我国食品安全关键技术取得重要进展

在食品安全方面,有关关键技术已获重大突破并在实际中得到应用。利用荧光PCR技术建立了禽流感病毒与新城疫病毒的快速检测方法,将检测时间从原来的21天缩短到4小时,国家质检总局要求在所有有大型禽类出口企业地方的直属局试用,目前效果良好。已研制出农兽药、生物毒素等食品安全相关检测设备13个,食品安全农药、兽药、生物毒素、食品添加剂、饲料添加剂和违禁化学品等检测试剂盒25个;已建立农兽药、生物毒素、食品污染物等检测方法共54项;建成了具有我国自主知识产权的农兽药 残留检测流动车,并已在青岛进行了试运行。建成了我国第一个进…     

鸭肉、鸭肝及鸭蛋中人畜共患病毒的检测与分析

目的 对福建省部分地区的鸭肉、鸭肝和鸭蛋开展人畜共患病毒的检测。方法 应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对2011年3月至2012年4月间从不同采样点采集的鸭肝、鸭肉等样品开展禽流感病毒、新城疫病毒及鸭坦布苏病毒的检测。结果 对所采集的529份样品检测结果表明, 样品中禽流感病毒、新城疫病毒和鸭坦布苏病毒检出率分别为0%、0.76%和1.1%。结论 所采集的鸭肉等样品的人畜共患病毒污染情况很轻, 但农村早市等地方来源样品的阳性率明显高于其他地方, 应进一步完善和健全鸭粗加工制品的食品安全质量检测工作。     

草莓中诺如病毒和甲肝病毒的多重实时荧光逆转录PCR检测方法的建立

目的建立草莓中诺如病毒GI、诺如病毒GII和甲肝病毒等3种食源性病毒的多重实时荧光RT-PCR检测方法,并应用于实际样品检测。方法对草莓样品进行前处理、病毒富集、病毒RNA提取和纯化后,先采用单重实时荧光RT-PCR进行检测,随后进行多重实时荧光RT-PCR反应条件优化,建立多重实时荧光RT-PCR检测方法并分析其特异性和灵敏度。结果所采用的病毒富集和核酸提取方法可以实现病毒的有效富集和抑制剂的去除,建立的多重实时荧光RT-PCR方法特异性强(100%),对草莓样品中诺如病毒GI、诺如病毒GII和甲肝病毒的检测灵敏度分别为56.2 RT-PCR50/20 g、31.6 RT-PCR50/20 g和31.4 CCID50/20 g。同时对50份样品进行检测,结果均为阴性。结论所建立的检测方法快速、灵敏、特异性强,适用于草莓产品中诺如病毒GI、诺如病毒GII和甲肝病毒的同时检测。     

八面来风

<正> 由国家质检总局中国进出口商品检验技术研究所自主设计开发并自行实验完成的检测食品,动植物及其产品中是否存在SARS病毒的检测方法,在北京通过专家鉴定。该方法用于检测检测食品中、动物活体和植物产品是否存在SARS病毒;方法简便、灵敏、快速、准确、可操作性强。     

数字聚合酶链式反应法检测贝类和浆果中甲肝病毒

目的建立一种数字聚合酶链式反应(PCR)检测贝类和浆果中甲肝病毒的方法。方法样品经蛋白酶K消化-聚乙二醇法进行甲肝病毒富集后,使用高纯度病毒核酸试剂盒进行RNA提取,之后对甲肝病毒进行数字PCR检测。结果本方法对甲肝病毒有典型扩增,重复性和稳定性良好,对于草莓样品中甲肝病毒的检测灵敏度为25.30 CCID_(50)/20 g,树莓样品中甲肝病毒的检测灵敏度为6.32 CCID_(50)/20 g,贝类样品中甲肝病毒的检测灵敏度为12.54 CCID_(50)/2 g,表明其灵敏度高。结论该方法快速、准确、灵敏,适合测定贝类和浆果食品中甲肝病毒。     

三重荧光定量PCR快速检测水产品中的双链DNA病毒的研究

目的:建立对水产品中三种双链DNA病毒(斑点叉尾鮰病毒、锦鲤疱疹病毒、流行性造血器官坏死病毒)快速、敏感、特异的检测方法。方法:针对三种病毒的DNA聚合酶基因的保守序列设计三对特异性引物和三条Taqman探针,优化体系,建立三重荧光定量PCR体系,并对该方法的灵敏性和特异性评估。结果:建立的三重荧光定量PCR体系特异性强,引物之间及引物和探针之间无相互干扰。对三种病毒的检测限均能达到102拷贝/μL。结论:该方法体系稳定,重复性好,可操作性强,对水产品中的双链DNA病毒的快速检测具有重要的应用价值。     

荧光分析在食品安全快速检测中的应用

近年已发展了多种快速检测食源性微生物的方法,其中荧光分析结合免疫技术和PCR技术在食品安全快速检测中具有快速、简单、灵敏等特点。主要就几种常见食源性病原菌：沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、李斯特氏菌、禽流感病毒等快速检测中的应用进行了综述。     

运用SYBR Green I荧光实时RT-PCR法检测草莓中甲肝病毒

针对甲肝病毒的vp3/vp1 壳蛋白区域设计引物,建立SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR 检测甲肝病毒的反应体系。此方法的病毒检测下限达到101 TCID50,标准曲线为Ct= － 3.052lg(TCID50)+34.57,线形范围101～105TCID50,相关系数0.9961。该方法对甲肝病毒检测特异,与轮状病毒、腺病毒、诺如病毒、星状病毒无交叉反应。针对甲肝病毒标准品检测的批内试验变异系数(CV)为0.85%～1.71%(n=5)、批间试验CV 为0.76%～1.98%(n=3)。运用此方法随机检测45 份草莓样品,检测出3 份阳性样品。该检测方法灵敏、特异、重复性好,可应用于水果和蔬菜中甲肝病毒的快速检测。     

荧光分析结合免疫学进行食品安全检测的基理分析

快速检测食源性微生物的方法很多,其中荧光分析结合免疫技术和PCR技术具有快速、简单、灵敏等特点。本文对在常见食源性病原菌:大肠杆菌、沙门氏菌、李斯特氏菌、葡萄球菌、禽流感病毒等快速检测中的应用进行了综述。     

猪瘟病毒实时荧光LAMP检测方法的建立

为做好猪瘟的早期诊断和及时预防,建立一种快速检测猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的实时荧光环介导等温扩增方法。试验利用Primer Explorer version 4针对CSFV的5`UTR非编码区设计4组引物,筛选出最佳引物后建立CSFV的实时荧光环介导等温扩增检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度以及适用性进行验证。结果显示,本试验建立的实时荧光环介导等温扩增方法对128份临床样本和22份猪瘟活疫苗人工干扰样本的检测结果与实时荧光聚合酶链式反应检测方法一致。该方法仅对猪瘟病毒有扩增反应,且最低检测浓度为10 fg/μL,对猪伪狂犬病毒、高致病性高致病型猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型等8种病原无扩增反应。本试验建立的实时荧光环介导等温扩增方法特异性强、灵敏度高,检测效果好,操作简单,适用于CSFV临床样本的快速检测。     

实时荧光定量法检测新城疫疫苗株和野毒株前处理方法比较

从缓冲液处理、倍比稀释、反复冻融等几个方面来对检验样品进行前处理,以期寻找更优的前处理方法,为进出口鸡肉产品中新城疫病毒的检测提供可靠参考.采用pH7.2的磷酸盐缓冲溶液(PBS),加入双抗的PBS、0.9%生理盐水、Hank's液等不同的缓冲液对样品进行前处理,结果表明,pH7.2的PBS效果最好;对鸡拭子进行倍比稀释,结果表明,当稀释度达到1:128时,检测结果为阴性;反复冻融对检测结果影响不大.     

农业部成功研制出猪感染甲型H1N1病毒检测试剂盒

为切实做好生猪疫情防控工作,农业部及时组织专家开展联合攻关,5月2日已成功研制出猪感染甲型H1N1病毒RT—PCR检测试剂盒,可在5小时内完成猪感染甲型H1N1病毒快速检测。该方法敏感性高、特异性强,     

利用EUSA和RT-PCR法检测甜菜丛根病毒(BNYVV)

利用酶联免疫吸附法（EusA）和RT—PCR两种方法对甜菜丛根病病毒（BM）进行检测,结果表明：（1）两种方法对甜菜丛根病同一样品进行检测,所得结果相同,都能用于丛根病定性检测;（2）从实验中可以看出,ELISA检测方法操作简单、快捷,价格较低廉,适合于幼苗抗病快速筛选鉴定。RT—PCR法操作程序较复杂,适合于病毒研究,价格较昂贵。     

基于近红外免疫层析技术快速检测食源性甲型肝炎病毒

建立了一种应用近红外荧光免疫层析技术快速检测食源性甲型肝炎(甲肝)病毒的方法。采用近红外荧光染料标记甲肝病毒单克隆抗体,将甲肝病毒多克隆抗体和羊抗鼠Ig G多克隆抗体喷涂于硝酸纤维膜上分别作为检测线(T线)和质量控制线(C线),研制检测甲肝病毒的近红外免疫层析试纸条及配套标准物质。研究表明,所建立的近红外免疫法对检测甲肝病毒具有良好的特异性和较高的灵敏度,最低检测限为1μg/m L,与肠道病毒71型(EV71)、腺病毒、轮状病毒、诺如病毒无交叉反应。效果评价试验发现,与传统检测方法和胶体金法相比较,所建立的近红外荧光法检测时间最短,检测限低于胶体金法。近红外荧光免疫层析技术大大缩短了检测时间,可用于食品中甲肝病毒的高效检测,为食品安全监管提供了技术支持。     

高致病性猪繁殖与呼吸系统综合症病毒荧光定量PCR检测方法的建立

为了对当前爆发流行的高致病性猪繁殖与呼吸系统综合症病毒建立快速准确的检测方法,根据该类病毒在Nsp2基因1594-1680处缺失87个碱基的特点,设计了一对特异性引物和一个Taqman探针,通过对反应条件的优化,建立了荧光定量PCR检测方法.该方法特异性强,灵敏度高,能很好地区分高致病性猪繁殖与呼吸系统综合症病毒和其它病毒,没有发现假阳性和假阴性现象,检测病毒滴度达到1TCID50.用该法对38份疑似样本进行检测,阳性率60.5%,与常规PCR法符合率100%.     

F_0F_1-ATPase生物传感器检测食品中食源性诺如病毒

应用分子马达生物传感技术,建立食品中诺如病毒特异性快速检测方法。以嗜热菌中提取的载色体(chromatophore)为材料,根据诺如病毒ORF1和ORF2连接处的高度保守区设计探针,利用生物素-亲和素系统将诺如病毒探针连接在F0F1-ATPase的ε亚基上构建生物传感器。提取病毒RNA并将其与生物传感器结合的同时启动ATP合成,比较其荧光强度的差别,对样品中的RNA进行检测。建立并优化了F0F1-ATPase生物传感技术检测食源性诺如病毒的方法。所建立的方法具有良好的特异性,12个含诺如病毒样品均能检出,3个不含诺如病毒样品均未检出,无假阴性或假阳性情况出现。该方法可在1 h内完成检测,检测灵敏度在RNA水平上达到0.005 ng/m L。所建立的分子马达生物传感技术可以较好的检测食品中的诺如病毒,并为其他病毒的检测提供参考。     

近红外免疫层析技术快速检测贝类食品中食源性A群轮状病毒

目的建立近红外免疫层析技术快速、灵敏的检测贝类食品中食源性A群轮状病毒的方法。方法采用近红外荧光标记轮状病毒单克隆抗体4E1,研制A群轮状病毒的近红外免疫层析试纸条及配套标准物质,用近红外荧光扫描仪检测。结果本方法对A群轮状病毒近红外免疫荧光法最低检测限为0.5μg/mL,在45min内即可完成检测,与肠道EV71病毒、腺病毒、诺如病毒、甲肝病毒均无交叉反应。通过效果评价试验发现,与传统检测方法、普通聚合酶链式反应及胶体金法相比较,本文所建立贝类食品中轮状病毒的近红外荧光法检测时间最短,检测限最低。结论本方法对检测贝类食品中食源性A群轮状病毒具有良好的特异性和较高的灵敏度。