基因工程重组酵母植酸酶性质研究

对基因工程重组酵母所产的植酸酶进行分离和纯化 ,并考察纯化酶的酶学性质。该植酸酶酶蛋白分子量为 85 .2kD ;有 2个pH活力峰 :pH 2 .0和 pH 5 .0 ;最适温度为 5 0℃ ;在 3 7℃下以植酸钠为底物的反应初速度为 3 3 .5 μmol/(min·mL) ,米氏常数Km 为 0 .71mmol/L ;Ca2 +对此酶有较强的激活作用 ,Zn2 +、Fe2 +、Cu2 +、Al3+和Fe2 +对其有较强的抑制作用 ,而K+、Na+和Mg2 +对酶活性影响不大。     

白头翁皂苷H3糖苷酶的分离纯化及酶性质

对Absidiasp.P39r所产白头翁皂苷H3糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯的酶蛋白,并对其性质做了进一步研究。结果表明,该酶分子质量约为40ku;最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.0;在pH 4.0~7.0,温度低于40℃条件下具有相对稳定的酶活力;金属离子Na+、K+、Mg2+对酶反应无显著影响,而Fe3+、Cu2+、Zn2+对其有较强的抑制作用;米氏常数为17.01mmol/L,最大反应速度为0.38mmol/(L·min)。     

黑曲霉植酸酶的纯化及性质研究

对黑曲霉液态发酵植酸酶的纯化及其性质进行了初步探讨.采用葡聚糖凝胶过滤及纤维素离子交换层析对粗酶液进行纯化,电泳显示为单一谱带,该酶的相对分子质量为63000.研究显示其性质为:37℃的条件下以植酸钠为底物的米氏常数为0 31mmol/L,该酶最适pH为5 5,最适作用温度为55℃.研究了金属离子对植酸酶活力的影响.     

储粮主要危害性霉菌过氧化氢酶特性研究

从不同来源的储粮样品中分离了4株灰绿曲霉、3株白曲霉,将培养后菌体破碎得到的粗酶液分别经硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析纯化得到过氧化氢酶.对分离酶的主要特性研究结果表明,这些过氧化氢酶的最适温度均为35℃左右,在水溶液中对热不稳定.酶催化适宜的pH范围为4～9,最适pH均在7 0左右,酶的Km值在33.3～41.7mmol/L范围,金属离子及化合物对酶活力的影响基本相同;1mmol/L浓度的Cu2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+对酶活力有激活作用,1mmol/L浓度的巯基乙醇、Fe3+、Ca2+对酶活力有抑制作用,1mmol/L的NaN3、Hg2+可使酶完全失活.该特性研究为酶学方法测定储粮霉菌的应用奠定了基础.     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

白头翁皂苷糖苷酶的纯化及其酶学性质

本实验对由Absidiasp.B00菌产的白头翁皂苷糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯酶蛋白,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为79 ku,酶反应的最适pH和温度分别为5.0和40℃,在40℃以下,pH 3.0~7.0条件下稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Zn2+、Cu2+对其有很明显的抑制作用;酶反应动力学研究表明,vmax=0.16 mmol/(L.h),km=7.17 mmol/L。     

假单胞菌Ⅷ T 39壳聚糖酶的纯化和性质研究

粗酶液经硫酸铵盐析、透析、脱盐、SephadexG-100柱层析,假单胞菌ⅧT39壳聚糖酶被纯化了19.72倍,SDS-PAGE鉴定为一条带.试验表明,该酶为内切型水解酶,无CMCase活性,最适pH5.6～6.0,最适作用温度60～70℃,纯酶作用于可溶性壳聚糖的米氏常数为1.67mg/mL,最大反应速度为2.56μmol/mL.min.SDS-PAGE测定的相对分子质量为51.3×103.Mn2+、AL2+、Co2+对该酶有激活作用,Ag+、Cu2+、Fe2+、Fe3+、Zn2+对酶有强烈抑制作用.     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

植酸酶产生菌株的酶活力研究

从土壤中分离、纯化出植酸酶产生菌株,对其中的青霉的曲霉进行酶活力的测定,结果曲霉的酶活力高于青霉,曲霉的产酶水平较高。     

植酸酶毕赤酵母基因工程菌高密度发酵

高密度发酵是提高发酵产品、产量的一个非常有效的手段。对一株巴斯德毕赤酵母的植酸酶工程菌Gs115 /phyAⅡ ,采用酵母高密度发酵方法 ,葡萄糖的补加采用逐渐增加的方式 ,控制溶氧和还原糖浓度 ,获得细胞密度为 80g/L。甲醇诱导后 ,最高植酸酶活力达到 4 .1× 10 4U/mL。     

植酸酶毕赤酵母基因工程菌高密度发酵

高密度发酵是提高发酵产品、产量的一个非常有效的手段。对一株巴斯德毕赤酵母的植酸酶工程菌Gs115 /phyAⅡ ,采用酵母高密度发酵方法 ,葡萄糖的补加采用逐渐增加的方式 ,控制溶氧和还原糖浓度 ,获得细胞密度为 80g/L。甲醇诱导后 ,最高植酸酶活力达到 4 .1× 10 4U/mL。     

高产植酸酶酵母Candida Krusei WZ—001的等离子束诱变选育

从土壤中筛选得到的 1株高产植酸酶酵母菌CandidaKruseiWZ 0 0 1 ,利用等离子诱变方法对这一菌株进行诱变 ,获得 1株植酸酶高产突变株 ,其酶活性比出发菌株提高了 98%。比较了N+、H+、Zn2 +3种离子注入菌体的诱变效果 ,实验结果表明N+离子注入效果最佳 ,注入最佳剂量为 5 0× 1 0 13N+/cm2 。     

高产植酸酶酵母Candida Krusei WZ-001的等离子束诱变选育

从土壤中筛选得到的 1株高产植酸酶酵母菌CandidaKruseiWZ 0 0 1 ,利用等离子诱变方法对这一菌株进行诱变 ,获得 1株植酸酶高产突变株 ,其酶活性比出发菌株提高了 98%。比较了N+、H+、Zn2 +3种离子注入菌体的诱变效果 ,实验结果表明N+离子注入效果最佳 ,注入最佳剂量为 5 0× 1 0 13N+/cm2 。     

植酸酶基因在海水小球藻细胞内的表达

为建立海水小球藻外源基因转化系统,使外源植酸酶基因在海水小球藻细胞内获得稳定表达,利用电激法将植酸酶基因与海水小球藻细胞共转化;利用含G418的抗性平板筛选抗性藻株,并对所获得的抗性藻株依次进行PCR检测、Southern杂交分析和植酸酶活性与性质的检测.经过转化处理的微藻细胞在含G418的抗性平板上培养3周后,每个平板有10~30个抗性藻株长出;在这些抗性藻株中,PCR检测的阳性率为40.16%;Southern杂交分析和植酸酶活性检测证明,植酸酶外源基因已经在小球藻细胞中获得正确表达.植酸酶外源基因在海水小球藻细胞内被成功表达.     

制麦过程中添加肌醇六磷酸酯酶对麦芽的影响

研究了在制麦过程中浸麦阶段添加外源植酸酶,对植酸浓度、植酸酶、α-淀粉酶、蛋白酶以及β-葡聚糖酶活力的影响以及麦芽浸出率的变化.结果表明,外源添加的植酸酶随浸麦水进入大麦分解植酸,由3.20 mg/mL降低到2.35 mg/mL.溶解了淀粉及蛋白质,使植酸酶活力由1.25 U/g提高到2.66 U/g,α-淀粉酶活力由...     

克鲁斯假丝酵母植酸酶对植物性饲料中植酸的脱磷作用

在植物性饲料中,磷主要以植酸磷的形式存在,不能被单胃动物有效利用。在饲料中添加植酸酶,水解植酸脱磷,可以提高动物对磷的利用率。本文通过正交试验,确定了克鲁斯假丝酵母(CandidaKrusei)WZ 001植酸酶水解豆粕和麸皮中植酸脱磷的最适作用条件;并模拟动物胃肠pH环境,对克鲁斯假丝酵母WZ 001植酸酶和2种与其酶活相同的商品酶降解饲料中的植酸脱磷的能力进行了比较。结果表明:WZ 001植酸酶水解饲料植酸10h时释放的无机磷量是原游离磷的4.89倍,植酸水解率为67%,均高于酶活相同的2种商品酶。     

克鲁斯假丝酵母植酸酶对植物性饲料中植酸的脱磷作用

在植物性饲料中，磷主要以植酸磷的形式存在，不能被单胃动物有效利用。在饲料中添加植酸酶，水解植酸脱磷，可以提高动物对磷的利用率。本文通过正交试验，确定了克鲁斯假丝酵母(Qandia Krusei)WZ-001植酸酶水解豆粕和麸皮中植酸脱磷的最适作用条件；并模拟动物胃肠pH环境，对克鲁斯假丝酵母WZ-001植酸酶和2种与其酶活相同的商品酶降解饲料中的植酸脱磷的能力进行了比较。结果表明：WZ-001植酸酶水解饲料植酸10h时释放的无机磷量是原游离磷的4．89倍，植酸水解率为67％，均高于酶活相同的2种商品酶。