壳聚糖酶高产菌株选育及发酵条件研究

以自筛曲霉CJ2 2 -3为出发株 ,经紫外线和6 0 Co诱变处理 ,获得 1株壳聚糖酶高产菌株CJ2 2 -3 2 6,经正交实验初步优化了其液态产酶培养基 :壳聚糖 1 5 % ,麸皮 2 % ,(NH4 ) 2 SO4 0 2 % ,KH2 PO4 0 2 % ,MgSO4 0 0 5 % ,Tween -80 0 0 5 % ,pH5 5。优化的发酵条件为 :装液量 75mL/ 2 5 0mL三角瓶 ,摇床转速 1 5 0r/min ,发酵温度为 3 0℃ ,发酵时间为 96h。在此条件下 ,CJ2 2 -3 2 6产酶活力为3 0 6U/mL。     

海洋细菌JMUAZ5琼胶酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性

【目的】分离海洋来源的琼胶酶产生菌,确定其分类地位,研究其所产琼胶酶粗酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为琼胶酶的进一步开发应用提供理论依据。【方法】利用以琼胶为唯一碳源的筛选培养基筛选分离产琼胶酶的菌株;采用16S r RNA基因序列分析确定菌株的分类地位;研究菌株所产琼胶酶粗酶的酶学性质;通过测定酶解产物的还原能力和清除自由基ABTS·+的能力,分析酶解产物的抗氧化活性。【结果】分离到一株产胞外琼胶酶的菌株JMUAZ5,根据16S r RNA基因序列分析,该菌株归属于弧菌属(Vibrio sp.);菌株JMUAZ5琼胶酶粗酶具有良好的底物专一性;最适反应温度为40°C,在20°C和25°C条件下稳定;最适反应p H值为8.0,在p H 6.0~10.0范围内稳定;Ca~(2+)和Al~(3+)对酶活性具有强烈促进作用,而Zn~(2+)和Fe~(3+)对酶具有强烈抑制作用;琼胶酶粗酶对测试的抑制剂、去垢剂和变性剂均具有好的抗性;酶解产物琼胶低聚糖具有还原能力和清除ABTS·+的能力。【结论】海洋细菌弧菌属JMUAZ5可产胞外琼胶酶,酶解产物有一定的抗氧化活性,具有潜在应用价值。     

高产β-葡萄糖苷酶药用真菌菌株的筛选

从30个属61株药用真菌中筛选能高产β-葡萄糖苷酶的菌株,经α-纤维素平板法快速初筛和固体发酵复筛,采用对硝基酚-β-葡萄糖苷(pNPG)法对复筛菌株进行酶活测定.结果表明,菌株Schino-phyllum commune.01产β-葡萄糖苷酶能力最强,且其酶活在第9天时能达到39.03 IU/g,灵芝属(Ganoderma sp.)和香菇属(Lenttinus sp.)担子菌也存在产β-葡萄糖苷酶的能力,其余菌株产β-葡萄糖苷酶能力很低.     

Box-Behnken优化培养条件提高乳酸菌产脂肪酶活性

采用油脂平板法对实验室分离自西藏风干肉、巴盟中旗牛羊肉样品的55株乳酸菌进行筛选,得到1株脂肪酶活力较高的菌株TR1-1-3,经16S rDNA分子生物学鉴定为瑞士乳杆菌。在单因素试验(接种量、温度、pH值、培养时间、金属离子)的基础上,通过响应面法对菌株发酵产酶条件进行优化,分析培养条件的改变对菌株发酵产酶的影响。结果表明,经Box-Behnken二次多元回归模型方程计算可得最优解,即最佳培养条件为:接种量2%,培养温度36.2℃,pH 5.84,发酵培养48 h,此时目标菌株TR1-1-3的酶活性最强为10.92 U/mL,较优化前有所提高,且接种量对菌株发酵产酶的影响最大,其次为pH值与温度,3因素的交互作用影响更为显著,而金属离子对其影响较小,其中Fe~(2+),Mn~(2+)激活菌体产酶,Ca~(2+),Mg~(2+),Cu~(2+)对其有不同程度的抑制作用。     

几丁质脱乙酰酶菌株的筛选鉴定及酶学性质

利用平板变色圈法从土壤中筛选出一株产几丁质脱乙酰酶活力较高的菌株,命名为F2-7-3。为分离筛选出几丁质脱乙酰酶高产菌株、生物制备几丁质脱乙酰酶提供来源,并为进一步提高该菌株产酶能力及酶的活性提供研究基础,通过形态学观察、生理生化实验、16SrDNA测序分析等方法对该菌株进行了鉴定,并对其发酵产生的脱乙酰酶的酶学性质进行了研究。经鉴定该菌株为红球菌属。酶学性质研究表明,该酶反应的最适温度为50℃,最适pH为7.0,Mn2+、Ca2+及K+在低浓度下对酶促反应有激活作用。分析结果表明该菌产酶能力较强,具有良好的开发价值。     

高产蛋白酶细菌的分离筛选及其种类鉴定

从广东、河北、辽宁、湖南、江苏等省份采集土壤样品9个,采用稀释涂布的方法共分离到细菌菌株44株,利用平板透明圈法对44株细菌菌株产蛋白酶能力进行初步筛选,16株菌株出现了明显的透明圈,菌株G1-b、GD-2-2、HX-B-1的蛋白酶活性最强,透明圈/菌落直径比(HC)在3.5以上;比色法测定产酶活性强的3株菌株的蛋白酶酶活力,GD-2-2菌株的产酶能力最强,酶活力达到447.6U/mL。通过对细菌GD-2-2菌株形态学观察、生理生化实验,结合相关文献,初步鉴定菌株GD-2-2属于芽孢杆菌属。对菌株GD-2-2的 16S rDNA序列分析表明,该菌株序列与细菌Bacillus licheniformis strain YB915 (GQ996726.1)的16S rDNA序列同源性达100%,综合形态学观察和生理生化实验结果,鉴定GD-2-2菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。     

高产β-葡萄糖苷酶野生酵母的筛选及产酶能力差异性分析

为了比较分析野生酵母菌产β-葡萄糖苷酶的情况,筛选高产β-葡萄糖苷酶的酵母菌株,该研究采用七叶灵显色法和4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（p-NPG）显色法对从宁夏贺兰山东麓分离的941株野生酵母的产β-葡萄糖苷酶能力进行筛选,通过WL培养基上的酵母菌落形态和26S rDNA D1/D2区的序列分析对所有酵母菌株进行分类鉴定,并且对酵母产β-葡萄糖苷酶能力进行差异性分析。 结果表明,941株酵母被鉴定为14个种,且筛选出了4株酵母菌高产β-葡萄糖苷酶：菌株SLY-4（98.51 U/L）、F2-24（76.93 U/L）、 F2-16（62.72 U/L）和HX-13（47.95 U/L）。 产酶能力差异性分析表明β-葡萄糖苷酶广泛分布于14种酵母,但是产酶能力表现出明显的种间和种内差异性。     

硫酸二乙酯与紫外线复合诱变选育糖化酶高产菌株的研究

目的通过诱变育种,提高糖化酶生产菌株黑曲霉WT(Aspergillus niger WT)的产酶能力。方法用硫酸二乙酯(DES)和紫外线(UV)进行复合诱变,通过淀粉透明圈法筛选优势菌株,并通过摇瓶发酵对优势菌株的产酶能力进行验证。结果通过DES诱变,得到一株产酶能力为11 737 U/ml的突变株DES3,较原始菌株黑曲霉WT产酶能力提高30%;将DES3进行紫外诱变,得到一株产酶能力为13 858 U/ml的突变株DUV1,产酶能力较DES3提高18%,较原始菌株黑曲霉WT提高53%。结论本论文采用DES和UV复合诱变的方法,有效提高了糖化酶生产菌株黑曲霉WT的产酶能力,对糖化酶产业的发展具有重要意义。     

一株海洋低温葡萄糖氧化酶担子菌的诱变育种及其酶学性质研究

利用紫外诱变、化学诱变及紫外-化学复合诱变技术对一株海洋来源的产低温葡萄糖氧化酶（GOD）担子菌（Basidioascus sp.） WYQ 23进行诱变育种,并对其遗传稳定性及所产酶酶学性质进行研究。 结果表明,获得一株高产低温葡萄糖氧化酶的突变菌株 Basidioascus sp. WYQ 23-3-4。 该突变菌株GOD酶活为2.33 U/mL,是原始菌株的1.40倍。 经8代传代培养实验表明,突变菌株WYQ 23-3-4产葡萄糖氧化酶能力稳定。 该酶最适温度为20 ℃,在10～30 ℃可保持较高酶活;最适pH值为5.6,在pH5.0～6.0可保持较高酶活; 金属离子Ag+、Zn2+、Fe2+对酶活抑制作用较强,Mg2+、K+对酶有激活作用。 综上,通过复合诱变可明显提高担子菌产低温葡萄糖氧化酶 的能力,为该酶的工业化生产提供了潜在的优良的菌种资源。     

一株源于北派酱香白酒酿造环境中产淀粉酶细菌的筛选、鉴定及其特性研究

采用平板涂布法从酱香型白酒酿造环境（大曲、酒醅和窖泥）筛选产淀粉酶细菌菌株,通过菌落形态、细胞显微结构、生理生化特性和分子生物学方法对其进行鉴定,并对其生长特性及耐受性进行研究。结果表明,从酱香型白酒大曲中筛选得到一株产淀粉酶的细菌,编号为2-2,经鉴定菌株2-2为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。菌株2-2能够在25～45 ℃和pH 5～9范围内生长良好,属于乙醇高耐受性菌株,在乙醇体积分数为12%时仍能生长,并具有较高的NaCl和葡萄糖耐受性,最高耐受质量分数分别为15%和70%。菌株2-2在高粱酶解液中能产生酱香型白酒中的多种重要风味物质,如苯乙醇、糠醇3-羟基-2-丁酮、2,5-二甲基吡嗪和乙烯基愈创木酚等,是酱香型白酒酿造中重要的功能菌株。     

Purification and characterization of two types of chitosanase from Aspergillus sp. CJ22-326

Aspergillus CJ22-326, a fungi strain capable of utilizing chitosan as a carbon source, was isolated from soil samples. Two types of chitosanase (ChiA and ChiB) produced from the culture supernatant of Aspergillus CJ22-326 were purified to an apparent homogeneity identified by SDS–PAGE through ammonium sulfate precipitation, CM-Sepharose FF chromatography, and Sephacryl S-200 gel filtration. Molecular weights of the enzymes were 109 kDa (ChiA) and 29 kDa (ChiB). Optimum pH values and temperature of ChiA were 4.0 and 50 °C, respectively, those of ChiB were 6.0 and 65 °C. The enzyme activities of ChiA and ChiB were increased by about 0.5-fold and 1.5-fold, respectively, by the addition of 1 mM Mn²⁺. However, 2.5 mM Ag⁺, Hg²⁺ and Fe³⁺strongly inhibited ChiA and ChiB activities. Viscosimetric assay and analysis of reaction products of these enzymes, using chitosan as a substrate, by TLC indicated endo- and exo-type cleavage of chitosan by ChiB and ChiA, respectively. ChiB catalysed the hydrolysis of glucosamine (GlcN) oligomers larger than pentamer, and chitosan with a low degree of acetylation (0–30%), and formed chitotriose with chitohexaose as the major products. ChiA released a single glucosamine residue from chitosan and glucosamine oligomers. Both of the activities of ChiA and ChiB increased with the degree of deacetylation of chitosan. The enzyme ChiB had a useful reactivity and a high specific activity for producing functional chitooligosaccharides with high degree of polymerization.     

复合诱变选育壳聚糖酶高产菌种及产酶条件优化

以具有产壳聚糖酶能力的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）G10为出发菌,利用紫外和微波对菌株G10进行复合诱变,选育壳聚糖酶高产菌株,并采用正交试验设计对突变株产酶条件进行优化。结果选育出一株产酶活相对较高的突变株W1-32,优化后的产酶条件为果糖1.3%,胶体壳聚糖0.5%,酵母粉2.0%,MgSO4·7H2O 0.3%,初始pH 7.2,温度28 ℃,转速200 r/min。在此优化条件下,菌株W1-32产壳聚糖酶活为11.82 U/mL,是出发菌株G10的6.9倍。该研究为菌种的选育和进一步研究应用提供理论依据。     

ARTP诱变对Bacillus Cereus产壳聚糖酶酶学性质的影响

壳寡糖由壳聚糖酶水解壳聚糖而成,普遍应用于工业、农业、食品、医学等多个领域.但壳聚糖酶酶活普遍不高,因此,以前期研究获得的一株产壳聚糖酶的蜡样芽孢杆菌为材料,运用常压室温等离子体(Atmospheric Room Temperature Plasma,ARTP)诱变技术进行处理,诱变后壳聚糖酶较原始壳聚糖酶酶活更高,具...     

淡紫紫孢菌的筛选、鉴定及产壳聚糖酶固体发酵条件优化

目的:从全国各地土样中分离纯化出一株产壳聚糖酶活性较高的真菌M7a,并优化其固体发酵产酶条件。方法:综合形态学观察和18S rDNA序列测定进行鉴定,采用单因素和响应面设计确定其最佳固体发酵产壳聚糖酶条件。结果:菌株M7a被鉴定为淡紫紫孢菌,其最佳固体发酵产壳聚糖酶条件为:10 g/L胶体壳聚糖+5 g/L葡萄糖,10 g/L蛋白胨,豆粕麸皮质量比7∶5,初始pH值为6.0,发酵温度33℃及发酵时间5.5 d。产壳聚糖酶优化后达到16.80 U/mL,是初始条件的5.1倍。SDS-PAGE和酶谱分析发现该菌株产胞外分子质量为40.0 ku的壳聚糖酶,且无同工酶。结论:本研究筛选鉴定出一株新颖且产壳聚糖酶活力较高的淡紫紫孢菌M7a,优化了固体发酵条件,提高了产酶水平,为淡紫紫孢菌壳聚糖酶的分离纯化和应用提供了理论基础。     

产壳聚糖酶海洋Paenibacillus chitinolyticus CLT08的鉴定及酶学性质研究

目前用于制备壳寡糖的壳聚糖酶具有酶活性较低、酸稳定性较差等问题.本研究从连云港海州湾泥样中筛选产壳聚糖酶菌株,并对菌株进行鉴定、酸稳定性和酶学性质研究.结果表明,通过平板透明圈初筛和摇瓶发酵复筛,获得酸稳定性较好的壳聚糖酶产生菌株CLT08,随后利用形态学特征、生理生化测定及16S rDNA序列扩增与分析,鉴定菌CLT...     

产壳聚糖酶菌株的筛选及壳寡糖性质的研究

采用透明圈法筛选，从天然土样中获得产壳聚糖酶的野生菌株6株。将其中一株高产壳聚糖酶的微生物菌株命名为BK2。用发酵酶液降解壳聚糖，制备壳寡糖。壳寡糖的抑茵性和溶解性，研究结果表明，壳寡糖对一些常见细菌、霉菌、酵母菌等微生物的生长均有不同程度的抑制作用，它在微酸性的条件下，溶解性及抑菌性较好。     

1 株产壳聚糖酶细菌的分离、鉴定和发酵条件优化

从烟台海岸带沙质土壤中分离筛选壳聚糖酶产生菌株,对其进行分类鉴定,优化其发酵条件,为酶法生产壳寡糖提供技术依据。通过透明圈法初步判断产酶能力,液体发酵复筛测定酶活力,筛选到酶活力达36.20 U/mL的菌株amyP216。通过菌体形态、菌落特征、生理生化及16S rDNA序列分析鉴定菌株amyP216为莫哈韦芽孢杆菌（Bacillus mojavensis）。通过单因素和正交试验确定最佳发酵条件为：胶体壳聚糖添加量20 g/L、酵母浸粉添加量12.5 g/L、吐温-80添加量1.0 g/L、初始发酵pH 6.0、发酵温度30 ℃。在最优条件下利用5 L自控发酵罐培养45 h壳聚糖酶活力可达到80.60 U/mL,较优化前（36.20 U/mL）提高了1.2 倍。莫哈韦芽孢杆菌amyP216是一株壳聚糖酶活力较高的生产菌株,具有潜在的研究和应用价值。     

产壳聚糖酶海洋真菌鉴定、寡营养培养基优化及廉价培养基研究

对筛选出的产壳聚糖酶海洋真菌进行了rDNA-ITS序列分析技术鉴定,确定该菌为Penicillium oxali-cum,这是首次报道该菌属具有产壳聚糖酶的能力。该研究旨在为工业化发酵生产壳聚糖酶提供实验指导。实验在已确定的寡营养培养基的基础上,探讨适宜碳源、氮源、耐盐性、耐酸性、摇床转速等发酵因素对产壳聚糖酶的影响,并探索不同种类的廉价培养基发酵产酶。结果显示黄豆粉培养基的产酶效果较为理想,最终确定培养基为(g/L海水):黄豆粉25 g,酶活力最高为8.5 U/mL,该培养基成本不足原发酵培养基成本的5%,为微生物工业化应用生产壳聚糖酶提供了直接的理论和实验基础。     

Heat-enhanced production of chitosanase from Streptomyces griseus in the presence of liposome

The effects of heat stress and liposome treatment on the growth of Streptomyces griseus cells and chitosanase production were investigated on the basis of using the designed strategy of a stress-mediated bioprocess. The effective conditions for increasing the interaction between chitosanase and the 1-palmitoyl-2-oleoyl-3-phosphocholine (POPC) liposome under heat stress condition were determined on the basis of the results of circular dichroism (CD) and dielectric dispersion analysis (DDA). Under these effective conditions, S. griseus cells were cultivated for the effective production of chitosanase. The results obtained from both CD spectra and DDA showed that heat stress enhances the interaction of the POPC liposomes and chitosanase. The strongest interaction between them could be obtained in the specific temperature range of 40-45 degrees C. The enhancement of the target chitosanase production was conducted under heat stress at 41 degrees C in the presence and absence of the POPC liposomes. The growth rates of S. griseus cells in the cases of heat (41 degrees C) and heat (41 degrees C)/POPC treatments were respectively 1.2 and 1.4 times higher than that obtained under the control condition. In the heat (41 degrees C) and heat (41 degrees C)/POPC treatments, chitosanase activity increased to 1.8 and 2 times, respectively, higher than that obtained under the control condition. Heat stress and the addition of the POPC liposomes could therefore be utilized to induce the potential functions of bacterial cells for the enhancement of the final target production.