海藻糖合成酶活性测定方法的研究

目的 研究一种测定海藻糖合成酶活性的方法.方法 用薄层色谱法定性分析海藻糖合成酶反应体系中的海藻糖,用α-葡糖苷酶将麦芽糖水解为葡萄糖,DNS法测定还原糖,差值法计算海藻糖合成酶活性.结果 获得了海藻糖合成酶活性的定性、定量分析方法,成功测定出粗酶液中海藻糖合成酶的活性.结论 此方法设备简单,易于同时测定较多的样品,适用于实验室选育海藻糖合成酶产生菌时大量样品的测定.     

海藻糖合成酶活性测定方法的研究

目的 研究一种测定海藻糖合成酶活性的方法.方法 用薄层色谱法定性分析海藻糖合成酶反应体系中的海藻糖,用α-葡糖苷酶将麦芽糖水解为葡萄糖,DNS法测定还原糖,差值法计算海藻糖合成酶活性.结果 获得了海藻糖合成酶活性的定性、定量分析方法,成功测定出粗酶液中海藻糖合成酶的活性.结论 此方法设备简单,易于同时测定较多的样品,适用于实验室选育海藻糖合成酶产生菌时大量样品的测定.     

透性化细胞海藻糖合酶特性的研究

海藻糖是一种新型食品添加剂，目前多以微生物酶法生产。海藻糖合酶是近年来新发现的一种海藻糖合成酶。本文研究了经渗透细胞技术处理得到的透性化细胞海藻糖合酶的酶学特性。结果表明，该细胞酶的反应最适温度为35℃，最适pH7.4,Mg^2 及K^ 对该细胞酶有明显激活作用，Zn^2 ,Mn^2 及Cu^2 则可强烈地抑制酶活力。该酶对底物特异性极强，能特异性地将麦芽糖转化为海藻糖。     

毕赤酵母展示海藻糖合成酶及其性质研究

利用毕赤酵母表面展示天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)海藻糖合成酶(Trehalose synthesase,TS,EC 5.4.99.16)并研究其酶学性质。人工合成酵母内源壁蛋白(GPI-modified wall proteins,GCW14)与天蓝色链霉菌海藻糖合成酶组合DNA(GCW14-TS),将其亚克隆到pPIC9k载体后转化到GS115酵母菌中,成功构建了pPIC9k-GCW14-TS载体,并将TS展示在毕赤酵母GS115表面,然后对其酶学性质进行研究。发现其在30~45℃温度范围都能发挥作用,最适pH为8.5,K~+、Mg~(2+)等金属离子对其有促进作用且重复使用5次后仍然可以保持75%以上的酶活性。该基因工程菌具有海藻糖合成酶固定化酶性质,可用于将麦芽糖转化为海藻糖的产业化生产。     

海藻糖合成酶诱导条件优化研究

采用乳糖诱导大肠杆菌产海藻糖合成酶,用以转化麦芽糖为海藻糖,利用高效液相色谱法测定海藻糖的转化率。采用单因素试验和正交试验研究乳糖诱导时的pH、温度、转速和持续时间四个因素对海藻糖转化率的影响,寻找大肠杆菌产海藻糖合成酶转化海藻糖的最优条件组合,为海藻糖工业化生产提供参考依据。结果表明,诱导温度和持续时间对海藻糖转化率的影响较大,海藻糖合成酶最佳诱导条件为:pH 7.4、温度26℃、转速500 r/min、诱导时间10 h。在最佳条件下,海藻糖的转化率可达69.45%。     

海藻糖合成酶的分离纯化及部分酶学性质研究

食尼古丁节杆菌JNU-1（Arthrobacter nicotinovorus JNU-1）菌株所产胞内海藻糖合成酶，该酶能转化麦芽糖合成海藻糖，将食尼古丁节杆菌JNU-1进行大量的培养，富集发酵菌丝体，经超声破碎、浸提、离心后获得粗酶液，粗酶液经硫酸铵分级沉淀后，收集相应的活性部分，用葡聚糖凝胶进一步纯化，通过电泳来测定海藻糖合成酶的纯度和分子量。     

大肠杆菌产海藻糖合成酶发酵条件优化

采用单因素试验和正交试验,研究海藻糖合成酶发酵过程中加诱导剂时菌浓OD600 nm、诱导温度、诱导时间、海藻糖合成酶转化海藻糖时间4个因素对转化率的影响,确定大肠杆菌产海藻糖合成酶转化海藻糖的最优条件组合。结果表明,转化时间和诱导温度对转化率的影响较大,在大肠杆菌生长到菌浓OD600 nm值为0.8时加诱导剂,诱导温度26 ℃保持8 h,在转化过程中反应14 h为最佳搭配。在此最佳条件下,海藻糖的转化率可达69.29%。     

用一种新的热稳定性酶生产海藻糖的方法

从Ｓ ｕｌｆｏｌｂｕｓ ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ ＡＴＣＣ３３９０９中提取的麦芽寡糖海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶这两种热稳定性酶从淀粉中生产海藻糖，讨论了从Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｍｙｌｏｄｅｒａｍｏｓａ提取出来的脱支酶的最佳反应条件，最适ＰＨ为５．５，最适温度为５５－５６℃，在糖化过程中加入ＣＧＴａｓｅ酶到反应混合筘，导致了海糖的增加和麦芽糖及麦芽三糖的下降。异淀粉酶作为脱支酶比普     

嗜热放线菌海藻糖合成酶在地衣芽孢杆菌中的异源表达

海藻糖合成酶可将麦芽糖异构化为海藻糖,是海藻糖酶法生物转化的中心酶制剂。为了实现海藻糖合成酶在食品安全型表达宿主中高效生产,进而应用于食品级海藻糖的酶法合成,构建了革兰氏阳性菌重组表达质粒并转化入地衣芽孢杆菌。重组质粒携带了来自于嗜热放线菌Thermomonospora curvata海藻糖合成酶的编码基因,在地衣芽孢杆菌木糖异构酶启动子及其阻遏蛋白的介导下表达,胞内海藻糖合成酶发酵活力为12.1 U/m L。考察了不同培养条件对重组菌生长和产酶的影响,结果显示质量分数4%的麦芽糊精和质量分数0.4%的豆饼粉分别为产酶适宜的碳源和氮源;菌体培养10 h后加入终质量浓度为1 g/d L的诱导剂,于37℃诱导12 h后重组菌产酶最高达到23.7 U/m L。     

密码子优化提高海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达水平

目的优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平。方法基于大肠杆菌基因组密码子偏好数据表对tres基因进行密码子优化得基因tres1。基因工程法构建分别含tres及tres1基因的表达载体pET-26b(+)-tres和pET-26b(+)-tres1,CaCl2法转入大肠杆菌BL21(DE3)获得表达海藻糖合成酶的大肠杆菌基因工程菌株,采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对摇瓶发酵粗酶液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析及酶活性测定以确定表达水平。结果 1707 bp海藻糖合成酶tres基因共优化碱基序列268 bp,优化后序列的GC含量由65.8%降低至54.4%,密码子适应指数(CAI)由0.37提升至0.97,SDS-PAGE及酶活性分析表明,含pet-26b(+)-tres1表达载体的大肠杆菌基因工程菌株海藻糖合成酶蛋白表达量高,酶活性比含pet-26b(+)-tres工程菌提高60.3%以上。结论密码子优化可有效提高海藻糖合成酶TreS蛋白在大肠杆菌中的表达,为海藻糖合成酶的异源高效表达提供了重要参考。     

海藻糖的特性及其应用

海藻糖是由两个葡萄糖分子以α,α,1,1-糖苷键构成的非还原性糖,自身性质非常稳定,具有独特的生物学特性、对生物抗脱水的保护作用、抗冷冻保护作用和抗高渗保护作用,同时赋予了防止淀粉老化、防止蛋白质变性、抑制脂类物质酸败、抑制鱼腥味的生成、矫正味道和矫正气味作用、抑制大米的米糠臭、保鲜、稳定物料中的超氧化物歧化酶、防蛀牙和补充能源等功能特性.而自然界中如蔗糖、葡萄糖等其它糖类,均不具备对多种生物活性物质具有神奇的保护作用这一功能;这一独特的功能特性,使得海藻糖除了可以作为蛋白质药物、酶、疫苗和其他生物制品的优良活性保护剂以外,还是保持细胞活性、保湿类化妆品的重要成分,更可作为防止食品劣化、保持食品新鲜风味、提升食品品质的独特食品配料,拓展了海藻糖作为天然食用甜味糖的功能.     

Water interplay in trehalose polymorphism

An investigation on the transformation paths of trehalose polymorphs and the interplay of water molecules is presented with the aim of underlining the role of trehalose structural and dynamic functions in the “protection” of biosystems and living organisms. To this end, physico-chemical studies have been carried out on water–trehalose interactions and on the structure and stability of the several forms, from the solution to the solid state (either amorphous or crystalline). In this paper the relevant results are critically presented and discussed with particular reference to most recent findings. The dehydration process performed under different confined conditions and controlled scan rates provides a dynamic phase diagram as a function of the time-scales of trehalose transformations and water effusion. A careful analysis of these data and of the stability of the glassy state in the presence of water evidences the reversibility of some trehalose transitions under the same conditions of natural processes of slow heating and controlled evaporation rate. This observation points at the hypothesis of the occurrence of these reversible paths at the basis of the bioprotection process.     

海藻糖的应用研究进展

隐生生物 (crypohiddenlife)现象广泛存在于生物界 ,这类生物在干燥时脱水 ,以极低或停滞的新陈代谢形式处在一种保存状态 ,当环境允许再水化时它们可立即复活。如一些沙漠植物 ,它能经受脱水和再水化的循环 ,而不破坏其组织中的脂质类、蛋白质类、糖类及核酸等生命物质 ;脱水表现为无生命活动 ,一旦能获得水份 ,几小时内即可复活。目前对这种隐生现象的分子机制还不清楚 ,但有一点可以肯定 :这类生物在干燥时其组织中的海藻糖 (trehalose)含量都很高。提示海藻糖可能与隐生现象密切相关 ;干燥时 ,海藻糖起着保护生物组织、细胞与生命物质不…     

海藻糖的提取方法研究进展

综述了海藻糖的功效、提取方法以及应用前景、主要介绍海藻糖的生物制备包括直接提取法、酶促转化法和微生物发酵法等方法。     

Adsorption isotherm of amorphous trehalose

The water adsorption isotherm at 25°C of freeze-dried amorphous trehalose and trehalose with the addition of maltodextrin (MD) DE 10.9 was obtained. Moisture uptake as a function of time at various relative humidities (RH) was also measured. At low relative humidities (RH) amorphous trehalose adsorbs moisture but at 44% RH and above the isotherm exhibits a plateau indicating crystallisation (formation of the dihydrate) of amorphous trehalose and this was reflected on the shape of the isotherm. Trehalose crystallisation was delayed in the system containing maltodextrin (50: 50) as compared with pure trehalose. © 1997 SCI.     

HPLC法检测海藻糖的研究

建立了一种利用高效液相色谱法检测葡萄糖、麦芽糖和海藻糖混合溶液中海藻糖的方法。采用Xbridge-NH2色谱柱,流动相为乙腈/水=4∶1加0.1%的氨水,流速1.0 mL/min,柱温35℃,该条件下葡萄糖、麦芽糖、海藻糖能完全分开,葡萄糖、麦芽糖、海藻糖的质量浓度在0.1-4.0g/100mL范围与峰面积呈良好线性关系,相关系数R2为0.9998-0.9999,相对标准偏差为1.60%,回收率为98.2%-99.4%。     

海藻糖产生菌株的诱变选育

以海藻糖产生菌SP菌为出发菌株，经过紫外线诱变，选育出性能优良菌株SP4，其生产性能比出发菌株提高了7倍，而且能够保持一定的稳定性。     

液体培养灰树花菌丝生产海藻糖

探索了灰树花(Grifola frondosa)GIM5.164深层培养中海藻糖积累的规律.结果表明,以培养基组分玉米粉4% 麸皮浸汁2% 葡萄糖1%,pH3.5及转速为130 r/min为适宜灰树花积累海藻糖的培养条件.海藻糖积累于快速生长期之后的稳定期,培养时间到第11天时,菌体内的海藻糖含量最高,达到1.20mg/mL,百分含量为11.48%;将已培养11d的灰树花菌体用37.5℃处理6 h后可使海藻糖的含量显著增加,达到1.59 mg/mL,百分含量为15.20%;在发酵培养基中添加0.1%～0.2%的花生油作为消泡剂可提高菌体的海藻糖含量;产物海藻糖为浅黄色的晶体.     

海藻糖在冷冻猪肉中的应用研究

海藻糖是一种由两分子葡萄糖以α,α-1,1键缩合而成的非还原性二糖,具有独特的抗冷冻保护作用、抗脱水保护作用等生物学功能.通过海藻糖在冷冻肉中的应用研究,结果表明:海藻糖能降低冷冻肉的液汁流失率,改善冷冻肉的品质.     

海藻糖对耐盐酵母的影响

通过均匀设计建立了海藻糖含量测定更为精确的葸酮比色法，通过测定酿酒酵母单倍体菌株T-27（α，trp^-，ura^-）和T-27-12（α，trp^-，ura^-）在含25％NaCl冲击条件下海藻糖的含量变化。结果表明：耐盐菌株T-27-12较其亲株T-27有更强的海藻糖积累能力，进一步证实了较强的海藻糖积累能力是T-27-12较T-27具有较强耐盐能力的一个重要原因。