利用Cre/loxP重组系统构建甜菜碱合成酶多基因表达载体

通过使用一套基于Cre/loxP重组系统的植物多基因表达载体构建系统,将辽宁碱蓬(Suaeda liaotungesis kitag)的胆碱单加氧酶(CMO)基因、甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因以及烟草的核基质结合区(MAR)序列构建到同一表达载体上,得到可直接用于农杆菌转化的植物表达载体pYLTAC747H-MAR-BADH-CMO-MAR.该甜菜碱合成酶多基因表达载体的成功构建为进一步进行植物的遗传转化,以有效提高转基因植株的耐盐性提供了实验基础.实验中,用热激法替代了电击法进行质粒的大肠杆菌转化,并去掉了透析等步骤,简化了构建过程.     

豌豆铁蛋白基因植物转化载体的构建

实验将 Ca MV35 S启动子控制下的铁蛋白基因构建于植物双元表达载体 p Cambia 130 1中 ,并将该重组载体导入农杆菌超毒力菌株 EHA10 5 ,以建立适合于禾本科的植物转化系统 ,为铁蛋白基因的转基因及其功能研究奠定基础     

兔防御素基因NP—1（即MCP—1）的克隆及其植物中表达载体的构建

通过ＰＣＲ技术，从兔肝脏中扩增到兔扩御素ＮＰ－１成熟胚编码序列。将该序列替换质粒ｐＢ２２１中的ＧＵＳ编码序列，构建成植物表达载体ｐＢＩＣ－３５ＳＮＰ１，为将防御素基因用于植物抗病基因工程育种奠定了基础。     

一种新型双向启动子--棉花曲叶病毒启动子的分离、序列分析与功能初探

以棉花曲叶病毒(CLCuV)侵染的烟草叶片组织总DNA为模板,通过聚合酶链反应扩增CLCuV双向启动子片段并插入克隆载体.序列分析和同源性比较表明,克隆的启动子长436bp,与目前发现的9种CLCuV株系的启动子序列均不相同,同源性最高达99.32%.将启动子片段分别以不同方向与GUS报告基因和nos终止子融合,构建了瞬时表达载体.通过基因枪法将质粒载体导入烟草和棉花叶片细胞中进行瞬时表达,结果表明,互补链基因方向启动子属强启动子,在叶肉及维管组织均有较高的活性;病毒链基因方向启动子表达活性较低.本文初步证实分离的互补链基因启动子可作为新型强启动子应用于双子叶植物尤其棉花的遗传转化.     

豌豆核基质结合区的功能研究

将豌豆基因组中分离的核基质结合区（Matrix attachment regions,MARs)构建在植物表达载体的T－DNA结构域中，使得报导基因β-葡糖醛酸酶（β-glucuronidase,GUS)基因位于两段MARS序列之间，将此载体与不包含MARs序列的植物表达载体经农杆菌介导转化烟草，GUS活性检测表明，MARs可以提高GUS基因的表达水平，和不包含MARs的转基因植株相比，MARs序列使GUS基因的平均表达水平提高2倍，但在瞬时表达中，MARs对GUS基因的表达没有影响。     

双价抗虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达

利用人工合成及密码子优化后的雪花莲凝集素（ＧＮＡ）基因,与人工合成的ＧＦＭｃｒｙＩＡ构建了双价基因中间载体。双价基因进一步亚克隆到植物表达载体ｐＢＩ１２１．１上,获得了带有两个抗虫基因ｃｒｙＩＡ及ＧＮＡ基因的高铲植物表达载体ｐＧＷ４ＢＡＩ,地载体中两基因的５’端、３’各加人与在植物中能增强基因转录和翻译有关的调控元件。通过根癌农杆菌介导叶盘法转化烟草Ｋ３２６,获得２８株卡那霉素抗性植株,随机抽取１     

转拟南芥AtNHX1基因促进烟草对钾吸收的研究

提取拟南芥总RNA,反转录合成Na /H 逆向转运蛋白基因AtNHX1,构建了植物高效表达载体,用叶盘法将其导入烟草,经筛选获得了抗卡那霉素和GUS染色阳性的转化子38株.应用荧光定量PCR方法对转化材料部分含AtNHX1基因的烟草内源钾通道基因、烟草K 转运蛋白基因和烟草焦磷酸酶基因的转录水平进行了分析.结果表明:在转化烟草中可以检测到AtNHX1基因mRNA,与未转化材料相比,烟草钾离子转运蛋白基因NtHAK1的转录降低,H -ATPase基因NHA1转录增加,钾通道基因NKT转录无显著变化,T1代转化烟叶中K 含量显著增加,Na 、Ca2 无显著变化,烟叶中总糖含量降低,证明了编码拟南芥AtNHX1基因与植物的K 吸收有关.     

热诱导FLP重组酶删除转基因烟草外源基因

利用热激启动子Hsp18.2、FLP重组酶基因及其专一识别位点构建了重组酶删除系统的植物表达载体转化烟草.热激处理后转基因植株中FLP重组酶表达并识别两个同向loxP-frt重组酶识别位点,使两位点间的DNA插入片段(包含kn1、gus、nptⅡ基因)从转基因烟草基因组中删除,由kn1基因引起的转基因烟草特殊表型及gus基因产生的蓝色表型消失.     

天然高分子纳米颗粒基因载体的研究进展

基因治疗是用于人类疾病治疗的一种新方法.基因载体系统是基因治疗面临的一个严峻挑战.基因载体包括病毒载体和非病毒载体,目前基因治疗中使用的主要是病毒载体.病毒载体具有转染率高的优点,但是却存在着安全性差等缺点,因此非病毒载体越来越受到关注.纳米颗粒是一种很有研究潜力的非病毒载体,其中基于天然高分子材料的纳米颗粒基因载体具有许多优良的特性.主要就天然高分子纳米颗粒的研究现状进行了综述.     

八肋游仆虫一种富含谷氨酸的蛋白GARP的表达与纯化

为研究游仆虫中含有三核苷酸重复序列的GARP基因编码的GARP蛋白在细胞中的功能,利用定点突变技术,将GARP基因中的TGA突变为通用半胱氨酸密码子TGT.突变后的GARP基因构建于原核表达载体pRSETc中,得到重组质粒pRSETc-GARP,将pRSETc-GARP质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,带有纯化标签的重组蛋白His6-GARP获得可溶表达,表达产物与抗His抗体在约26 kDa处有很强的交叉反应.His6-GARP蛋白在不同pH条件下通过两次阴离子交换层析和一次凝胶层析三步纯化达到电泳纯.     

Sequence Dependent Machine Set-Up Times and Similarity of Parts: A Mathematical Model

This paper attempts to develop a mathematical relation between machine set-up times and similarity of parts. First, the task for setting up a machine was broken down into a distinct number of elements whose state was expressed as a binary vector called set-up task elimination vector. By introducing a corresponding rime vector, it was shown that sequence dependent set-up time is the product of the two vectors. Next, a quantitative relation between set-up tasks and the design characteristics of parts was defined as a binary interaction matrix while the similarity of parts was defined as a binary vector. It turned out that the set-up tasks elimination vector is the Boolean product of the interaction matrix and the similarity vector. Using this information, a machine set-up model was developed in terms of similarity of parts. The computation of machine set-up times and a sequencing heuristic using the model were illustrated.     

Patatin启动子驱动的乙肝表面抗原基因在马铃薯中的表达

按常规分子克隆方法将马铃薯中高表达的ｐａｔａｔｉｎ启动子和乙肝表面抗原基因分别插入双元质粒ｐＢＩ１０１成为植物表达载体ｐＰＨＧ９,由前者驱动后者表达;通过农杆菌转化法将乙肝表面抗原基因导入马铃薯并获得再生植株;用ＥＬＩＳＡ方法检测经ＰＣＲ鉴定的转基因植株中乙肝表面抗原的含量,对照标准曲线得知转基因马铃薯植株中的乙肝表面朱含量高达１００￣１７４ｎｇ／ｍｇ可溶性蛋白。     

一种新的基于颜色矢量角的图像空间描述符

在分析利用颜色直方图进行图像检索时存在问题的基础上,提出了一种新的图像空间描述符.首先利用颜色矢量角的特性将图像分为边缘区和平滑区两部分,然后,针对两种区域的不同分布特点,综合利用图像的边缘信息、形状信息及空间分布特性,采用两种不同的描述符--方向颜色矢量角直方图和空间联合分布熵分别来提取图像的边缘区和平滑区的分布特征.实验结果表明,将其用于图像检索,取得了很好的检索效果.     

离子强度对于牛精蛋白在大肠杆菌中的表达的影响

通过基因合成将大肠杆菌偏好的精氨酸密码子CGT取代野生型牛精蛋白基因中的稀有精氨酸密码子AGA和AGG，得到密码子优化的牛精蛋白基因，并将其克隆入原核表达载体pGEX-2T中，组装成表达载体pGEX-2T-PS。将这个表达载体转化入大肠杆菌表达菌株BL21中，经IPTG诱导，可得到一33kD融合蛋白表达带，首次成功地将牛精蛋白在大肠杆菌中进行了表达，但其表达量很低，约为总菌体蛋白的13％。增加表遂菌株培养液的离子强度，可将蛋白表达含量提高到28％，且蛋白表达量与离子强度呈正相关。纯化后的牛精蛋白可在体外条件下与DNA发生结合。     

计及运动副间隙的双曲柄六杆压力机机构动力学仿真向量键合图法

针对计及运动副间隙的双曲柄六杆压力机机构动力学仿真问题,提出了相应的向量键合图法.基于修正非线性连续接触碰撞力的混合模型,推导出间隙运动副的相对碰撞速度向量方程.在此基础上,建立了可以更精确描述间隙运动副的向量键合图模型,具有通用性强、模块化的特点,便于嵌入到系统的向量键合图模型中.由机构运动副的约束关系,将各构件的向...     

人VEGF受体II基因3区的克隆、表达研究

用RT PCR法从人胎儿脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF受体II基因 3区 ,将其重组到 pAYZ表达载体中 ,构建成人VEGF受体II基因 3区表达载体。将该载体转化大肠杆菌 16C9,获得稳定表达 ,表达产物以可溶性状态存在 ;SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,其分子量约为 14kD。以纯化的表达产物免疫Balb/c小鼠 ,眼球采血制备抗血清 ,抗血清效价在 10 3以上 ,并具有抑制VEGF诱导内皮细胞增殖的作用 ,在抑制肿瘤血管新生中具有潜在的应用前景。     

密码子优化的牛精蛋白基因在大肠杆菌中的表达

以PCR的方法得到牛精蛋白基因的基因，去其内含子，得到牛精蛋白cDNA，克隆入原核表达载体pGEX-2T中，组装成表达载体pGEX-2T-PE，利用大肠杆菌偏好的编码精氨酸的密码子CGT将野生型牛精蛋白基因中编码精氨酸的稀有密码子（AGA或AGG）替换掉，通过基因合成得到密码子优化的牛精蛋白的基因，将其克隆入原核表达载体pGEX-2T中，组装成表达载体pGEX-2T-PS。将这两个表达载体分别转化入大肠杆菌表达菌株BL21中，经IPTG诱导，同样条件下，野生型牛精蛋白基因无法得到表达，密码子优化的牛精蛋白基因能够得到良好的表达，表达产物约占细菌总蛋白的18％，将表达蛋白纯化，进行DNA－蛋白结合实验，发现其能与DNA发生非特异性的结合。     

来源于芽孢杆菌(Bacillus circulans)的乳糖酶在毕赤酵母中的高效表达

根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子选择偏好对来源于芽孢杆菌(Bacillus circulans)的乳糖酶基因lacO进行了分子改造.改造后的基因lacM按正确的阅读框架插入到毕赤酵母表达载体pPIC9上,构建得到重组毕赤酵母表达质粒.PCR检测、SDS-PAGE电泳分析和酶活力测定的结果表明,lacM基因已重组到酵母染色体上,并能正常分泌表达.与未改造的基因lacO的毕赤酵母重组子相比,酶蛋白表达量明显增加,约为改造前的3倍以上.     

水产养殖动物核酸疫苗的研究与应用现状

介绍了鱼用核酸疫苗载体的构建、诱导的免疫反应机制、接种途径、佐剂的免疫促进作用及安全性等研究现状。     

Extension of an absolute vector error correction technique to wideband, high-frequency measurements

The authors have previously demonstrated how a transmitter (Tx), a reciprocal transmitter/receiver (Tx/Rx) signal path and two unidirectional receiver (Rx) paths can be used together with short, open and load standards for the absolute vector error correction (AVEC) of a Tx/Rx module. Once calibrated, this Tx/Rx module can then provide accurate vector measurements of the signals that are flowing into and/or out of the test port. In order to simplify the analysis, the AVEC technique was applied to a simplified baseband circuit that did not include frequency conversion mixers in a previous paper. Now, in this paper the authors first show how the AVEC technique can be extended to the vector calibration of high-frequency receivers that involve frequency conversion mixers. The authors then show how to calibrate a system that allows for wideband absolute phase relationship measurements of periodic modulated signals, provided that the same local oscillator is employed for the two down-conversion receivers, and different radio frequencies and intermediate frequencies are employed in these receivers. This novel AVEC technique is one of the key concepts in the design of a wideband absolute vector signal measurement system, which overcomes the limitations of traditional measurement instruments by combining the features of vector signal analysers, spectrum analysers and vector network analysers.