黑曲霉果胶酯酶固定化前后酶学性质比较研究

采用明胶加戊二醛包埋法和蛋壳微粒吸附法分别对黑曲霉果胶酯酶进行了固定化,并研究了两种固定化方法制备得到的固定化黑曲霉果胶酯酶的酶学性质.结果表明,通过固定化,黑曲霉果胶酯酶的各项酶学性质指标都得到了改善,明胶固定化果胶酯酶和蛋壳固定化果胶酯酶的酶活回收率分别为46.3%和42.2%,而且与游离果胶酯酶相比,两种固定化酶的最适温度都由40℃上升到45℃,最适pH由4.4下降到4.0和4.2,Km值0.0113%由下降到0.0033%和0.0027%.     

底物印迹技术对双重固定化果胶酶的影响

用壳聚糖微球作为载体,戊二醛交联后通过底物印迹法固定化果胶酶,并对固定化条件和酶学性质进行了研究。结果表明:以柑橘果胶S(半乳糖醛酸≥74%)和0.05%的戊二醛作为底物和交联剂,在20 m L果胶酶液中加入1 m L柑橘果胶S,50℃反应8 min进行印迹后吸附,固定化果胶酶活力回收率达到49.77%。以柑橘果胶S为底物,在pH4.0和50℃条件下,底物印迹制备的固定化果胶酶表观米氏常数Km为7.854 mg/m L;最适反应温度提高为60℃;最适反应pH为3.5,在pH3.0~5.0内稳定;温度稳定性和酸碱稳定性有显著的提高;重复使用6次后,相对酶活剩余68.79%。底物印迹技术可以提高双重固定化果胶酶的底物亲和性和稳定性。     

交联海藻酸钠-明胶固定化L-阿拉伯糖异构酶的研究

以海藻酸钠和明胶为载体,对L-阿拉伯糖异构酶进行固定化。为增强固定化酶的稳定性,又用戊二醛对其进一步交联。研究了海藻酸钠及明胶浓度、CaCl2浓度、硬化时间以及戊二醛浓度等因素对固定化效果的影响,并对固定化酶的酶学性质进行了研究。结果表明最佳固定化条件为：海藻酸钠浓度2.0%、明胶浓度2.0%、硬化时间6h、CaCl2浓度4.0%、戊二醛浓度0.02%,该条件下所得酶活回收率最高为82%,且具有较好的操作稳定性,重复操作7次后酶活损失不到50%。与游离酶相比,固定化酶的最适反应pH及反应温度没有变化,但pH稳定性和耐热性都有所提高。     

明胶载体固定化木聚糖酶技术的研究

以明胶为载体,戊二醛为交联剂,采用包埋-交联法制备固定化木聚糖酶,探讨明胶浓度、戊二醛体积分数、交联时间和固定化时间对固定化酶相对酶活力的影响.通过正交实验确定木聚糖酶的最佳固定化条件,比较固定化酶与其游离酶的最适反应温度、热稳定性、最适反应pH及pH稳定性.研究发现,在明胶浓度为15％、戊二醛体积分数为4％、交联时间为lh和固定化时间为3h时,固定化酶的回收率可达72.56％,同时固定化和游离酶的最适温度分别为50、60℃,最适pH分别为3.6、4.6,pH稳定性及热稳定性有显著提高.     

果胶酶在磁性复合载体上的固定化及其酶学性质

通过Fe3O4磁核与海藻酸钠明胶制备磁性复合载体,戊二醛交联后协同对果胶酶进行固定化,并研究固定化酶的酶学性质。利用正交实验优化固定化酶的制备条件,比较研究了固定化酶与溶液酶的酶学性质。结果表明:在Fe2+(5mol/L)∶Fe3+(5mol/L)体积比为0.75∶1的溶液中,制备Fe3O4磁核;3.5%海藻酸钠与3.0%明胶以2.5∶1的体积比,加入3.0mg/m L Fe3O4磁核量,在体积分数4.0%的戊二醛中交联2.5h;以每克载体加入20mg果胶酶,p H4.0下固定60min,制备的固定化果胶酶活力回收率可达78.69%。固定化果胶酶最适p H为4.0,在p H3.0~7.0内稳定;最适温度50℃,在20~50℃具有较好的热稳定性;表观米氏常数Kmapp为3.162mg/m L;重复使用10次后,酶活力还剩51%,4℃下储存10d,酶活力还保留81%。说明以戊二醛交联磁性海藻酸钠明胶为复合载体制备的固定化果胶酶,机械强度大、弹性好,酶活力回收率高,操作稳定性好。     

蔗糖异构酶PalI包埋和交联固定化方法比较

采用海藻酸钠包埋法和戊二醛交联法两种固定化方法,对来源于Klebsiella sp. LX3的蔗糖异构酶PalI的稳定性和可重复利用性进行研究。结果发现,海藻酸钠包埋法在海藻酸钠、CaCl_2质量分数为1.5%、2%时,所得固定化酶的酶活最高,其最适反应温度为40℃,最适pH值为6;戊二醛交联法在(NH_4)_2SO_4质量分数为90%,戊二醛体积分数为2. 5%时得到的固定酶酶活最高,交联酶的最适反应温度为50℃,最适pH值为5,通过对酶的稳定性比较,两种方法酶稳定性都优于游离酶。4℃保存20 d后游离酶的酶活降低到30%,而戊二醛交联酶活性在95%以上,海藻酸钠固定化酶残余酶活仍在60%左右。戊二醛交联法固定酶活性优于海藻酸钠固定化酶,重复利用12次戊二醛交联酶,其残余酶活仍为80%。     

琼脂包埋法固定化酪氨酸酶的研究

在海藻酸钠、明胶等5种固定化载体筛选的基础上,研究了以琼脂作为载体材料,采用包埋法固定化酪氨酸酶,优化固定条件,并对固定化酶特性进行了研究。结果表明,最适固定化条件为3%的琼脂、固定化时间为2h。固定化酶的最适pH为7·0、最适温度为30℃、最适底物浓度为0·01mol/L。同时具有较好的反应稳定性和贮存稳定性,重复使用7次后其活力回收率仍达到68·3%,12d后该固定化酶的残余活力保留原酶活的75·4%左右。     

几丁质共价固定果胶酶的研究

以部分脱乙酰几丁质为载体,戊二醛为偶联剂,共价法固定果胶酶(E.C.3.2.1.15),研究了果胶酶的固定化条件、固定化酶的性质,结果表明:固定化果胶酶的最适pH为3.5,比游离酶小0.5个单位;最适温度为50℃,比游离酶提高了10℃;其表观Km(3.67m g/m L)接近游离酶的Km(3.97m g/m L)。以pH4.0、0.25%果胶溶液为底物进行柱式反应,结果表明:以1.7m L/m in的流速运行26h,果胶酶活力基本无变化,操作半衰期为37d。以可溶性固形物含量5%的山楂汁、12%的苹果汁为例进行柱式实验,粘度可分别降低66%和60%。     

海藻酸钙明胶联合固定化α-淀粉酶

以海藻酸钙、明胶凝胶珠包埋、戊二醛交联制备固定化α-淀粉酶,探讨了酶的固定化条件和固定化酶的部分性能。在戊二醛浓度0.3%、加酶量酶16.0g/L条件下可以获得最佳的固定化效果;与游离酶相比,制备的固定化酶最适反应pH由6.0降低到5.6,最适反应温度由65℃升高到70℃,其适宜作用温度范围、pH值范围均比自由酶范围宽;固定化酶的热稳定性优于游离酶,且连续7批次操作仍保持80%酶活力,显示出良好的稳定性。     

交联壳聚糖固定化β-葡萄糖苷酶的稳定性研究

以戊二醛交联壳聚糖微球为载体通过共价连接反应固定化β-葡萄糖苷酶,研究固定化β-葡萄苷酶的稳定性。结果表明:固定化和游离β-葡萄糖苷酶的最适温度分别为706、5℃,最适pH分别为4.0、4.5。固定化β-葡萄苷酶贮存11周以后仍保持75.0%以上的相对活力,连续使用6批次后其相对活力仍保持在65.0%以上。固定化β-葡萄糖苷酶的高温、pH、贮存、操作稳定性明显高于游离酶。     

柑桔属柠檬类果实果胶酯酶的活性分析

果胶酯酶（PE或PME）能催化果胶脱酯生成低酯果胶和果胶酸,属于一类果胶酶,广泛应用于食品特别是果品加工工业中。以新鲜柠檬为原料,采用NaCl-冷冻离心-盐析的方法提取柠檬果实中的果胶酯酶,pH-stat法对果胶酯酶进行活性分析。研究温度、pH、相对储藏度等因素对柠檬类果实果胶酯酶的活性影响,并探索该酶的最适温度、最适pH值,进而研究该酶的热稳定性;对柠檬果实中果胶含量进行测定。实验表明：58℃,pH=6.90时柠檬中的果胶酯酶的活力最高。     

黑曲霉果胶酯酶在毕赤酵母中异源表达、性质分析及脱酯工艺优化

果胶酯酶作为一种食品酶制剂,因其能够将高酯果胶的甲酯基脱去生成低酯果胶而受到广泛关注,但目前国内尚无自主研发的商品果胶酯酶。为了促进果胶酯酶的应用,该研究合成了密码子优化后的黑曲霉果胶酯酶基因,并实现了其在毕赤酵母X33中成功表达。3 L发酵罐高密度发酵96 h后,得到的发酵液上清液中果胶酯酶的活力为85.12 U/mL,是摇瓶水平的7倍,也是目前果胶酯酶表达的最高水平。对重组果胶酯酶进行分离纯化和酶学性质研究,结果表明,重组果胶酯酶的最适pH和最适温度分别是pH 5.0和55℃,K_m和V_max分别是13.8 mmol/L和9.04μmol/(L·min)。该酶的温度稳定性较好,在55℃处理40 min,剩余活力仍保持在60%以上;其pH耐受范围广,在pH 3.5～6.5下处理120 min,仍保持60%以上的剩余活力。以高酯果胶为底物,对该果胶酯酶的脱酯条件进行优化,优化得到的脱酯工艺参数为：30 g/L果胶、加酶量65.4 U/g、脱酯温度50℃、初始pH 5.5、脱酯时间60 min。在此条件下果胶的酯化度从70.8%降至13.6%。该...     

明胶固定化果胶酶的制备及酶学性质研究

以明胶为载体、戊二醛作为交联剂制备固定化果胶酶，对其固定化条件和酶学性质进行了研究。结果表明：以15％明胶为载体、5％戊二醛为交联剂、1g明胶固定果胶酶4mg制备的固定化酶，其酶活力回收率达45．85％：固定化酶的最适温度55℃，最适pH3．4，Km^app值3．48mg／ml；固定化酶的酸碱稳定性与温度稳定性均得到提高，连续使用7次后固定化酶相对活力还剩下47．06％。     

利用果胶酯酶制备低酯果胶工艺研究

研究高酯果胶脱酯工艺的最佳条件;利用果胶酯酶对商品高酯果胶进行脱酯,采用L934正交试验法研究确定酶用量、脱酯温度、pH及脱酯时间对脱酯效果的影响.利用果胶酯酶进行脱酯的最佳工艺参数为:果胶酯酶0.06 g,脱酯温度45℃,脱酯pH 7,脱酯时间70 min,所得果胶甲氧基含量为4.96%.利用酶法制备低酯果工艺简单,脱酯效率较高.     

游离果胶酶和固定化果胶酶的酶学性质

研究游离果胶酶和固定化果胶酶的酶学性质,结果表明,游离酶的最适温度为55℃,最适pH为4.0,明胶固定化酶的最适温度为60℃,最适pH为3.5,固定化酶的稳定性比游离酶更好,底物与固定化酶的亲和力增强。     

磁性复合载体固定生姜蛋白酶的酶学性质研究

文章采用海藻酸钠与明胶为载体,对磁性Fe 3 O 4进行包埋,使其形成磁性复合载体凝胶微球,经戊二醛交联后,固定生姜蛋白酶,得到磁性复合载体固定生姜蛋白酶;在预实验的基础上,确定影响制备固定化生姜蛋白酶的主要因素;并研究在最优条件下,固定化生姜蛋白酶与其游离酶的酶学性质。结果表明:磁性复合载体固定化生姜蛋白酶的酸碱稳定性范围为pH 3.0~7.0,在20~60℃内具有较好的抗热性,其最适pH为4.0,温度为50℃,表观米氏常数Kmapp为3.162 mg/mL;在此条件下固定60 min,制备的固定化生姜蛋白酶剩余酶活力可达78.69%。重复使用10次后,酶活力剩余53%;在4℃下储存10 d,酶活力仍保留50.66%。说明在最优工艺条件下所制备的固定化酶机械强度大,弹性好,操作稳定性强,酶活力回收率高。     

弱碱性大孔树脂固定化硫磺菌β-葡萄糖苷酶的实验研究

通过实验筛选出弱碱性大孔树脂 D301R 作为固定化酶的吸附载体.以戊二醛为交联剂,采用吸附交联相结合的方法制备了固定化硫磺菌β-葡萄糖苷酶.将 D301R 大孔树脂与硫磺菌鲜菌丝提取液混合后4℃振荡吸附 12 h,用 0.075%戊二醛20℃交联 1 h 可以获得最佳的固定化效果,酶活性回收率为 46.2%,固定化酶活性为 0.38 U/g.固定化酶的最适温度略有提高,最适 pH 不变,而温度稳定性与贮存稳定性优于溶液酶.     

果糖基转移酶的固定化及其性质研究

果糖基转移酶的固定化可以很方便地实现酶的回收和再利用。以HPA25L树脂为固定化载体,对果糖基转移酶进行了固定化初步研究。结果表明,其最优固定化条件为:采用先交联后固定化方法,以戊二醛为交联剂,固定化温度20℃,pH5.0,加酶量10mL/g树脂,戊二醛浓度为0.15%,得到固定化酶酶活达120U/g,酶活回收率达81%,其最适反应温度和pH分别为55℃和7.0,利用固定化酶连续反应12个批次后,酶活仍然保留达20%以上。     

氨基化硅胶作载体固定化α-淀粉酶的研究

采用5 种硅胶作为载体,戊二醛作偶联剂,制备了固定化α- 淀粉酶。对制备固定化α- 淀粉酶的硅胶目数、偶联剂浓度、温度、pH 值的影响因素进行了研究和优化。并对固定化酶和游离酶的酶学性质进行了比较。结果表明：固定化酶的最适温度为75℃,比游离酶提高了10℃,固定化酶的热稳定性优于游离酶。与游离酶相比,其对酸碱的适应性、贮存稳定性、操作稳定性也都有较明显改善。固定化酶的Km 值略低于游离酶,前者为2.13mg/ml,后者为1.02mg/ml。     

交联酶聚集体法制备单宁酶及固定化酶性质研究

交联酶聚集体法(cross-linked enzyme aggregates,CLEAs)是一种新型的无载体酶固定化方法。使用该法固定化黑曲霉产单宁酶,制备无载体固定化单宁酶(Cross-linkedenzyme aggregates-tannase,CLEAs-TA),并对其制备条件、结构特征、酶学性质进行分析。结果表明,最优制备条件为单宁酶游离粗酶液在冰水浴中经80%的硫酸铵沉淀30min后,以1.5%戊二醛水溶液进行酶聚集体交联反应,可获得较高活性、较高稳定性的交联酶聚集体,酶活回收率达47.33%,对酯键水解作用的最适温度、最适pH值分别为50℃、4.5,与游离酶相比,表现更高的pH及温度稳定性,重复使用6次后,活力剩余32.86%,其良好的操作稳定性有利于没食子酸丙酯高效转化为没食子酸及广泛应用于水解茶饮料中单宁的反应。