植物源抗病毒剂VFB-1防治烟草花叶病毒病研究

以植物源抗病毒剂VFB为基础,经配方改造和工艺改进,优化出了植物源抗病毒剂VFB-1。为探究VFB-1对烟草花叶病的防治作用,本研究采用半叶枯斑法测定了VFB-1对TMV的体外钝化、初侵染和复制增殖抑制活性;采用盆栽法和田间小区试验评价了VFB-1对烟草花叶病毒病的预防及治疗效果。结果表明,VFB-1对烟草花叶病毒(TMV)具有明显的体外钝化作用,钝化30min后,抑制率达82.77%;对TMV的初侵染和复制增殖具有较好的抑制作用,24 h的抑制率分别达到69.80%和54.07%?盆栽药效试验中,VFB-1100倍稀释液的预防效果为70.23%,治疗效果为35.70%;田间药效试验表明,VFB-1对烟草花叶病毒病有较好的预防和治疗作用,其200倍稀释液药后21d的预防效果仍为40%以上,400倍液的预防效果明显高于VFB,且与病毒A(20%吗啉胍·乙铜WP)相当;其200倍液14d的治疗效果显著高于VFB(200倍稀释液)和病毒A(400倍稀释液)处理。可见,植物源抗病毒剂VFB-1对TMV具有良好的预防和治疗效果,开发前景良好?     

两株根际促生细菌对TMV的生防作用研究

烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）是危害烟草的主要病毒之一,其寄主范围广、侵染力和抗逆性强,尚无有效的抗病毒药剂。利用植物根际促生细菌（PGPR）对寄主的促生以及对病毒的钝化作用进行病毒病早期预防,是控制TMV的有效途径。本文对筛选到的两株PGPR菌株Sa和Sk进行了菌株鉴定及促生和防病作用研究。结果表明:Sa为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）、Sk为假单胞菌属（Pseudomonas sp.）。在霍格兰氏营养液中添加Sa、Sk的发酵上清液,能显著促进烟苗的根系发育和茎叶生长;“半叶法”试验结果显示Sa、Sk的发酵上清液能在体外钝化TMV,并且Sa的粗蛋白溶液、去蛋白上清、蛋白失活后的粗蛋白溶液对TMV的抑制效果分别为85.2%、83.1%、36.2%,说明Sa的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要包括蛋白和非蛋白两类;Sk的粗蛋白溶液、去蛋白上清抑制TMV的效果分别为88.0%、0%,说明Sk的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要为蛋白类。利用TMV30B侵染性克隆,观察到Sa、Sk发酵上清液能显著抑制病毒的初侵染。室内栽培烟株喷施Sa、Sk发酵上清后,对TMV的防效分别为27.71%和18.55%。芽孢杆菌Sa生防效果好于Sk,具备抗病毒剂的开发潜力。      

抑制烟草花叶病毒活性植物的筛选

本研究采用半叶枯斑法和烟草病害分级标准,对抗TMV的活性植物进行筛选,系统测定了艾蒿、板蓝根、柴胡等24种植物的粗提取物对烟草花叶病毒（TMV）的抑制效果,包括体外钝化TMV作用、抑制TMV初侵染;并采用盆栽法,研究植物粗提取物对烟草花叶病的保护和治疗作用等。试验表明,银杏、栀子、商陆、赤芍等植物粗提取物的综合防治效果较好,有进一步开发和利用的前景。     

壳寡糖对烟草TMV病毒的诱导抗性研究

以壳寡糖诱导烟草枯斑寄主后，调查了病班的抑制率，同时研究了壳寡糖单独处理和以病毒粒子侵染诱导的病程相关蛋白的差异，壳寡糖处理对TMV侵染有保护作用，施用壳寡糖后7d，以浓度为50ug/mL和75ug/mL对枯斑的抑制效果为好，壳寡糖在活体外对TMV粒子有钝化作用，单独施用壳寡糖可以诱导烟草产生6条耐碱性的PR，其中1条区别于TMV侵染诱导的PR。     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒（TMV）活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用,结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%.选用易感TMV烟草品种K326为试验材料,测定Tpb55对TMV控病作用,结果表明,先接种Tpb55菌液再接种TMV的烟株,发病程度明显低于接种TMV再接种Tpb55菌液的烟株;不论在烟株接种TMV前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种病毒烟株相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高.从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性米抑制TMV侵染.     

植物源抗烟草花叶病毒天然产物研究进展

烟草普通花叶病毒病(TMV)是严重影响烟叶产量和质量的一种病害。综述了植物源活性天然产物抗烟草花叶病毒的研究、应用现状及作用机理。抗烟草花叶病毒的植物源天然产物主要包括大分子和小分子两大类,它们抗植物病毒的机理主要包括抑制病毒侵染、干扰和抑制病毒增殖、诱导植物抗病性反应等。讨论了植物源天然产物抗植物病毒开发和利用研究中面临的困境与挑战。     

心叶烟中一类抗烟草普通花叶病毒病活性生物碱

烟草普通花叶病毒(TMV)是烟草主要病害之一,利用色谱分离、纯化技术,采用活性追踪方法,对采自于云南省玉溪市的心叶烟(Nicotiana glutinosa L.)中的化学成分进行系统研究,从中分离得到了12个具有抗TMV活性的生物碱类化合物,其中3个为新化合物(1~3)[(S)-Nkolbisine-β-D-glucoside,(R)-Nkolbisine-β-D-glucoside,Lepabisine A],9个已知化合物(4~12)均为该属植物中首次分离得到。生物活性测定结果表明,该类生物碱能够钝化烟草普通花叶病毒并抑制其增殖。新化合物1对病毒抑制作用强于对照药物宁南霉素。该研究首次从烟草中发现具有抗TMV活性的一类生物碱类化合物,为进一步系统研究烟草内源性抗烟草花叶病毒病物质提供了科学依据。     

巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium，Bm）的抑菌活性及定殖规律分析

为进一步明确巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium,Bm）菌株对烟草主要病害的抑制效果,利用半叶法、对峙平板法和抑菌圈法研究了Bm对烟草花叶病毒（TMV）、黑胫病菌和青枯病菌的抑制作用;利用抗生素诱导筛选抗药性标记菌株,研究其在烟草根际土壤和叶面上的定殖规律;同时制备了生防菌发酵液制剂,测定其田间防治效果。结果表明:Bm发酵液和发酵上清液对烟草花叶病毒的抑制率分别为88.4%和74.3%;Bm无菌发酵上清液对黑胫病菌菌丝生长的抑制率为67.5%,对青枯病菌的抑菌圈直径为10.03 mm。抗药性菌株Bm-rif生长性状与野生型无差异。室内定殖试验结果显示,Bm-rif稳定定殖菌量在非灭菌土壤中为0.04×105 cfu/g,在灭菌土壤中为0.47×105 cfu/g,均显著高于叶面定殖菌量;接种TMV-GFP前24 h叶面喷施发酵液对TMV初侵染的抑制率为44.04%。菌株发酵液稀释后喷淋烟株茎基部,对烟草黑胫病和青枯病的田间防治效果分别为68.09%和51.02%。因此,Bm具有抑菌活性且能在烟草根际土壤中有效定殖,具有开发为生防菌剂的潜力。      

拮抗TMV菌株By33产抗病毒蛋白分离纯化及发酵特性研究

从烟田耕层土壤分离获得对TMV有拮抗作用的菌株By33.其无菌发酵液对TMV的体外钝化作用为81.81%,涂抹菌液24 h后接种,仍有73.01%的防效;硫酸铵沉淀获得的活性蛋蛋白对TMV体外钝化作用为85.35%.粗提蛋白液经PEG浓缩、凝胶过滤和柱层析分离纯化,再经SDS-PAGE电泳确定该蛋白分子量为27.5 KDa,对TMV的钝化效果为80.8%.NB培养基在仞始pH6.5、温度30℃、通气最150 mL/500 mL、180 r/min发酵培养48 h,产物活性最高.     

拮抗TMV细菌发酵产物对TMV粒体形态的影响

通过对拮抗细菌发酵产物抑制TMV活性的测定及体外混合对TMV粒体形态的影响研究,表明:1)拮抗细菌by33、by88发酵产生的活性蛋白对TMV的体外钝化作用分别为85.38%和87.47%;2)电镜下观察到活性蛋白能打破TMV粒体的规则排列,与TMV粒子不可逆的结合,从而降低侵染力。      

壳寡糖席夫碱纳米银溶液对烟草花叶病防治及烟叶色素的影响

为开发防治烟草花叶病的新型药剂,采用大田试验研究了壳寡糖纳米银溶液、壳寡糖席夫碱纳米银溶液及宁南霉素对烟草花叶病的田间防治效果。结果表明,壳寡糖和壳寡糖席夫碱的纳米银溶液对烟草花叶病的防治效果均优于宁南霉素,以预防和治疗效果分别达到53.32%、24.95%的壳寡糖席夫碱纳米银溶液为最好,能够减轻病株叶绿素和类胡萝卜素含量的下降幅度,增强烟株的光合作用强度,使烟株的抗病性得到提高。壳寡糖及其衍生物的纳米银溶液对烟草花叶病具有较好的防治效果,为今后开发绿色、高效的抗TMV药剂提供了新思路。     

几个烤烟种质的抗病性比较鉴定

对9个抗花叶病烤烟品种进行综合农艺性状比较与抗病性鉴定.结果表明,9个品种对烟草普通花叶病表现出较强的抗性,其中Coker176、NC567、CV85、CV87为高抗(发病率与病情指数均为0).农艺性状与原烟外观质量以HT-5最为理想,可在生产上示范种植.     

抗TMV烤烟种质资源材料筛选与利用研究初报

在对27份烤烟种质及18份烤烟组合的F_1代进行TMV抗性鉴定中,筛选出免疫种质8021、8022,和抗病种质82501、辽烟10号、辽烟13号等12份;杂交组合中发现免疫7份,抗病19份,中亲优势明显,其抗性多偏向于抗病性强的亲本.但不同材料对TMV的抗性表现不同,感病材料发病早,病情指数上升速度快;抗病材料发病迟,病情指数上升速度慢.     

海藻糖增强烟草对普通花叶病的抗性及其机理的初步分析

[目的]明确海藻糖能否增强烟草对烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）病的抗性。[方法]采用半叶枯斑法、组织化学染色法、qPCR等技术分析海藻糖对TMV钝化、预防和抑制的效果，海藻糖处理后烟叶中活性氧的含量和渗透调节物质的含量、抗氧化酶活性变化，相关抗氧化和抗病基因的表达变化。[结果]海藻糖能够钝化TMV，对花叶病有治疗和预防的效果。海藻糖处理24 h后，烟叶中H₂O₂和脯氨酸含量升高，POD和SOD活性下降，APX和编码NADPH氧化酶亚基基因的表达水平升高，抗病基因PR、N-LIKE基因和NtEIG-48表达增加。海藻糖处理未影响烟株的正常生长。[结论]认为海藻糖可能通过提高叶片中的H₂O₂含量，激活抗病基因表达而增强烟草对TMV的抗病性。      

烤烟新品种龙江986的选育及其特征特性

为选育抗烟草普通花叶病毒病（Tobacco mosaic virus,TMV）的烤烟新品种,以优质烤烟品种NC89为母本,高抗TMV的品种吉烟7号为父本,经系谱法定向选育出烤烟新品种龙江986。经多年试验结果表明,龙江986田间生长势强,遗传性状稳定,对TMV免疫,中抗根结线虫,综合抗病性与对照NC89相当。烟叶主要经济性状和外观质量优于NC89,物理特性与感官质量与对照NC89相当,烟叶质量符合中式卷烟的需要。龙江986是一个抗TMV、品质和经济效益兼顾较好的优良烤烟新品种,适宜在东北烟区和黄淮部分烟区推广种植。      

菌克毒克防治烟草普通花叶病毒(TMV)及对病程相关蛋白的诱导作用研究

１９９８～１９９９年在室内进行了菌克毒克防治ＴＭＶ药效试验。室内结果表明,使用菌克毒克１５０倍液、２００倍液、２５０倍液预防烟草花叶病毒的防效依次为８２．２％、７０％、６１．１％。抗病毒剂菌克毒克注射于珊西烟（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ｖａｒ．Ｘａｎｔｈｉ ｎｃ）下部叶片,上部叶片接种ＴＭＶ,结果菌克毒克诱导上部未注射叶片对ＴＭＶ侵染的抗性对侵染的抑制率为６５．５％～８２．６％,对菌克毒克处理叶片及上部叶未处理叶片细胞间液中的病程相关蛋白进行电泳分析,结果表明,菌克毒克可系统地诱导珊西烟产生７种健康植株所设有的ＰＲ蛋白,ＰＲ蛋白的诱导与抗病性、耐病性的诱导相一致。     

烟草N基因及其介导的抗TMV信号转导分子机制

烟草N基因来源于粘烟草（Nicotiana glutinosa）,通过特异识别烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）的解旋酶结构引发植物的过敏性坏死反应,介导植物对该病毒的抗性。N-TMV互作是研究最早且最深入的植物-病原菌互作的模型之一。从N基因的分离、转录表达、编码产物结构及其抗TMV信号转导分子机制等方面进行了综述。     

疫霉葡聚糖激发子Gep1诱导烟草对烟草花叶病毒的抗性研究

烟草花叶病毒病是危害烟草的重要病害,可通过激发子诱导烟草产生抗病性。利用乙醇沉淀、DEAE-52、SephadexG-100柱层析的方法,从疫霉菌中分离纯化出一种葡聚糖类激发子Gep1。Gep1诱导后,烟草叶片产生和积累H₂O₂、酚类物质;烟草叶片苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和过氧化物酶活性均有不同程度的提高。Gep1可以诱导烟草抗TMV。盆栽实验表明,4 mg/mL Gep1的防效为67.4%,降低了发病率,推迟了发病时间。半定量RT-PCR结果显示,Gep1激发子诱导烟草抗病相关基因的上调表达,表明Gep1可激发烟草防卫反应,诱导烟草产生系统抗性,提高烟草对病毒的抗性。     

贵州烤烟TMV的越冬存活

研究了贵州烟草普通花叶病毒(TMV)在烤烟不同烟株残体和其它寄主植物上的越冬存活情况。结果表明,①病秆露在土表比埋在土中,TMV更容易失去侵染力;TMV在粗根中存活的时间比在茎、叶中长,在叶片中存活的时间最短;病茎、叶中的TMV在水环境中经过10个月失去侵染力;在室内过冬的病烟秆和在土中过冬的烟桩能导致假植烟苗严重发病。②经过6～11月后,土表的病烟杈中未能检出有侵染力的TMV;用病烟权作猪饲料,煮后仍有较多病毒存活。③病株种子的果壳碎屑有病毒存活,但不导致烟苗发病。④仅在番茄、辣椒、白菜和刺天茄等其它寄主中检出TMV。总体认为,病株烟秆、烟根是TMV的主要越冬处所,即初侵染来源;刺天茄是重要的野生寄主。因此,提出以合理处理烟株残体、轮作和使用抑芽剂为主的防治对策,此对TMV的预防具有积极意义。