牦牛血红蛋白活性肽酶法制备工艺的优化及脱色技术研究

为开发具有保健功能的新型高附加值生物制品,本实验采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶及AS1.398中性蛋白酶3种食品级内切蛋白酶对牦牛血红蛋白进行酶解,以水解度及三氯乙酸可溶性氮为评价指标,采用酶解-活性炭法对水解液进行脱色,筛选出AS1.398中性蛋白酶为最佳水解用酶。通过正交实验对其酶解工艺进行优化后,得出AS1.398中性蛋白酶最佳水解条件为:底物浓度5%,加酶量8000U/g,温度55℃,初始pH7.5,酶解时间5h。在此条件下水解产物为淡黄色,并具有较高的低分子量生物活性肽含量。     

猪骨蛋白生物活性肽酶法制备工艺的研究

为充分挖掘骨蛋白资源及开发具有保健功能的高附加值骨蛋白深加工产品,本实验以猪骨为原料,以猪骨蛋白质为研究对象,确定了蒸煮猪骨提取骨蛋白的最佳条件为:温度121℃,压力0.1MPa,时间4h;骨蛋白酶解预处理的最佳条件为:温度121℃,压力0.1MPa,时间30min。在此基础上本实验采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶及AS1.398中性蛋白酶3种食品级内切蛋白酶对猪骨蛋白进行酶解,以水解度为评价指标,筛选出木瓜蛋白酶为最佳水解用酶,其水解产物具有较高的生物活性肽含量,并通过单因素实验得出其最佳水解条件为:时间5h,底物浓度9%,pH7.0,加酶量8000U/g,温度55℃。     

脱脂米糠抗氧化肽的制备工艺研究

为了得到脱脂米糠抗氧化肽的最佳制备工艺,研究了胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解脱脂米糠蛋白的进程特性以及不同的酶解条件对脱脂米糠抗氧化肽活性的影响。从5种蛋白酶中筛选出最合适的酶,通过单因素实验考察了底物浓度、加酶量、pH、温度以及时间对酶解产物水解度和ABTS自由基清除率的影响,在单因素实验的基础上,以酶解产物的ABTS自由基清除率为响应值,进行Box-Behnken中心组合实验。结果表明:选用碱性蛋白酶制备脱脂米糠抗氧化肽效果最好;最佳酶解工艺条件为加酶量1.8%、温度50℃、时间276 min、pH9.0、底物浓度5%;在最佳酶解工艺条件下,所得脱脂米糠抗氧化肽对ABTS自由基清除率可达71.85%。     

双酶法制备林蛙油小分子肽的研究

采用木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶双酶结合法对林蛙油进行酶解,利用凝胶层析法和HPLC法进行检测。结果表明:木瓜蛋白酶的最佳酶解条件为底物浓度1%、酶用量1200U/g、温度60℃、时间3.5h、pH6.0,碱性蛋白酶的最佳条件为加酶量500U/g、温度50℃、时间3.0h、pH8.0。酶解液利用SephadexG-15柱分离得到分子量小于1355D的肽段,经HPLC分析检测,色谱图上出现了三个高低不同的峰,其保留时间依次为21.837、23.300和24.499min。同时,木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶结合可以有效地将林蛙油蛋白降解为肽,水解度达到17.8%,比单酶提高了5.6%;且产物具有较好的溶解性和流动性。     

酪蛋白酶解物体外抗氧化作用的研究

采用正交试验设计,以羟自由基清除率为衡量指标,筛选三种蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件。试验结果表明,木瓜蛋白酶最佳酶解条件为pH7.5,酶浓度8%,温度45℃,反应时间90min,羟自由基清除率为71.28%,与同浓度维生素C、维生素E的清除率差异均不显著(p>0.05);枯草杆菌蛋白酶(As1.398)最佳酶解条件为pH7.0,酶浓度2%,温度50℃,反应时间90min,羟自由基清除率为68.60%;胃蛋白酶最佳酶解条件为pH1.4,酶浓度6%,温度37℃,反应时间30min,羟自由基清除率为66.53%。试验发现,不同的酪蛋白酶解物都有抗脂质过氧化作用,最大抑制率为59.28%。     

六种商品蛋白酶对鲢鱼蛋白水解效果比较研究

选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、动物蛋白水解酶、风味蛋白酶对鲢鱼蛋白进行酶解,以水解度为评价指标筛选出各种蛋白酶的最佳水解工艺条件,通过水解度和水解液综合风味选出水解效果最佳的酶.结果表明:风味蛋白酶、动物蛋白水解酶和木瓜蛋白酶为水解效果较好的酶,其水解度和水解液综合风味评分分别为:风味蛋白酶16.97％和8.4,动物蛋白水解酶23.38％和7.0,木瓜蛋白酶26.34％和5.6;三种酶的最佳水解条件分别为:风味蛋白酶酶用量为0.7％(W ∶ W),温度55℃,pH值8.0,液固比5 ∶ 1(W∶ V),时间4 h;动物蛋白水解酶酶用量为0.7％(W∶ W),温度55℃,pH值8.0,液固比5∶ 1(W ∶ V),时间4 h;木瓜蛋白酶酶用量为0.7％(W ∶ W),温度55℃,pH值7.0,液固比5 ∶ 1(W ∶ V),时间4h.     

二次酶解麦谷蛋白制备富含谷氨酰胺(Gln)活性肽营养液的研究

确定了Gln活性肽的水解用酶为胰蛋白酶和碱性蛋白酶以及酶解过程中最佳酶解条件.通过两次酶解工艺制备Gln活性肽,胰酶的选用条件为底物浓度3%、酶浓度3%、pH 8.0、温度48℃和反应时间2 h;碱性蛋白酶的条件为底物浓度3%、酶浓度3%、pH 8.0、温度68℃和反应时间1.5 h.酶解液通过透析(10 ku以下)后产品有效Gln为213.5 mg/g.产物的分子质量在900～2.4×104 u之间.     

响应面法优化坛紫菜抗氧化肽酶法制备工艺

以坛紫菜为原料,通过酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和纤维素酶酶解制备活性肽,以DPPH自由基清除率和多肽得率为评价指标,研究坛紫菜水解肽的抗氧化能力。结果表明:5种酶的酶解产物都具有抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物DPPH自由基清除率最高,选择它为最佳工具酶。通过单因素和响应面试验优化酶解工艺,得到最佳酶解工艺:酶解时间3.6 h、酶解温度47℃、酶用量16362 U/g、底物浓度3.0%、pH7.0。此条件下制备得到的水解肽具有较强抗氧化能力,DPPH自由基清除率可达(91.83±0.81)%。     

金带细鲹鱼露制作过程中酶解工艺的研究

采用酶水解法对金带细鲹鱼的酶解工艺进行研究。以蛋白质的水解度为指标,采用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胰蛋白酶和菠萝蛋白酶进行水解,筛选出适宜的酶种类。对影响胰蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解效果的主要因素进行研究,并确定胰蛋白酶和木瓜蛋白酶对金带细鲹鱼中的最适酶解工艺。胰蛋白酶最适酶解条件为温度45℃,时间5h,pH 8.0,加酶量2.0%(g/g),固液比为1∶5(g/g),在此条件下,水解度达到30.51%;木瓜蛋白酶最适酶解条件为温度60℃,时间4h,pH 6.0,加酶量2.0%(g/g),固液比1∶4(g/g),在此条件下,水解度达到18.51%。利用酶法水解制取鱼露,能缩短生产周期,提高原料的利用率。     

酶法制备联合Plastein反应修饰牡蛎ACE抑制肽工艺优化

以牡蛎为原料,采用酶解联合Plastein反应修饰的方法,获得高活性血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。以ACE抑制率和水解度为指标,对比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶这5种蛋白酶对牡蛎肉的酶解效果,筛选出木瓜蛋白酶最佳。通过单因素试验和正交试验对酶解工艺进行优化,得到最佳酶解工艺为料液比1∶8(g/m L)、加酶量2.0%、温度65℃、时间1.0 h、pH6.0,此条件下酶解产物的ACE抑制率可达到63.30%,在此基础上采用Plastein反应对酶解产物进行修饰,以游离氨基酸减少量和ACE抑制率为指标,考察反应过程中酶种类、底物质量分数、加酶量、时间和温度对修饰结果产生的影响。通过该反应的修饰,得到选用中性蛋白酶、底物质量分数40%、加酶量1.0%、温度30℃、时间2.5h、pH7.0时,ACE抑制率最高可达82.31%,比修饰前提高了19%。     

酶法制备黑豆粕粉多肽的工艺研究

该试验以黑豆粕粉为原料,以蛋白水解度为评价指标,从风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶中筛选水解效果最好的蛋白酶。考察酶解pH、加酶量、酶解温度和酶解时间对黑豆粕粉蛋白质水解度的影响。在单因素试验结果基础上,采用响应面试验对黑豆粕粉多肽的酶解条件进行优化。结果表明,碱性蛋白酶最适合酶解黑豆粕粉多肽,其最佳酶解条件确定为酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶解时间260 min、加酶量4.3%。在此最佳条件下,蛋白水解度为35.23%,较优化前蛋白水解度提高1.93%。     

凡纳滨对虾主要过敏原鉴定及酶法消减技术的研究

以凡纳滨对虾为研究对象,用免疫印迹法检测其主要过敏原蛋白组分;用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对凡纳滨对虾水溶性蛋白水解,消减过敏原。并且通过间接酶联免疫吸附实验和致敏豚鼠全身免疫实验对过敏原消减情况进行检测,确定酶法消减过敏原条件。结果表明,凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19kD 以及14kD 的蛋白质组分。胰蛋白酶最佳水解条件为：pH8.0,酶与底物比1:100(m/m,下同),45℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH6.5,酶与底物比1:100,60℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;菠萝蛋白酶最佳水解条件：pH7.5,酶与底物比1:100,55℃,底物质量浓度5g/100mL,水解时间3h。并且胰蛋白酶水解产物和木瓜蛋白酶水解产物对致敏豚鼠的全身免疫实验安全性很好。     

木瓜蛋白酶制备大豆抗癌活性肽的条件优化

用木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白进行酶解,制备大豆抗癌活性肽,并对其细胞生长抑制率、水解度和木瓜蛋白酶的最优作用条件进行研究。结果表明：在整个酶解过程中,大豆抗癌活性肽都具有明显的抗癌作用,但水解度与大豆抗癌活性肽的细胞生长抑制率之间不呈线性关系。底物质量浓度、酶用量、酶解温度、酶解时间和反应pH值都影响大豆抗癌活性肽的细胞生长抑制率。木瓜蛋白酶制备大豆抗癌活性肽的最优酶解条件为：底物大豆抗癌活性肽的浓度6g/100mL、酶用量7000U/g、酶解温度55℃、酶解时间4h、反应pH7.5,在此条件下得大豆抗癌活性肽细胞生长抑制率为28.13%。     

响应面法优化黄粉虫蛋白制备ACE抑制肽的条件

以黄粉虫蛋白粉为原料,利用酶解技术对制备血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制肽进行优化。通过单因素及响应面试验,确定木瓜蛋白酶的酶解工艺,利用酶标法测定酶解产物的ACE抑制率,研究底物质量浓度、加酶量、pH值、酶解时间、酶解温度对ACE抑制肽活性的影响。结果表明：当底物质量浓度为7 g/100 mL、加酶量1%、pH 6.5、酶解时间7 h、酶解温度55 ℃时,黄粉虫蛋白粉酶解产物的ACE抑制率达到58.86%。     

高活性酪蛋白抗氧化肽的制备方法研究

采用木瓜蛋白酶对酪蛋白进行水解,得到抗氧化活性较好的酪蛋白水解物,并且水解物在木瓜蛋白酶作用下进行类蛋白反应制备出高活性酪蛋白抗氧化肽。第一步制备酪蛋白水解时酶添加量为500 U/g酪蛋白、温度45℃、底物浓度5%、反应时间2 h。第二步类蛋白反应的最优条件为：酶添加量为500 U/g水解物、温度30℃,底物浓度50%、作用时间5.5 h。毛细管电泳结果确认,类蛋白反应修饰后抗氧化肽的组成情况发生变化。抗氧化活性分析结果表明,类蛋白反应修饰后的酪蛋白抗氧化肽对两种自由基的清除能力显著提高。     

响应面法优化紫贻贝蛋白酶解工艺条件

分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶7种蛋白酶对紫贻贝蛋白的酶解工艺条件进行研究。根据水解度和感官评定的结果,确定中性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶可以作为紫贻贝蛋白酶解的外加蛋白酶。将上述4种蛋白酶进行两两复配,通过试验确定复合蛋白酶与中性蛋白酶按1:1进行复配,可作为紫贻贝蛋白酶解的最适复配酶。采用响应面优化分析得出复配蛋白酶最佳酶解条件为酶解时间2h、pH7、酶解温度50℃、酶添加量0.4%,在此条件进行实验,测得水解度为70.25%,游离氨基酸总量增加了388.46%。     

RSM优化大豆蛋白酶水解条件

用As1．398中性蛋白酶水解大豆分离蛋白,采用四因素三水平中心组合设计优化大豆分离蛋白酶水解条件,应用SAS分析软件对实验数据进行处理。得以最佳酶水解条件为：温度40．2℃,pH7．2,酶与底物浓度比0．87%(W/W)。底物浓度8．86%(W/W),水解时间3 h；在此条件下水解度预测值为11．28%,实际测定水解度值为11．24%。