牛樟树提取物促进樟芝深层发酵无性产孢及其应用

樟芝(Antrodia cinnamomea)是一种珍稀食药两用蕈菌,具有解酒保肝、抗病毒、抗肿瘤、调节免疫等多种生物活性。基于无性孢子接种的深层发酵技术是樟芝目前最高效、最普遍的人工培养方式,但樟芝深层发酵产孢量低,种子制备成本高,限制了樟芝深层发酵工业化生产效率及效益。为了提高樟芝深层发酵产孢效率,该文首先考察了牛樟树不同溶剂(甲醇、乙酸乙酯、石油醚及水)提取物对樟芝深层发酵无性产孢的影响,发现只有牛樟树水提物能显著促进樟芝无性产孢,且在最佳添加量(60μg/mL)下,可使樟芝产孢量较对照组提高58%左右,同时生物量提高26%左右,三萜产量提高35%左右,多糖产量提高270%左右(即产量是原来的3.7倍);随后,该文将添加牛樟树水提物促进产生的樟芝孢子接种发酵,发现其产孢性能及产胞内多糖性能均显著优于对照组(不添加牛樟树水提物发酵产生的樟芝孢子),其中最大产孢量及胞内多糖产量分别提高了28%及46%左右。该研究成果操作方便、成本低廉、效果显著,较具开发价值及应用前景。     

牛樟树水提物中促进樟芝无性产孢的效应物鉴定及其添加量优化

为明确牛樟树水提物（aqueous extract of Cinnamomum kanehirae Hay,CWE）中促进樟芝（Antrodia cinnamomea）深层发酵无性产孢的效应物。首先,采用醇沉法及不同有机溶剂分级萃取法对CWE进行分离,并以产孢量为检测指标,考察不同组分对樟芝无性产孢的影响。结果表明,30 μg/mL的CWE醇沉上清氯仿萃取物LFE和50?μg/mL的醇沉上清乙酸乙酯萃取物YZE对樟芝无性产孢有明显的促进效果,且LFE的促进效果明显优于YZE,表明效应物主要存在于LFE和YZE中。随后,采用液相色谱-质谱联用仪对CWE不同萃取组分进行成分分析,并结合不同组分对樟芝产孢的影响效果,确定主要效应物为赤藓糖醇。最后,考察赤藓糖醇（纯度98%）对樟芝深层发酵性能的影响,结果表明,赤藓糖醇对樟芝无性产孢有显著促进效果,且在最佳添加量（1.0?μg/mL）下,产孢量较对照组提高55.17%;同时,1.0 μg/mL赤藓糖醇显著促进樟芝深层发酵菌丝体生长及胞内多糖的合成,生物量和胞内多糖产量较对照组分别提高18.65%和260.13%,但对三萜的合成无显著影响。     

产胞外多糖乳酸菌的筛选及鉴定

目的:筛选出产胞外多糖能力强的乳酸菌菌株。方法:从实验室分离保藏的乳酸菌中挑选40株乳酸菌,以商业菌株鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus GG,LGG)为阳性对照菌株,采用菌落拉丝法和苯酚—硫酸法筛选出胞外多糖产量高的菌株,对其进行体外抗逆性、安全性和抗生素敏感性试验,并对最终得到的菌株进行表型特征分析和种属鉴定。结果:对40株乳酸菌进行初筛和复筛,得到了10株胞外多糖产量较多的乳酸菌;最终分离鉴定出4株高产EPS乳酸菌,产量均在600 mg/L以上,分别为2株副干酪乳杆菌(LZ9089、LZ9Y10)、1株干酪乳杆菌(LZ9183)和1株短乳杆菌(LZ9285)。结论:4株高产胞外多糖的菌株具有良好的益生特性,具有潜在的开发利用价值。     

乳酸菌混合发酵在红枣浆中的发酵特性研究

红枣浆中分别接种干酪乳杆菌和植物乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的复合菌进行发酵,测定红枣浆发酵过程中乳酸菌活菌数并比较发酵前后pH值、总滴定酸、总酚、总黄酮、多糖、抗坏血酸、有机酸、抗氧化能力和色泽等变化。结果表明,红枣浆营养丰富,上述3种不同乳酸菌混合均能在红枣浆中较好的生长,发酵24 h后,活菌数超过9.4 lg CFU/mL,植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌混合发酵的红枣浆色泽与未发酵组更接近。在总酚、总黄酮、多糖含量和抗氧化活性等方面,植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌混合发酵也优于其余2个发酵组。综上所述,红枣浆应以植物乳杆菌与鼠李糖乳杆菌混合发酵为宜。     

宁夏自然发酵泡菜中乳酸菌的分离鉴定及其在枸杞汁发酵中的应用

以宁夏银川市采集的家庭自制的3份发酵泡菜制品为材料,从中筛选产酸量较高的乳酸菌,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学方法对其进行鉴定,并对其耐酸、耐胆盐及发酵性能进行测定,筛选性能优良的乳酸菌,最后将其应用到发酵枸杞汁中。结果表明,筛选得到5株产酸量较高的乳酸菌,经鉴定分别为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum NXU_19010）、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus NXU_19023）、戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus NXU_19006）、瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus NXU_19022）和副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei NXU_19004）。其中菌株瑞士乳杆菌NXU_19022的耐酸、耐胆盐及生长性能较好,在6 h左右优先进入生长对数期,其在pH为2时的存活率约为92%,在牛胆盐含量百分比为0.9%时的存活率约为18%。NXU_19022发酵后使枸杞汁中多糖含量提高约29%,多酚含量约为原来的91%,感官评分最高。能显著提高自由基清除率和改善发酵枸杞汁的风味品质。采用非靶向代谢组学对NXU_19022发酵前后枸杞汁的挥发性成分进行分析,其中显著性差异代谢产物有20种,脂类物质含量上调,呈香味及甜味物质含量上调。表明该菌株具有良好的发酵特性,可进一步开发利用作为发酵产品的生产菌株。     

乳酸菌在豆乳中的生长特性及其与酵母菌联合发酵作用

本研究通过分析植物乳杆菌45、植物乳杆菌571、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌以及联合增香酵母PL09发酵豆乳过程中的酸度、活菌数、电泳图、胞外多糖含量、黏度等的变化,研究不同乳酸菌在豆乳中的生长特性及乳酸菌和酵母菌联合发酵豆乳时的特性。结果表明:植物乳杆菌45和植物乳杆菌571单独发酵豆乳8 h后pH分别达到4.43和4.42,活菌数分别达到3.11×108和2.78×108 CFU/mL,并且总糖含量降低较快;鼠李糖乳杆菌和干酪乳杆菌能够在豆乳中发酵分别产生胞外多糖180.82和174.45 μg/mL;乳酸菌和增香酵母PL09联合用于发酵豆乳时,增香酵母PL09能够促进乳酸菌在豆乳中的产酸能力,并且提高活菌数及产品的黏度,为开发乳酸菌和酵母菌的联合发酵豆乳提供指导。     

南瓜汁发酵优良乳酸菌的筛选与鉴定

为了获得具有优良发酵特性的乳酸菌进行南瓜汁发酵,从不同品牌酸奶及泡菜浓浆中,通过MRS培养基利用稀释涂布平板法进行菌种分离,初步得到乳酸菌9株。通过对得到的菌株进行产酸能力、耐酸及耐胆盐能力测定筛选出St1、St3、St5、St8 4株乳酸杆菌。将筛选出的菌株接种于南瓜汁中发酵,得到的发酵液酸度适中、乳酸菌生长良好。因此,确定这4株菌作为后续发酵菌株。对优选的菌株进行生理生化及分子生物学鉴定,结果表明,这4株乳酸菌分别为:干酪乳杆菌、植物乳杆菌、植物乳杆菌植物亚种及鼠李糖乳杆菌。     

雪莲果汁的乳酸菌发酵特性的研究

以鲜榨并经灭菌的雪莲果汁为原料,分别接入4种不同的乳酸菌(干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌)进行发酵,比较发酵过程中乳酸菌活菌数、pH、可滴定酸、可溶性固形物、黏度、多糖、糖组分、褐变以及感官等变化。结果表明,4种乳酸菌均能在雪莲果汁中很好地生长,发酵36 h,活菌数达到8.0 lg cfu/mL以上;其中鼠李糖乳杆菌在发酵48 h的活菌数达到了8.4 lg cfu/mL,且产酸量略高于其他3种菌,pH较其他3种菌降得更低;发酵过程中葡萄糖含量明显下降,果糖、蔗糖和低聚糖没有明显的变化,多糖含量和黏度总体下降。此外,在感官评价方面,鼠李糖乳杆菌也优于其他乳酸菌种。综上所述,雪莲果汁以鼠李糖乳杆菌发酵为宜。     

不同益生菌发酵剂对复合果蔬汁品质的影响

以沙棘、胡萝卜和黑枣为原料制备复合果蔬汁,分别接种植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及其组合（1∶1,体积比）进行发酵,比较复合果蔬汁发酵过程中乳酸菌总数、pH值、总酸、可溶性蛋白、还原糖、有机酸、总黄酮、总多酚和体外抗氧化活性等指标的变化。结果表明,植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及其组合发酵复合果蔬汁中还原糖含量无显著差异。相比直接接种植物乳杆菌或鼠李糖乳杆菌单一菌种发酵复合果蔬汁,植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌耦合发酵可显著增加乳酸菌的菌落总数（P<0.05）,提高总酸、总黄酮、总多酚、乙酸和乳酸等物质的含量（P<0.05）,增加体外抗氧化活性（P<0.05）。     

母乳婴儿源植物乳杆菌BF_15体外抗氧化活性及缓解DSS诱导小鼠结肠氧化损伤的研究

以鼠李糖乳杆菌GG(LGG)为对照菌株,研究了自行分离鉴定的母乳婴儿源益生菌植物乳杆菌BF_15的体外抗氧化活性、安全性与缓解DSS诱导小鼠结肠氧化损伤的症状.结果表明:试验菌株植物乳杆菌BF_15能够耐受高浓度的H2O2(3.5 mmol/L).发酵上清液中,菌株BF_15对DPPH的清除能力低于对照菌株LGG(P<...     

真菌多糖对鼠李糖乳杆菌体外增殖的研究

通过液体发酵提取曲霉和云芝胞内胞外多糖,脱蛋白,制成一定浓度溶液.选用MRS培养基,采取试管法,试验曲霉和云芝多糖对鼠李糖乳杆菌增殖的影响,并将其应用于鼠李糖乳杆菌发酵乳的研究中.结果表明,0.5%(m/v)、1%(m/v)的曲霉多糖和云芝多糖对鼠李糖乳杆菌体外增殖均有极显著的效果(P＜0.05).不同浓度相比,2%(m/v)的曲霉多糖和1%(m/v)的云芝多糖更能提高鼠李糖乳杆菌的活性,缩短凝乳时间.初步显示,曲霉多糖和云芝多糖中含促生长因子.     

两种乳杆菌协同发酵牛骨粉促钙转化的工艺研究

以牛骨为钙源,利用嗜酸乳杆菌与鼠李糖乳杆菌的共生作用发酵牛骨粉,提高骨钙转化率。采用单因素试验确定两种益生菌协同发酵牛骨粉的最适比例、发酵时间、骨粉浓度、葡萄糖添加量。采用响应面试验设计,以钙转化率为特征性指标,优化两种益生菌协同发酵牛骨粉的工艺条件。结果表明：两种益生菌具有共生作用,均能将牛骨粉中结合态的钙转变为游离态。发酵时间与骨粉浓度是影响钙转化率的主要因素。两种益生菌协同发酵牛骨粉的最适发酵条件为菌种比例4.67:1(m/m)、发酵时间69.96h、骨粉浓度4.45%、葡萄糖添加量12.26%,钙转化率达32.21%。     

婴儿源鼠李糖乳杆菌的筛选及其促肠道类器官生长的研究

本研究以分离得到的5株来源于一月龄婴儿的鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）与2株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）作为实验菌,以鼠李糖乳杆菌GG（Lactobacillus rhamnosus GG,LGG）作为对照菌株,通过耐酸实验、耐胆盐实验、疏水性实验、自动聚集能力测定和细胞黏附等实验对这些菌株的消化道耐受性进行评价。进一步选择在耐受性实验中综合评价效果最好的鼠李糖乳杆菌SW-02与肠道类器官进行共培养,用倒置相差显微镜观察类器官形态、生长状况,计算出芽率,利用EdU染色评估类器官中细胞增殖情况,利用实时荧光定量PCR检测增殖标志基因Ki67、肠道干细胞标志物Lgr5和紧密连接蛋白Zo-1的mRNA水平,利用酶联免疫吸附试验测定粘蛋白MUC2含量。结果证实:与其他菌株相比,鼠李糖乳杆菌SW-02有较强的耐酸性;SW-02、SW-03和SW-X的耐胆盐能力相对较强;LGG、SW-01、SW-02、SW-04和TX-02对二甲苯的疏水性高;对于自动聚集能力,SW-01最强,SW-02次之;对HT-29细胞的黏附性实验显示,菌株SW-01、SW-02和SW-03具有较高的黏附能力;将SW-02与类器官共培养时,SW-02显著（P<0.05）提高了类器官的出芽率和出芽个数,促进类器官的生长;与对照组相比,SW-02组类器官的Ki67、Lgr5和Zo-1的mRNA水平均显著增加,MUC2分泌量显著增加（P<0.05）。综上,鼠李糖乳杆菌SW-02具有较好的消化道耐受性和促进肠道类器官生长的能力,可以作为今后开发具有益生性产品的潜在菌株。     

乳杆菌发酵对黑米多酚含量及组成的影响

以植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum 115,LP）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus 14,LA）、干酪乳杆菌（Lactobacillus casei GB,LC）、保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus 134,LB）、副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei 37,LPC）和鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus GG,LGG）为发酵菌种,研究乳杆菌发酵对黑米游离酚和结合酚的含量及组成的影响。结果表明,6株乳杆菌发酵均显著提高了黑米游离酚的含量,但不同乳杆菌发酵后提高的程度具有显著差异,其中提高最显著的是LB。不同乳杆菌发酵后黑米中9种游离态和结合态单体酚的含量变化存在显著差异,其中,6株乳杆菌发酵后黑米中游离态的香草酸和对羟基苯甲酸的含量均显著降低（P<0.05）,LP菌株除外游离态咖啡酸的含量均显著提高（P<0.05）,而6株乳杆菌发酵后结合态阿魏酸含量均显著降低（P<0.05）。该研究为黑米的高效利用和天然活性产品的开发提供参考。     

不同发酵方式对樟芝真菌多糖产量的影响研究

通过深层发酵法,对比研究了连续、分批、补料分批3种培养方式对樟芝真菌菌体,胞内外多糖产量的影响,研究表明,补料分批相对于连续培养,菌体最大产量提高5.51%,胞内多糖最大产量提高11.25%。胞外多糖最大产量提高21.70%,补料分批培养优于连续培养和分批培养。     

响应面法优化樟芝胞外多糖的发酵条件

为提高樟芝液态发酵胞外多糖产量,本实验对发酵条件进行优化,首先对11种氮源和5种碳源进行初选,然后在单因素实验的基础上,设计了Plackett-Burman实验,筛选出显著影响胞外多糖产量的因素,最后采用四因素三水平的响应面法优化胞外多糖的产量。优化得到最佳发酵条件为:葡萄糖60 g/L、酵母浸粉16 g/L、维生素B₁ 1 g/L、KH₂PO₄ 0.75 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.77 g/L、初始pH=5.0、装液量120 mL/500 mL、接种量18%、27 ℃、10 d、100 r/min。该条件下胞外多糖产量为1.23 g/L,较优化前提升了71%。优化后多糖产量有大幅提高,可为后续工业化应用提供参考。     

Cultivating conditions influence exopolysaccharide production by the edible Basidiomycete Antrodia cinnamomea in submerged culture

Antrodia cinnamomea is a medicinal fungus that has been used in Taiwan as a traditional medicine for the treatment of tumorigenic diseases. We prove that controlling the culturing conditions (i.e., temperature and pH) and modifying the composition of the medium (i.e., carbon, nitrogen, mineral sources and vitamins) can dramatically enhance the production of the exopolysaccharide of A. cinnamomea. We have found that the temperature, initial pH, and agitation time are all critical for exopolysaccharide production during the cultivation of A. cinnamomea in submerged cultures; our optimized conditions were 28 degrees C, pH 5.5, and 14 days, respectively. In addition, when optimizing the effects of additional nutrition, we found that 5% (v/v) glucose, 0.5% (v/v) calcium nitrate, 0.1% (v/v) ferrous sulfate, and 0.1% (v/v) nicotinic acid led to the greatest production of exopolysaccharides; the exopolysaccharide production, mycelial biomass and specific product yield reached 0.49 g/l, 2.60 g/l and 0.19 g/g, respectively. The results indicate that nutrients can be utilized to improve the production of exopolysaccharide and that good mycelial growth does not seem to be a determining factor for a high production yield of exopolysaccharide in A. cinnamomea.     

苹果皮提取物的多酚组成及益生活性

苹果皮是生产苹果酱、果汁和其他产品的副产品,为探究其益生活性,该研究首先利用φ=80%丙酮作为溶剂得到苹果皮提取物（Apple Peel Extract,APE）,并采用高效液相色谱法对提取物的多酚组分进行分析。再通过体外益生菌厌氧发酵,跟踪测定24 h期间的生物量、pH值和多酚组分的变化。苹果皮提取物一共鉴定到13种多酚类物质,主要组分为根皮苷515.54 mg/100 g、金丝桃苷530.06 mg/100 g和槲皮苷459.04 mg/100 g。与空白组相比,APE显著促进了长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌四种益生菌的增殖,其发酵液的pH值维持在3.66~4.00,降低了42.86%~47.71%。在发酵过程中,根皮苷分别被消耗了93.36%、89.21%、86.31%和0.41%。结果表明,苹果皮提取物拥有丰富的多酚单体组成,是一种潜在可利用的益生元,可以调节肠道益生菌生长及代谢,具有较高的益生活性。     

Removal of common Fusarium toxins in vitro by strains of Lactobacillus and Propionibacterium

This study was conducted to examine the ability of selected strains of Lactobacillus and Propionibacterium to remove common Fusarium toxins, trichothecenes, from liquid media. The trichothecenes studied were deoxynivalenol (DON), 3-acetyldeoxynivalenol (3-AcDON), nivalenol (NIV), fusarenon (FX), diacetoxyscirpenol (DAS), T-2 toxin (T-2) and HT-2 toxin (HT-2). The Lactobacillus rhamnosus strain GG (LGG), Lactobacillus rhamnosus strain LC-705 (LC-705) and Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii JS (PJS) were incubated in PBS buffer containing 20 µg toxin ml -1 for 1h at 37°C, and after centrifugation the concentration of the toxins was measured in the supernatant fraction. Both viable and heat-killed forms of LGG and PJS were more efficient than LC-705 in removing the toxins from the liquid media. LGG and PJS removed four of the seven tested toxins (the removal varying from 18 to 93%) and LC-705 two toxins (10-64%). Of the toxins, 3-AcDON was not removed by any of the bacteria; HT-2 was removed by the non-viable LGG and also slightly by non-viable LC-705; DAS was removed by all three bacteria tested. Binding is postulated as the possible mechanism of the removal, since no difference was observed between the ability of viable and heat-killed bacteria in removing the trichothecenes, and no degradation products of the toxins were detected by gas chromatography (GC)-mass spectrometry (MS) analysis. It is concluded that significant differences exist in the ability of the bacteria to bind trichothecenes in vitro.