天山一号冰川融水中耐冷酵母菌多样性及系统发育

分离和筛选天山一号冰川融水中可培养的酵母菌,了解冰川中低温酵母菌的生长特性、系统发育和物种多样性,为低温酵母菌资源的收集保护及开发其生物技术利用潜力奠定基础。采用虎红培养基RB分离菌株,对分离菌株的最适生长温度、最适p H及耐盐性进行测试;通过选择性培养基分别测试了菌株的产胞外酶性状,利用26S rRNA基因序列分析确定低温酵母菌种的系统进化地位,并通过MSP-PCR指纹技术对26S rRNA基因高度同源性的菌株做进一步区分。共得到68株低温酵母菌,依据菌落形态、细胞形态进行初步分群,选取具有代表性的15株进行测序,结果显示15株酵母菌株隶属于担子菌(Basidiomycetes)和子囊菌(Ascomycetes),共7个属,只有BCY-12隶属于子囊菌的Pichia属,其他菌株全部属于担子菌,其中隐球酵母属(Cryptococcus)占40%。菌株产酶性状研究显示,7株可产脂肪酶,4株可产酯酶,11株可产淀粉酶,11株可产蛋白酶,3株可产果胶酶,2株可产几丁质酶。天山一号冰川融水中具有较丰富的低温酵母菌,系统发育多样,产酶特性差异较大。分离菌株大多属于耐冷菌范畴,Cryptococcus属的菌株为优势种群。     

天山一号冰川沉积层低温脂肪酶产生菌的筛选及初步鉴定

从新疆天山一号冰川西支尾部的底部沉积层中分离筛选出高产低温脂肪酶菌株,进行初步鉴定及产酶探讨。使用罗丹明-B、吐温80、维多利亚蓝选择培养基以及三丁酸甘油酯酶活检测板,结合棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)比色法,筛选出产低温脂肪酶酶活较高的菌株,研究其生长特性及常规生理生化实验,并根据16S rRNA基因序列初步确定其所属菌属。共分离筛选到5株产低温脂肪酶酶活较高的菌株,经初步鉴定其中4株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),1株为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。该芽孢杆菌属产脂肪酶的能力略高于其余菌株。分离得到的5株菌均属于耐冷菌,有较好的耐盐性,能在低温条件下发酵产酶,其中4株在36h左右达到产酶高峰,为开发冰川环境下丰富的低温酶资源奠定了基础。     

天山一号冰川产果胶酶酵母菌的筛选及其系统发育分析

从前期天山冰川冻土及融水中分离到68株可培养酵母菌中,通过筛选性培养基筛选产低温果胶酶的菌株。选择培养基显示菌株C2、C9、L1和L13可产低温果胶酶。对4株酵母菌最适生长温度进行测定,16 ℃条件下4株酵母菌均能生长,属耐冷菌范畴。通过26S rDNA基因序列分析确定产果胶酶菌种的系统进化地位,在系统发育上,4株产酶菌分别与Cryptococcus macerans DQ377662、Cryptococcus sp. DQ377668、Rhodotorula laryngis JQ768911、Rhodotorula sp. JX124722的同源性最高。     

天山冻土中嗜冷酵母菌生物多样性

采用麦芽浸膏富集平板涂布天山冻土中可培养酵母菌,通过麦芽浸膏分离培养基筛选菌株.采用酵母菌常规生理生化实验、最适生长温度、最适pH对分离菌株的生理学进行研究.以NL1和NL4为PCR扩增引物,通过26S rRNA基因D1/D2区序列同源性分析,初步确定酵母菌株的系统进化地位.分离筛选到4株嗜低温酵母菌,分属于隐球酵母(Cystofilobasidium infirmominiatum)、掷孢酵母(Sporobolomyces patagonicus)、棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)和毕赤酵母(Pichia kluyveri).     

皖北地区白酒大曲中酵母菌的筛选与鉴定

为了分离筛选功能优良的大曲酵母菌株,采用传统分离培养方法,从皖北某白酒企业春季中温大曲中分离得到89株酵母菌,选择6株优势菌株进行复筛实验。通过菌落特征、细胞形态、生理生化特性等常规分析方法,筛选出生长优势明显,产酒精能力较强的2株酵母菌株(N4、N6)。结合18S-ITS r DNA序列测定和系统发育分析,确定N4为大隐球酵母(Cryptococcus magnus),N6为近玫色锁掷孢酵母(Sporidiobolus pararoseus),属于锁掷酵母属(Sporidiobolus)。筛选的2株酵母菌作为皖北地区白酒酵母菌的重要菌种资源,在白酒生产中具有一定的应用潜力。     

朝鲜族传统大酱中酵母菌的分离及其产酶特性分析

为了研究朝鲜族传统大酱的功能特性和酵母菌在发酵豆酱的功能作用,以不同地区的26种自然发酵的朝鲜族传统大酱为样品,对大酱中酵母菌进行筛选、分离、纯化并对分离菌株进行了产酶特性分析。结果显示:从26种样品中共筛选出103株酵母菌菌株,其中53株产纤维素酶、66株产β-葡萄糖苷酶、47株产脂肪酶;通过18S r RNA基因序列分析对代表菌株进行鉴定,鉴定出三种类别酵母菌,分别为汉逊德巴利酵母、近平滑假丝酵母及鲁氏酵母。     

新疆石河子地区酵母菌的生物多样性及系统发育研究

通过对石河子地区酵母菌的筛选,了解石河子地区酵母菌的生物多样性。采用YPD培养基分离纯化菌株,通过26SrDNA基因D1／D2区序列分析确定菌种的系统进化地位。分离筛选出6个属天然酵母菌,分别为：假丝酵母属（Candida）、Meyerozyma属、红酵母属（Rhodotorula）、孢汉逊属（Hanseniaspora）、酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）和毕赤酵母属（Pichia）,共10个种,其中包括6个疑似种。     

云南杨梅发酵液中酵母菌筛选及耐受性研究

以云南杨梅为材料进行自然发酵,发酵液经酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)培养基和麦芽汁培养基分离纯化获得酵母菌。对菌株进行产酯、产乙醇及产H₂S能力测定,结合杜氏小管发酵实验筛选,然后对筛选酵母菌进行耐受性测试,最后基于26S r DNA基因片段序列对筛选酵母菌进行分子生物学鉴定。结果表明,从云南杨梅发酵液中分离纯化获得59株酵母菌,筛选到3株优良酵母菌,编号为JYR-5、JYR-14、JYR-17,3株菌在温度40℃、乙醇体积分数5%、pH 2.5、葡萄糖质量浓度300 mg/L、SO₂质量浓度400 mg/L的条件下仍能正常生长。经鉴定,菌株JYR-5、JYR-14为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),菌株JYR-17为库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)。因此,从云南杨梅发酵液中筛选的3株酵母菌为杨梅酒酿造微生物资源开发利用提供一定参考价值。     

传统自然发酵黏豆包关键酵母的筛选鉴定

目的 筛选适宜谷物黏豆包发酵的酵母菌菌株。方法 以采集自黑龙江省不同地区的传统自然发酵黏豆包谷物发酵液为研究对象,通过高通量测序技术,分析发酵液中微生物多样性,再利用传统培养法对发酵液中的酵母菌进行分离,筛选出耐低温、耐低pH、起酵时间快和酵香风味好的酵母菌株。结果 通过高通量测序结果显示,在真菌菌属水平上, 3个地区样品共包含5个门、30个属、30个种,微生物群落为酿酒酵母属(Saccharomyces)、威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces)、毕赤酵母属(Pichia)等,其中酿酒酵母属为首要优势菌属,次级优势菌皆为威克汉姆酵母属。在此基础上,利用平板划线分离出21株酵母菌,通过分子生物学鉴定, TY5、TY9和AC6为酿酒酵母, TY8和SC4为威克汉姆酵母, AC3为热带假丝酵母, SC3为季也蒙毕赤酵母,SC5为胶红酵母;TY5、TY8、TY9、AC6、SC6在pH为3、15℃条件下具有较好的生长性能,其中菌株TY9和AC6具有较强的耐酸性及耐低温性,且起酵时间快,菌株TY9发酵风味最好,呈现较强的谷物发酵风味。结论 筛选出一株耐低温、耐低pH、起酵时间快和酵香风味...     

红提葡萄中酵母菌多样性的研究

为研究红提葡萄酵母菌多样性,以石河子地区的红提葡萄为原料,采用传统分离培养方法从中筛选酵母菌,并通过形态 观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定。 结果表明,共筛选鉴定出24株酵母菌。 其中毕赤酵母属（Pichia）16株、汉逊 酵母属（Hanseniaspora）4株、梅奇酵母属（Metschnikowia）4株。 库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）为优势种,占分离菌株的50%。 该 研究可为红提葡萄酵母菌资源的开发与利用提供理论依据。     

花期糯红高粱内生酵母分离鉴定及功能菌筛选

为揭示花期糯红高粱内生酵母群落结构及功能特点。利用纯培养法对宜宾地区酿酒专用糯红高粱花期内生酵母多样性及群落结构进行探究与分析,并通过选择培养基筛选其中的功能菌。结果表明,从花期糯红高粱中分离得到54株内生酵母菌菌株,鉴定为12个属17个种,优势属为隐球菌属（Cryptococcus）,优势种为黄色隐球酵母（Cryptococcus luteolus）。糯红高粱花期根、茎、叶、花各组织中的内生酵母各项多样性指数均有明显差异,其丰富度指数表现为茎>根>花>叶;均匀度指数表现为根>花>叶>茎;优势度指数表现为花>根>茎>叶。花期糯红高粱内生酵母功能丰富,菌株FBJ15产淀粉酶能力最强,菌株FAF8产蛋白酶能力最强,菌株FAJ43产脂肪酶能力最强;HBF22菌株产酯酶能力最强。由此可知,糯红高粱花期内生酵母种类丰富且功能多样,该研究结果为深入探究内生酵母与宿主糯红高粱的互作机制提供参考。     

枣酒酿造用酵母的筛选及发酵性能研究

以枣庄长红枣发酵液和枣园土壤为酵母菌株的分离源,经过富集培养和多次划线分离纯化,来获得优良的枣酒酿造酵母菌株。经过酵母菌株的产气性能和产酒精性能比较,以及耐酒精、耐酸、耐糖、耐SO2等耐性试验,得到了发酵性能较强的酵母菌株Z03、Z13、Z34。经过染色,镜检观察其细胞形态和芽殖方式,确定为酵母菌,经WL培养基培养后观察,初步鉴定其属于酵母属的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。将这三株酵母与活性干酵母按照枣酒发酵工艺程序进行发酵,发酵出来的枣酒经感官评定和理化检测,最终筛选出适合枣酒发酵酵母菌株Z13和Z34,其酒精度为9.5%vol和10.8%vol。     

产β-葡萄糖苷酶非酿酒酵母的筛选及酶学特性研究

通过对新疆石河子葡萄产区葡萄中的酵母菌的筛选,采用酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)培养基分离纯化菌株,并对分离菌株进行分子生物学鉴定。利用对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷为底物筛选产β-葡萄糖苷酶酶酵母菌,得到一株高产糖苷酶毕赤酵母属(Pichia sp.)的非酿酒酵母菌株Y8,并研究该菌株的产β-葡萄糖苷酶酶学特性。结果表明,β-葡萄糖苷酶的最适初始p H值为5.0,最适产酶温度为30℃,反应时间为15 min,最适葡萄糖质量浓度为15 g/100 m L。     

宜春明月山富硒土壤中耐硒酵母菌株的筛选与鉴定

从宜春明月山毛竹林采集的富硒土壤中,筛选出耐硒酵母菌株并进行鉴定。采用PDA培养基、营养琼脂培养基、马丁氏培养基筛选出耐亚硒酸钠浓度较高的酵母菌株,根据菌株形态学特征和26S rDNA基因序列分析,对其进行分类鉴定。从土壤中分离得到7株耐硒菌株,其中2株具有典型酵母菌特征的菌株,经鉴定结果表明:菌株A₁为Saitozymapodzolica,菌株P为Cyberlindnerasaturnus。得到2株耐硒酵母菌株,丰富了耐硒酵母资源。     

浓香型大曲复合功能酵母菌的筛选及鉴定

从浓香型大曲分离的酵母菌中,筛选出发酵力、酯化力和脂肪酶活力复合功能较高的菌株,为构建浓香型大曲复合功能菌群提供重要资源。以从浓香型大曲中筛选得到的10株酵母菌为研究对象,利用脂肪酶平板鉴定法初步确认10株酵母均具有脂肪酶功能,并对这10株酵母进行单菌小麦固体培养基发酵,测定发酵产物发酵力、酯化力和脂肪酶活力,复筛出一株复合功能性突出的菌株J17,该菌株的发酵力为2.02 g/(g·72 h),酯化力为114.13 U,脂肪酶活力为6.37 U/g。结果发现,J17发酵后能产生较为丰富的风味物质,经扫描电镜观察结合分子生物学鉴定,J17为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。     

非酿酒酵母菌的分离鉴定及产酯关键酶活性的研究

采用传统培养分离法从新疆葡萄表皮分离酵母菌，结合形态观察及WL培养基鉴定，选取代表性菌株进行分子生物学鉴定，并测定筛选菌株的产酯含量及产酯关键酶活性。结果表明，共分离出72株酵母菌株，筛选出33株代表性菌株，其中非酿酒酵母31株，归属于10个属，分别为红酵母属（Rhodotorula）、隐球酵母属（Cryptococcus）、有孢圆酵母属（Torulaspora）、克鲁维酵母属（Kluyveromyces）、有孢汉生酵母菌属（Hanseniaspora）、洛德酵母属（Lodderomyces）、梅奇酵母属（Metschnikowia）、棒孢酵母属（Clavispora）、毕赤酵母属（Pichia）和锁掷酵母属（Sporidiobolus），且Rhodotorula（16.13%）、Hanseniaspora（16.13%）和Pichia（19.35%）为主要非酿酒酵母。非酿酒酵母中Torulaspora XM2（5.22 g/L）、Pichia K3（4.91 g/L）、Hanseniaspora HE3（4.63 g/L）和Pichia ML3（4.57 g/L）总酯含量较高。通过对其产酯关键酶活性的测定推测乙酸酯水解酶及醇乙酰基转移酶对酯类物质的生成可能有极大地影响。     

海洋真菌产酶能力的研究

从大连丽娇湾和金石滩采集获得海水、海藻等样品,采用PDA培养基分离海洋真菌,并对产酶真菌进行筛选及鉴定,及其产酶能力进行初步研究。结果显示,共筛选得到真菌32株,产酶菌株18株,其中有1株同时产4种酶,3株同时产3种酶,8株同时产2种酶。初步鉴定18株产酶菌分布于4个属,其中优势属为曲霉属（Aspergillus sp.）和青霉属（Penicillium sp.）,各6株,均占总筛选产酶菌株数的33.33%,其次为酵母属（Saccharomyces sp.）,共4株,占总筛选产酶菌株数的22.22%。11株产植酸酶、10株产纤维素酶、6株产淀粉酶、5株产蛋白酶、3株产脂肪酶。     

发酵初期豆瓣酱中微生物多样性分析及产酶菌株的筛选

为了探明发酵初期(发酵70 d)豆瓣样品中微生物的多样性及产酶菌株对豆瓣风味的影响,采用纯培养的分离方法对分离菌株进行了细菌16S r RNA系统发育分析;同时用选择培养基对产中性蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、淀粉酶的菌株进行了筛选。结果表明,发酵初期豆瓣样品微生物种类丰富,总共分离得到80株菌株分属于11个属(Bacillus、Halomonas、Oceanobacillus、Virgibacillus、Lactobacillus、Pichia、Aspergillus、Candida、Wickerhamomyces、Enterobacter和Gracilibacillus)。筛选出的34株典型菌中,产中性蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶的比例分别为21%,24%,38%和56%。     

新疆哈萨克族奶酪产脂肪酶酵母菌的筛选及产酶条件优化

从新疆不同地区采集到的哈萨克族手工奶酪中分离得到100株菌种,通过分离(RB)培养基和罗丹明B培养基筛选出4株产脂肪酶酵母菌,分别为Y-2、Z-5、S-6、N-5。结合菌种生理生化及26SrDNA基因序列分析确定4株菌的系统进化地位,在系统发育上Y-2、Z-5隶属于马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus),S-6和N-5分别隶属于毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)。利用对硝基苯酚法对4株菌种产酶酶活进行测定,发现K.marxianus Z-5产脂肪酶酶活最高,达23.00 U/mL;对K.marxianus Z-5产酶条件进行优化,确定最优发酵条件为:温度30℃、pH 7.5、接种量2.5mL/100mL左右时,其酶学活性最强,为25.99U/mL。     

祁连葡萄酒产区葡萄酒相关野生酵母菌株的分离及初步分类

取祁连葡萄酒产区葡萄园原料自然发酵筛选葡萄酒相关野生酵母菌株68株,利用YEPD培养基的形态观察以及WL营养培养基的聚类分析,并结合生理生化实验对其进行初步分类,结果表明,与葡萄酒相关的野生酵母菌株有假丝酵母、有孢汉逊酵母、酒香酵母、毕赤氏酵母、红酵母以及酿酒酵母,其中有孢汉逊酵母属和酒香酵母属为优势菌株.