Formation of tyramine byLactobacillus curvatus LTH 972

The effect of food-related environmental factors on the formation of tyramine byLactobacillus curvatus LTH 972 was investigated in liquid culture supplemented with tyrosine. The highest concentrations of tyramine (up to 201 mg/l) were formed at 30 °C, pH 5.2 and at a water activity (a_w) of 0.97. At lower temperatures and at higher pH- and a_w values the reaction slowed down but was still clearly detectable. Glucose, nitrate and nitrite had no effect at concentrations applied in sausage fermentations. The strain was able to form tyramine from tyrosine-containing di- and tripeptides in phosphate buffer. Therefore, in proteinaceous substrates an increased formation of tyramine cannot be excluded when ongoing proteolysis creates precursors, as is the case in the presence of proteolytic micro-organisms.

---

Die Bildung von Tyramin durchLactobacillus curvatus LTH 972

Zusammenfassung Der Einfluß von Lebensmittel kennzeichnenden ökologischen Faktoren auf die Bildung von Tyramin durchLactobacillus curvatus LTH 972 wurde in Flüssigkultur mit Tyrosinzusatz untersucht. Höchste Konzentrationen an Tyramin (bis zu 201 mg/l) wurden bei 30 °C, pH 5,2 und a_w 0,97 gebildet. Bei niedrigeren Temperaturen (15 °C) sowie höheren pH- und a_w-Werten wurde eine verlangsamte, aber dennoch deutliche Tyraminbildung beobachtet. Glucose, Nitrat und Nitrit hatten in Konzentrationen, wie sie bei der Rohwurstherstellung üblich sind, keinen Einfluß. Eine Tyraminbildung aus Di- und Tripeptiden mit Tyrosylresten wurde in Phosphatpuffer beobachtet. In proteinreichen Substraten ist daher eine verstärkte Tyraminbildung nicht auszuschließen, wenn bei ablaufender Proteolyse Präkursoren gebildet werden, wie es z. B. bei Anwesenheit proteolytischer Mikroorganismen möglich ist.

     

A screening method for the simultaneous determination of putrescine, cadaverine, histamine, spermidine and spermine in fish by means of high pressure liquid chromatography of their 5-dimethylaminonaphthalene-l-sulphonyl derivatives

Summary A simple and rapid method is described for the extraction, derivatization and subsequent determination by means of high pressure liquid chromatography of putrescine, cadaverine, histamine, spermidine and spermine as their 5-dimethylaminonaphthalene-1-sulphonyl derivatives.The amines are extracted from the fish material by an aqueous trichloroacetic acid solution and derivatized by means of 5-dimethylaminonaphthalene-1-sulphonylchloride (dansyl chloride). The reaction mixture is then injected on a RP-8 column using gradient elution to separate the amine derivatives. Use of the method results in a considerable saving with respect to both time and costs.

---

Eine Screening-Methode für die gleichzeitige Bestimmung von Putrescin, Cadaverin, Histamin, Spermidin und Spermin im Fisch mittels Hochdruck-Flüssigchromatographie ihrer 5-Dimethylaminonaphthalin-Sulfonyl-Derivate

Zusammenfassung Eine einfache und schnelle Methode für die Extraktion, Derivatisierung und Bestimmung von Putrescin, Cadaverin, Histamin, Spermidin und Spermin als 5-Dimethylaminonaphthalin-1-sulfonyl-Derivate mit Hilfe der Hochdruck-Flüssigchromatographie (HPLC).Die Amine werden mit einer wäßrigen Trichloressigsäure-Lösung aus dem Fisch extrahiert und mit Hilfe von 5-Dimethylaminonaphthalin-1-sulfonyl (Dansylchloride) derivatisiert. Die Reaktionsmischung wird auf eine RP-8-Säule injiziert und durch Gradientelution getrennt. Die beschriebene Methode bring einen beträchtlichen Zeitgewinn und eine Verringerung der Analysenkosten.

     

Automatische Vors?ulenderivatisierung mit o-Phthaldialdehyd (OPA) Eine neue RP-HPLC-Methode für die Bestimmung von biogenen Aminen in Lebensmitteln

Zusammenfassung Eine einfache, selektive und hochsensitive HPLC-Methode für die routinemäßige Bestimmung aller in Lebensmitteln relevanten biogenen Aminen wird beischrieben. Sie beruht auf einer raschen Extraktion der Amine mit 10%iger Trichloressigsäure und Extraktreinigung über einen Kationenaustauscher, Vorsäulenderivatisierung mit OPA/2-Mercaptoethanol und Trennung der OPA-Amin-Derivate auf einer RP-18-Säule mit anschließender Fluoreszenz-Detektion (Ex 345 nm, Em 440 nm). Die Optimierung verschiedener Einflußfaktoren wird diskutiert. Die Gesamtdauer einer Aufarbeitung mit anschließender HPLC-Bestimmung von 15 biogenen Aminen beträgt 70 min. Für Histamin, Tyramin, Putrescin, Cadaverin, Tryptamin und -Phenylethylamin, die in Lebensmitteln überwiegend vorkommen, liegen die Wiederfindungsraten über 95%. Die Nachweisgrenzen liegen je nach Amin bei 0,1–0,5 pMol/Injektion (20 l) und der Fluoreszenz-Meßbereich ist für 0,5–500 pmol linear (r >0,99). Die Anwendbarkeit und Wiederholbarkeit der Methode wird am Beispiel von Hartkäse, Rohwurst, Milch, Bier und Wein überprüft. Die Methode ist für alle getesteten Lebensmittel sehr gut geeignet.

---

Automated pre-column derivatisation with o-phthal-dialdehyde (OPA). A new RP-HPLC-method for the determination of biogenic amines in food

A simple, selective und highly sensitive HPLC method for the routine determination of the biogenic amines in food is presented. Sample preparation is based on a rapid amine extraction using 10% trichloroacetic acid and a cation exchange column for extract purification. For the RP-HPLC analysis OPA/2-mercaptoethanol is used for the pre-column derivatisation, followed by fluorescence detection (Ex 345 nm, Em 440 nm). The effects of several factors are discussed. A separation of 15 biogenic amines is achieved within 70 min. The recoveries for histamine, tyramine, putrescine, cadaverine, tryptamine and -phenyl-ethylamine are higher than 95%. The detection limits lie between 0.1–0.5 pMol/injection (20 l), depending on the amine and a good linearity is achieved in the range from 0.5–500 pMol (r>0.99). The method has been applied for the determination of biogenic amines in Swiss cheese, salami, milk, beer and wine, the repeatability is very good.

---

---

Herrn Prof. Dr. A. Montag zum 65. Geburtstag gewidmet     

Extraction and determination of biogenic amines in fermented sausages and other meat products using reversed-phase-HPLC

A convenient method is described for the analysis of biogenic amines (BA) by means of reversed-phase-HPLC. The method is characterized by multi-channel UV detection (diodearray), subsequent post-column derivatization with o-phthaldialdehyde and 3-mercaptopro-pionic acid, and fluorescence detection. For the analysis of meat products and especially fermented sausages an optimized perchloric acid extraction process was introduced to determine putrescine, cadaverine, histamine, tyramine and 2-phenylethylamine. BA recoveries from meat ranged between 96 and 113% with a detection limit for amines of 0.5 mg/kg.

---

Extraktion und Bestimmung von biogenen Aminen in Rohwürsten und anderen Fleischwaren mittels RP-HPLC

Zusammenfassung Eine Methode zur Analyse von biogenen Aminen (BA) mittels RP-HPLC wird beschrieben. Die Methode ist charakterisiert durch Mehrkanal-UV-Detektion (Diodenarray), anschließende Nachsäulen-derivatisierung mito-Phthaldialdehyd und 3-Mercapto-propionsäure und Fluorescenzdetektion. Zur Bestimmung von Putrescin, Cadaverin, Histamin, Tyramin und 2-Phenylethylamin wird ein optimierter Extraktionsprozeß unter Verwendung von Perchlorsäure vorgestellt. Die Ausbeuten der BA im Fleisch betragen zwischen 96 und 113% bei einer Nachweisgrenze von 0,5 mg/kg.

     

Specific detection and determination of azide in wine

Summary In view of false-positive results obtained with the azide-detection method based on complex-formation with ferric ions, a specific liquid-chromatographic azide determination was adapted for the analyses of wine. The samples are distilled free of alcohol under alkaline conditions and acidified, and a new distillate is collected. The distillate is buffered (pH 4.7) and treated with 3,5-dinitrobenzoylchloride and the derivative thus formed is detected and determined by HPLC.

---

Spezifischer Nachweis und Bestimmung von Azid in Wein

Zusammenfassung Die Detektion von Azid in Wein mit Hilfe der Komplexbildung mit Fe(III)-ionen kann zu falsch-positiven Ergebnissen führen. Aus diesem Grunde wurde eine beschriebene HPLC-Methode zur Bestimmung von Azid für die Analyse von Weinproben abgewandelt. Die Proben werden dabei in alkalischem Milieu durch Destillation vom Alkohol befreit, der Rückstand wird angesäuert und ein neues Destillat gesammelt. Davon wird ein Aliquot, nach Einstellen des pH-Wertes mittels Puffer (4,7), mit 3,5-Dinitrobenzoylchlorid versetzt und das gebildete Derivat flüssigchromatographisch bestimmt.

     

Differences in biogenic amine patterns in fish obtained from commercial sources

Summary Using a high-performance liquid chromatography method, biogenic amines (histamine, cadaverine, putrescine, tyramine, spermidine and spermine) were determined in 16 samples of salted, smoked and freshly frozen fish obtained from commercial sources. The data were processed using principal component analysis. The results indicate that this multivariate statistical method greatly assisted the assessement of the quality of fish samples, particularily in connection with liquid chromatography. Some preliminary suggestions concerning selection of the Chromatographic data are described.

---

Unterschiede im Gehalt an biogenen Aminen in Fisch aus dem Handel

Zusammenfassung Unter Anwendung der Hochleistungsflüssigchromatographie wurden die biogenen Amine (Histamin, Cadaverin, Putrescin, Tyramin, Spermidin und Spermin) in 16 Proben von gesalzenen, geräucherten und frisch gefrorenen Fischen aus dem Handel bestimmt. Die Daten wurden der Hauptkomponenten-Analyse unterworfen. Die Ergebnisse weisen darauf hin, daß die Multivarianz-Statistikmethoden zusammen mit der Flüssigchromatographie dem Analytiker hilft, die Qualität von Fisch zu erfassen. Einige vorläufige Hinweise, die die Auswahl der chromatographischen Daten betreffen, werden beschrieben.

     

High-performance-liquid-chromatographic determination of carbohydrates in soft drinks

Summary The sugar content of fourteen soft drinks amply consumed in Spain has been determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The method, fast and reliable requires a minimum of sample preparation. For the total sugar content, a comparison is made with the classical column chromatography.

---

Bestimmung von Kohlenhydraten in Erfrischungsgetränken durch Hochdruckflüssigkeitschromatographie

Zusammenfassung Der Zuckergehalt von vierzehn Erfrischungsgetränken, deren Verbrauch in Spanien sehr groß ist, wurde durch die Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) festgestellt. Diese schnelle und zuverlässige Methode erfordert ein Minimum an Vorbereitungen. Für den gesamten Zuckergehalt wird ein Vergleich mit der klassischen Säulenchromatographie durchgeführt.

     

Daily dietary copper intake in Belgium, using duplicate portion sampling

Daily dietary copper intake in Belgium has been evaluated by duplicate portion sampling, heating in a microwave oven and atomic absorption spectrometric determination of this element. The mean intake value (1.5±0.4 mg/day) is similar to levels found for most other countries, but is situated at the lower end of the recommended range for a safe and adequate daily dietary intake.

---

Die tägliche Kupfer-Aufnahme mit der Nahrung in Belgien, bestimmt aus doppelter Probenahme

Zusammenfassung Die tägliche Kupfer-Aufnahme mit der Nahrung in Belgien wurde durch doppelte Probenahme, Aufschluß im Mikrowellenofen und Atomabsorptionsspektrophotometrie bestimmt. Die mittlere Aufnahme war 1,5±0,4 mg je Tag. Sie ist vergleichbar zu anderen Ländern, liegt aber im unteren Bereich der Ernährungsempfehlungen.

     

Determination of thiabendazole residues in meat by HPLC using ultraviolet and fluorometric detection

Summary An HPLC method is described for the residue analysis of thiabendazole in meat. The recovery varies from 62 to 75%. Thiabendazole is extracted from the tissue using 3 mol HCl, eluted from the Extrelut-20 column with dichloromethane and then injected onto a C₁₈ column. The optimum conditions for detection are described using ultraviolet and fluorescence spectroscopy. The sensitivity is such that thiabendazole can be determined at a level of 5 g/kg meat. The absolute detection limit with fluorometry is 100 pg.

---

Rückstandsbestimmung von Thiabendazol in Fleisch mittels HPLC, ultravioletter und fluorimetrischer Detection

Zusammenfassung Die HPLC-Methode beschreibt die Rückstandsbestimmung von Thiabendazol in Fleisch. Die Wiederfindungsrate liegt zwischen 62 und 75%. Thiabendazol wird aus dem Fleisch mittels 3 mol HCl extrahiert, von der Extrelut-20-Säule mit Dichlormethan eluiert und dann in eine C₁₈-Säule eingespritzt. Die optimalen Detektionsbedingungen werden durch die Ultraviolett und die fluorimetrische Spektroskopie bestimmt. Die Empfindlichkeit ist so gut, daß Thiabendazol bis zu einer Grenze von 5 g/kg Fleisch bestimmt werden kann. Die absolute fluorimetrische Detektionsgrenze ist 100 pg.

     

Isolation and HPLC determination of amines in wine

Summary The isolation of the amines from wines for liquid chromatography was accomplished by either continuous extraction with Freon 11-methylene chloride or with butanol-methylene chloride. The former method gives high recoveries for high-molecular weight amines and the latter for low molecular weight amines. Amines were dansylated and detected with fluorescence and UV detectors. The methods were used to determine amine contents of wines from different countries. The identification of amines was based on UV spectra of dansylamides with a diode array detector.Molecular-connectivity indices, , to sixth order were correlated with the liquid-chromatographic retention parameters of the dansyl derivatives of the amines studied. Some amines containing oxygen had to be omitted before high correlations were obtained. The molecular-connectivity index method for predicting the structure of a given amine requires that the unknown amine is of the type studied in the present series.

---

Isolierung und HPLC-Bestimmung der Amine in Wein

Zusammenfassung Isolierung der Amine aus Wein für die Flüssigchromatographie wurde entweder durch kontinuierliche Extraktion mit Freon-11-Methylenchlorid oder durch Extraktion mit Butanol-Methylenchlorid durchgeführt. Die erste Methode gibt gute Ausbeuten für die höhermolekularen, die zweite für die niedermolekularen Amine. Die Amine wurden dansyliert und mit Fluorescenz- und UV-Detektoren nachgewiesen. Die Methoden wurden zur Bestimmung der Amingehalte in Weinen unterschiedlichen Ursprungs verwendet. Zur Identifizierung der Amine aus Weinproben dienten die mit einem Diodenreihendetektor aufgezeichneten UV-Spektraen der Dansylamide.Die molekularen Konnektivitätsindexe, , der sechsten Ordnung wurden mit den flüssigchromatographischen Retentionsparametern der Dansylderivate der untersuchten Amine korreliert. Um hohe Korrelationen zu erreichen, muten einige sauerstoffhaltige Amine unberücksichtigt bleiben. Um die Struktur eines Amins mit Hilfe des molekularen Konnektivitätsindexes vorauszusagen, wird vorausgesetzt, daß das unbekannte Amin von dem untersuchten Typ in der vorliegenden Reihe ist.

     

Antioxidative constituents ofRosmarinus officinalis andSalvia officinalis

Summary The strong antioxidative activity ofRosmarinus officinalis andSalvia officinalis is caused by phenolic diterpenes. Extracts of these herbs are used as additives to stabilize fat and fat-containing foodstuffs against oxidation. To determine the concentration of individual phenolic diterpenes in pure extracts and fats an HPLC method with electrochemical detection has been developed.

---

Antioxidativ wirksame Inhaltsstoffe ausRosmarinus officinalis undSalvia officinalis neben Tocochromanolen mittels HPLCI. Bestimmung von antioxidativ wirksamen phenolischen Diterpenen

Zusammenfassung Die hohe antioxidative Wirksamkeit vonRosmarinus officinalis undSalvia officinalis läßt sich auf phenolische Diterpene zurückführen. In Form von Extrakten können sie Fetten und fetthaltigen Lebensmitteln zum Schutz vor oxidativen Veränderungen zugesetzt werden. Um ihre Konzentration in Extrakten selbst sowie in Fetten zu bestimmen, wurde eine HPLC-Methode mit elektrochemischer Detektion entwickelt.

     

Determination of biogenic amines in leafy vegetables by amino acid analyser

An automated ion-exchange Chromatographic method is described for determination of biogenic amines in leafy vegetables using a cation-exchange resin column in potassium form and a three-buffer system. The following amines were separated and quantified for Chinese cabbage, endive, iceberg lettuce and radiocchio: putrescine, histamine, cadaverine, spermidine, agmatine, spermine, tyramine. Amines from vegetable samples were extracted with 10% trichloroacetic acid. The total concentration of these amines ranged from 14 to 20 g/g fresh weight. Spermidine was the major polyamine detected, present at concentrations of 7–15 g/g fresh weight.

---

Bestimmung biogener Amine in Blattgemüse mit dem Aminosäureanalysator

Zusammenfassung Es wird eine Methode zur Bestimmung biogener Amine in Blattgemüse mittels automatisierter Ionenaustausch-Chromatographie beschrieben. Die Trennung erfolgte auf einer K⁺-Kationenaustauschersäule mit Hilfe eines Drei-Puffer-Systems. In Chinakohl, Endivie, Eisbergsalat und Radicchio sind folgende Amine bestimmt worden: Putrescin, Histamin, Cadaverin, Spermidin, Agmatin, Spermin und Tyramin. Die Extraktion erfolgte mit 10% Trichloressigsäure. Die Gesamtkonzentration biogener Amine betrug 14–20 g/ g Frischsubstanz. Von den nachgewiesenen Polyaminen war Spermidin mit einer Konzentration von 7–15 g Frischsubstanz am stärksten vertreten.

     

A simple gas chromatography method for the determination of ethylcarbamate in spirits

Summary Ethylcarbamate is a toxic component of certain spirits. For its determination, the spirit is concentrated to one-fifth of its volume, extracted with ethylacetate and analysed by capillary gas chromatography (GC) with flame ionization detection (FID). The method saves time and material and has proved to be a reliable test in different laboratories. The ethylcarbamate concentrations in 170 samples of Swiss origin are presented. the mean values were 1.0 mg/l in cherry brandies, 1.5 mg/l in plum brandies and 0.4 mg/l in Williams pear brandies. Ethylcarbamate concentrations may increase during storage, especially under the influence of daylight.

---

Eine einfache gaschromatographische Methode zur Bestimmung von Ethylcarbamat in Spirituosen

Zusammenfassung Ethylcarbamat ist ein cancerogener Inhaltsstoff von gewissen Spirituosen. Zu dessen Bestimmung wird die Probe auf 1/5 ihres Volumens eingeengt, mit Ethylacetat extrahiert und durch Capillar-GC mit FID nachgewiesen. Die Methode ist zeitund materialsparend und hat sich bei einem Vergleich mit mehreren Laboratorien als zuverlässig erwiesen. Die Ethylcarbamatgehalte von 170 Spirituosenproben aus der Innerschweiz werden angegeben. Dabei liegen die Mittelwerte für Kirschwasser bei 1,0 mg/l, für Zwetschgen- und Pflümliwasser bei 1,5 mg/1 und für Williamsbranntweine bei 0,4 mg/1. Die Ethylcarbamatgehalte von Spirituosen können bei der Lagerung stark zunehmen, dies vor allem unter dem Einfluß von Tageslicht.

     

Bestimmung phenolischer Verbindungen in alkoholischen Getr?nken durch HPLC mit elektrochemischem Detektor

Zusammenfassung Eine Methode zur quantitativen Bestimmung phenolischer Abbauprodukte des Lignins in Weinbrand und Spirituosen wurde ausgearbeitet. Nach Verdünnung der Probe mit Eluens (1:5 bis 1:10) werden die phenolischen Verbindungen durch HPLC getrennt und mit einem elektrochemischen Detektor bei + 1,3 V angezeigt. Die Identifizierung der Verbindungen erfolgt durch Vergleich der k-Werte und der hydrodynamischen Voltammogramme der Probesubstanzen mit jenen der Standardlösung. Verschiedene handelsübliche Getränke wurden analysiert. Der Gehalt an phenolischen Verbindungen varüert zwischen 0,15 und 7,7 mg/l. Die Nachweisgrenzen liegen zwischen 0,3 und 0,9 ng.

---

Determination of phenolic compounds in distilled alcoholic beverages by HPLC with electrochemical detection

Summary A method has been developed for the quantitative determination of phenolic lignin degradation products in alcoholic distillates. After diluting the samples with the eluent (1:5–1:10, v/v) the phenolic compounds are separated by high-pressure liquid. chromatography and detected by an electrochemical detector at + 1.3 V. To identify the compounds the k-values and the hydrodynamic voltammograms of the samples are compared with those of the standard solution. Several distilled alcoholic beverages were analysed. The content of phenolic compounds was found to vary between 0.15 and 7.7 mg/1. The detection limits were 0.3–0.9 ng.

     

Neues Schnellverfahren zur Ermittelung der Eierzahl in Teigwaren

Zusammenfassung In der vorliegenden Arbeit wird eine neue Arbeitsmethode zur schnellen Bestimmung des Eigehaltes von Weizenteigwaren angegeben. Die Methode ist eine Fällungsmethode, welche auf der Ausfällung des Eidotterphosphatides aus dem alkoholischen Teigwarenextrakt als Eisenmolybdänkomplexverbindung beruht, wobei die langwierige Verdampfung und Veraschung der Extrakte entbehrlich wird und die Methode hierdurch, insbesondere in Form des Zentrifugierverfahrens, eine schnelle Ermittelung der je Mehlgewichtseinheit angewendeten Eierzahl in der Teigware zuläßt.Die eifreien Teigwaren kennzeichnen sich sofort bei der Vermischung mit dem Reagens am Ausbleiben der Fällung, was mit der Nichtfällbarkeit des Weizenphosphatides durch das Reagens gedeutet wird. An Hand von selbstbereiteten Typenteigwaren mit und ohne Eizusatz sowie an Typenteigwaren, mit Eiweiß oder Eidotter allein bereitet, werden diese Verhältnisse zahlenmäßig näher beleuchtet.Zum Schluß werden die vorläufigen Ergebnisse von Versuchsreihen mit reinen Eierlecithinlösungen angeführt, wobei als bestes Ergebnis zunächst die 80%-ige Fällbarkeit des reinen Eierlecithins durch das Reagens ermittelt wird.bedeutet mit Abbildungen.     

Einfaches und spezifisches HPLC-Verfahren zur Bestimmung von Cyclamat in fruchtsafthaltigen Getr?nken nach Derivatisierung zu N,N-Dichlorcyclohexylamin

Zusammenfassung Es wird eine HPLC-Methode zur Bestimmung von Cyclamat in fruchtsafthaltigen Getränken vorgestellt, welche auf der Umsetzung von Cyclamat zuN,N-Dichlorcyclohexylamin beruht. Die HPLC-Analyse erfolgt an einer RP 18-Trennsäule mit Hilfe der Detektion bei 314 nm. Es lassen sich Gehalte von 10 bis 800 mg/1 mit einer relativen Standardabweichung von weniger als 2% analysieren. Bei verschiedenen fruchtsafthaltigen Getränken lag die Wiederfmdungsrate für Cyclamat bei 96 bis 99%. Die Einfachheit und Schnelligkeit (Gesamtanalysenzeit ca. 30 min) lassen die Methode insbesondere für die Routineanalytik geeignet erscheinen. Daneben wird eine Methode zur Isolierung von Cyclamat mittels Festphasenextraktion an Amino-Anionenaustauscher beschrieben.

---

Simple and specific HPLC procedure for determination of cyclamate in fruit juice beverages after conversion to N,N-dichlorcyclohexylamine

Summary A high pressure liquid chromatography (HPLC) procedure for the determination of cyclamate in fruit juice beverages is described, which depends on the conversion of cyclamate toN,N-dichlorcyclohexylamine. For HPLC analysis an RP 18 separation system with detection at 314 nm is used. Contents of 10 to 800 mg/L can be detected in about 30 min with a relative standard deviation of less than 2%. Recovery of cyclamate from several fruit juice beverages amounts to 96–99%. This simple and rapid method seems to be very well suited for routine analysis. A method for solid-phase extraction of cyclamate with amino-anion-exchange columns is also presented.