.2788、桔青霉1131等,通过比较挑选出一株PD酶活力相对较高的桔青霉M71为出发     

从麦芽根中制备5’—磷酸二酯酶的研究

[前言]核酸水解酶广泛存在于生物体内,它在核酸代谢中起着非常重要的作用。根据酶作用于核酸分子的部位不同,分为5′-磷酸二酯酶和3′-磷酸二酯酶。其中5′-磷酸二酯酶是作用于核酸分子中3′-碳原子上的羟基与磷酸之间形成的二酯键,其产物为5′-核苷酸。酵母精是酵母的抽提物,具有独特的营养特性和呈味特性。其中5′—IMP(5′—肌苷酸)和5′—GMP(5′—鸟苷酸)能赋予酵母精独特的鲜味。目前用于生产酵母精的5′—磷酸二酯酶大多是进口的纯酶制剂,价格昂贵且很难买到。本研究利用麦芽厂的副产品一麦芽根制备5′—磷酸二酯酶既经济又方便。     

5′-磷酸二酯酶的提取

主要研究了桔青霉与麦芽根提取5′-磷酸二酯酶的方法，并对二者进行了比较。用快速登高法确定了麦芽根提取5′-磷酸二酯酶的最优区域。在此区域内浸提的5′-磷酸二酯酶酶活力可达300U／ml。酶液经超滤浓缩、冷冻干燥可制备得率较高的粗酶粉。     

5''''-磷酸二酯酶的提取

主要研究了桔青霉与麦芽根提取5′-磷酸二酯酶的方法,并对二者进行了比较.用快速登高法确定了麦芽根提取5′-磷酸二酯酶的最优区域.在此区域内浸提的5′-磷酸二酯酶酶活力可达300U/ml.酶液经超滤浓缩、冷冻干燥可制备得率较高的粗酶粉.     

麦芽根应用在核酸水解工艺的研究

从麦茅根中提取到磷酸二酯酶粗酶液经一定预处理工艺后,可用于来源于啤酒废酵母的RNA水解,以5’-核苷酸含量及酶解转化率为指标,初步确定核糖核酸在麦芽根粗酶液作用下水解的最适条件：底物浓度、酶用量、反应时间、反应温度及反应pH等。     

提高酵母抽提物品质研究

以啤酒废酵母为原料.研究了5-磷酸二酯酶提取及提高酵母抽提物品质的最适合条件,结果表明:从麦芽根中浸提5'-磷酸二酯酶的最佳条件为加水比9:1、浸提温度5℃、浸提24h,过滤得到的粗酶液酶活力迭143.5 U/mL.在酵母自溶液中添加5'-磷酸二酯酶液可显著提高酵母抽提液中5'一核苷酸含量,适宜水解条件为:添加5.00%(v/w)的酶液,在pH7.0、60℃-F作用2h,酵母抽提液中5'-核苷酸含重达8.06mg/mL,比不添加的3.25mg/mL提高1.48倍.     

利用发芽大麦提取5′-磷酸二酯酶的初步研究

文章研究了利用发芽的饲料级大麦来提取5′-磷酸二酯酶的工艺条件。试验结果显示,在25℃温度下,发芽64 h,麦芽中5′-磷酸二酯酶活性最高。利用此麦芽提取5′-磷酸二酯酶时,粉碎度为60目,在温度为50℃,提取液pH值为5.0,并且加入15%的NaCl,料液比为1∶10的条件下提取120 min,可以得到酶活力最高的提取酶液。     

酵母抽提物中呈味核苷酸含量偏低的原因探讨(Ⅱ) 啤酒酵母自溶过程核酸的降解规律研究

本论文通过详细测定酵母自溶过程中蛋白质、核酸以及各种核苷酸在产物中的变化量，研究pH、外加5’-磷酸二酯酶(麦芽根核酸酶)、外加蛋白酶等对酵母自溶的影响，从而探讨外加5’-磷酸二酯酶不能显著提高酵母自溶产物中呈味核苷酸含量的原因。研究结果显示：在自溶过程直接添加麦芽根核酸酶只能略提高酵母抽提物中呈味核苷酸的含量，但提高程度不明显；在pH8自溶的产物中5’-核苷酸和3’-核苷酸的量均显著低于在pH5自溶的产物中的量。酵母在pH8～8．5条件下自溶时，外加蛋白酶可以显著提高酵母自溶物产物中可溶性固形物含量、可溶性蛋白质和核苷酸的含量，显著降低核酸含量，产物中的5’-核苷酸含量显著比3’-核苷酸含量高。上述结果说明了酵母在外加麦芽根核酸酶条件下自溶时，核酸未能迅速降解并生成大量的呈味核苷酸的原因之一是由于酵母细胞壁的存在阻碍了细胞器中核酸的溶出，致使外加的5’-磷酸二酯酶不能很好与核酸底物接触，从而不能有效提高呈味核苷酸的产量。     

提高酵母精呈味核苷酸含量的探讨

酵母精是酵母的抽取物 ,其具有呈味特性 ,主要是其中５′-肌苷酸和５′-鸟苷酸能赋予独特的鲜味。但单凭酵母本身核酸水解酶的作用 ,产品呈味核苷酸含量是相当有限的 ,必须外加核酸水解酶。通过试验 ,采用了外加本公司研制的从大麦芽根提取的５′-磷酸二酯酶酶制剂 ,得到了提高酵母精中呈味核苷酸含量的最佳酶解工艺条件 :利用啤酒废酵母为原料生产酵母精 ,在自溶温度６０℃、自溶 ｐＨ８．０、固液比１∶１、５′-磷酸二酯酶的添加量为０．１０ %（ｖ／ｖ）、食盐添加量１．０%（ｗ／ｗ）的酶解工艺条件下自溶１５ｈ,可大大提高酵母精中呈味核苷酸的含量 ,生产出的膏状酵母精（含水分２８．７%） ,其５′-核苷酸含量高达２０６７．５ｍｇ／１００ｇ。提高酵母精呈味核苷酸含量的探讨@冯后俊$安徽怀远圣泉集团有限公司科研中心!233400 @吴长芳$安徽怀远圣泉集团有限公司科研中心!233400     

提高酵母精呈味核苷酸（I＋G）含量的研究

本文以新鲜面包酵母为原料，探讨了麦芽根５’—磷酸二酯酶和自溶后ＲＮＡ的提取工艺以及用５’—磷酸二酯酶定向水解ＲＮＡ生成５’—核苷酸的酶解工艺，得出了提高呈味核苷酸含量的最佳工艺条件：麦芽根加７倍水，４℃下提取２０ｈ；自溶后升温到９５℃，调ｐＨ８５，提取ＲＮＡ１００ｍｉｎ；７０℃、ｐＨ５２条件下以１０ｍｌ／１００ｇ自溶液的量加入５’—磷酸二酯酶作用２５ｈ，可使产品酵母精粉中呈味核苷酸（Ｉ＋Ｇ）含量达到１６０９ｍｇ／１００ｇ。     

香菇柄提取液鲜味成分的酶解增效工艺研究

为了进一步增强鲜味,采用5’-磷酸二酯酶和中性蛋白酶双酶酶解香菇柄提取液。通过单因素实验和正交实验优化5’-磷酸二酯酶酶解的最佳工艺条件,并在此基础上与中性蛋白酶联合,通过正交实验优化双酶酶解香菇柄提取液最佳工艺条件。结果表明,5’-磷酸二酯酶酶解的最佳工艺条件为加酶量0.3%、酶解pH5.0、酶解时间2 h、酶解温度60℃,在此条件下5’-核苷酸含量为0.41 mg/mL。复合酶法最佳工艺条件为5’-磷酸二酯酶加酶量0.3%、中性蛋白酶加酶量0.8%,酶解pH6.5、酶解温度50℃、酶解时间2 h,在此条件下测得5’-核苷酸含量为0.42 mg/mL,氨基态氮含量为0.45 mg/mL。通过以上结果,在不显著降低呈现滋味成分含量的情况下,复合酶解可比单酶分步酶解(5'-磷酸二酯酶2 h、中性蛋白酶3 h)节约一半时间以上。     

啤酒酵母中核苷酸的提取研究

对压榨啤酒酵母粉进行处理，采用盐热法提取核酸液，利用5’-磷酸二酯酶把核酸分解为4种核苷酸，按核苷酸的不同特性，用树脂对其进行分离，使4种核苷酸都能得到较好的分离。     

钝齿棒状杆菌菌体的酶解效果研究

研究利用自身酶和外源酶降解的技术方法对钝齿棒状杆菌菌体进行了处理。研究表明 :在 5 0℃ ,pH 6,菌体浓度 15 % ,反应 14h条件下 ,菌体自身降解的氨基酸态氮为 0 5 74% ,总核苷酸含量为 3 60mg/10 0mL。外源酶选择了 5 3 7酸性蛋白酶和由麦芽根提取的 5′—磷酸二酯酶 ,降解液的氨基酸态氮达到1 2 3 9% ,5′—单核苷酸为 82 2 8mg/ 10 0mL。     

呈味核苷酸的提取

研究提出了一种新的制取5’－核苷酸的方法。从大麦芽根部提出5’－磷酸二酯酶,以味精废液培育出的酵母为原料,采用稀碱法进行酵母破壁,然后再经5’－磷酸二酯酶的降解作用,制取出呈味5’－核苷酸。     

提高酵母精呈味核苷酸含量的研究

本文试验以啤酒废酵母为原料，采用自溶液中外加从大麦芽根中提取的5‘-磷酸二脂酶，来探讨啤酒废酵母自溶过程中不同因素对5‘-磷酸二脂酶定向水解酵母RNA生成5‘-核苷酸的影响，然后得出提高酵母精中呈味核苷酸含量的最佳酶解工艺条件，从而大大地提高了酵母精中呈味核苷酸的含量，生产的膏状酵母精（含水份28．7％）产品中5‘-核苷酸含量高达2067.5mg/100g。     

双孢蘑菇废弃菇柄核酸酶解及5’-核苷酸稳定性

为了提高双孢蘑菇废弃菇柄5’-核苷酸得率,增加其经济价值。以双孢蘑菇废弃菇柄为原料,首先通过单因素试验研究了pH值、酶底比、酶解温度、酶解时间对5’-核苷酸酶解得率的影响,并采用正交试验分析对5’-磷酸二酯酶对核酸的酶解条件进行优化;其次对双孢蘑菇废弃菇柄浸提液中5’-核苷酸在不同pH值、温度和加热时间下的稳定性进行了研究。结果表明,在单因素试验结果基础上,采用正交试验分析对主要酶解参数进行优化,得到双孢蘑菇废弃菇柄核酸酶解的最优参数为:pH5.0、酶底比3000 U/g、酶解温度50℃、酶解时间3 h,5’-核苷酸得率为1.60 g/100 g。通过稳定性试验发现,双孢蘑菇废弃菇柄中5’-核苷酸在pH值为中性偏酸(pH5~7)条件下比较稳定,受热温度越高5’-核苷酸越不稳定,在试验范围内为保留更多的5’-核苷酸,热处理时间以不超过1.5 h为宜。这一结果可为双孢蘑菇废弃菇柄5’-核苷酸的提取及其在烹调加工中的应用提供依据和指导。