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硫酯酶在脂肪酸合成中具有解除脂酰CoA的抑制及提高脂肪酸产量的作用。因谷氨酸棒杆菌具有脂肪酸合成潜力,故文章以具有脂酰CoA硫酯酶活性的基因NCgl1600作为研究对象,通过异源表达基因NCgl1600获得其表达产物硫酯酶TesB并研究其酶学性质。通过测定底物特异性发现其对C8脂肪酰基CoA底物活性最高,最适温度为30℃,最适pH值为8.0,金属离子Fe2+、Cu2+、Mn2+、Zn2+、Mg2+和K+对其酶活产生抑制作用,米氏常数Km为56.81 mmol/L。 相似文献
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将来源于草酸青霉菌(Penicillium oxalicum sp.68)的阿拉伯呋喃糖苷酶基因poabf62a进行密码子优化后,在毕赤酵母GS115中重组表达PoAbf62A酶,并分析酶学性质。为进一步提高重组蛋白表达量,通过单因素及响应面分析法优化了重组菌株产PoAbf62A酶的发酵工艺。结果表明,以对硝基苯-α-L-阿拉伯呋喃糖苷(p-nitrobenzene-L-arabinofuranoside,pNPAF)为底物时,重组阿拉伯呋喃糖苷酶PoAbf62A的最适反应pH值为4.5,最适反应温度为40℃;该酶在pH 4.5和40~45℃下较稳定; Al3+、Co2+、Zn2+、Mg2+等金属离子对该酶活性有促进作用,Fe3+、Mn2、Cu2+和Fe2+可抑制其活性;以pNPAF为底物测得酶的Km值为2.46 mmol/L,最大反应速度Vmax为9.05μmol/(... 相似文献
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目的:筛选能够降解褐藻胶的新菌株,对发掘具有潜在产业化价值的褐藻胶裂解酶具有重要意义。方法:以褐藻胶为唯一碳源,从辽宁省大连市渤海湾沉积物中分离出高产褐藻胶裂解酶菌株。通过形态学、生理生化特征和16S rDNA基因序列分析,确定了它们的分类地位,并对其酶学性质进行了研究。结果:通过筛选,得到一株高产褐藻胶裂解酶的菌株并命名为LG-3。结合其形态学特征、生理生化指标检测以及16S rDNA系统发育树分析,初步确定该菌株属于坚强芽孢杆菌(Bacillus sp. LG-3)。LG-3菌株摇瓶发酵24 h后产褐藻胶裂解酶的酶活力为32.11 U/mL。最适的反应温度为30℃,最适p H值为8.0。金属离子Mn2+、Na+、Fe3+促进酶活性,Zn2+、Ag+、Cu2+、Mg2+、Fe2+对酶活有较强的抑制作用。化学试剂β-Mercaptoethanol、urea、EDTA、Triton-100、Tween-80、2,3... 相似文献
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通过向基酒中添加不同浓度的FeCl3、MnCl2、CuCl2,探究这三种金属离子对白酒贮存过程中氨基甲酸乙酯含量变化的影响,结果表明低浓度的Fe3+对白酒中的EC产生具有一定的促进作用,高浓度的Fe3+对白酒中的EC产生具有一定的抑制作用;Mn2+对白酒中的EC产生具有一定的抑制作用,且在一定范围内,Mn2+浓度越大,对白酒中EC产生的抑制效果越好;低浓度的Cu2+对白酒中的EC产生具有一定的抑制作用,高浓度的Cu2+对白酒中的EC产生具有一定的促进作用。 相似文献
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采用超声波预处理-乙醇回流法提取皂荚叶异牡荆素,在单因素试验基础上通过正交试验确定最优提取条件;测定提取物在不同的pH、温度、光照、金属离子及食品添加剂条件下对DPPH自由基的清除率,分析其抗氧化稳定性;并研究提取物对4种革兰氏细菌的抑制效果。结果表明:异牡荆素最优提取条件是乙醇体积分数100%、料液比1∶30(g/mL)、回流时间80 min、回流温度70℃;碱性、光照和金属离子Zn2+、Cu2+、Ca2+、Al3+、Fe3+及H2O2对异牡荆素抗氧化稳定性影响较大,而金属离子Na+、Co2+、K+、Mg2+和温度对其影响较弱;体外抗菌试验证实,相比于其他3种测试菌,皂荚叶异牡荆素对大肠杆菌的抗菌活性最强。 相似文献
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为获得高效的臭氧催化剂,以膨润土作为载体,选择Fe3+、Cu2+、Mn2+、Ni2+、Co2+、Zn2+为活性组分,通过溶液混合法制备负载型催化剂,并以酸性大红模拟印染废水探讨负载型催化剂在催化氧化体系中对酸性大红的降解速率及动力学特点,最终筛选得到最优活性组分;根据正交试验设计获得催化剂最佳制备条件,并通过X射线衍射仪和扫描电子显微镜对其进行表征。试验结果表明:最佳双组分催化剂为膨润土负载Zn-Co催化剂;膨润土负载Zn-Co半峰宽小,晶型好;双组分催化剂最佳制备条件为:煅烧温度400 ℃,煅烧时间3 h,组分浓度1.2 mol/L,锌钴的量比1∶1,淀粉质量1.5 g(对应60 g膨润土)。用在此条件下制得的催化剂处理模拟染料废水时,通入臭氧反应10 min,即可去除 99.92%的酸性大红;且催化剂重复利用4次后,其去除率仍达81.44%。 相似文献
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甘露聚糖酶是一类将甘露聚糖降解为短链甘露寡糖及甘露糖的水解酶。为了开发耐酸耐高温的工程酶,从棘孢木霉(Trichodema asperellum)ND-1中克隆甘露聚糖酶基因TaMan5A并在毕赤酵母(Komagataella phaffii)X-33中成功表达。结果显示,该酶的蛋白质分子质量约为67 kDa。最适pH值和温度分别为4.0和65℃,在pH 2.0~6.0具有较强的稳定性,孵育1 h后仍具有80%的活性,且在20~65℃时,残留酶活力均能达到90%以上。1 mmol/L Co2+、脲和5 mmol/L SDS、Zn2+、Fe2+、Mn2+、Ni2+对TaMan5A的活力都有不同程度的激活作用。由于玉米秸秆富含纤维素与半纤维素,因此进一步确定了TaMan5A水解秸秆的最佳组合条件(玉米秸秆用量0.5 g, TaMan5A用量0.5 g, pH 4.0,水解2 d),并得到玉米秸秆用量和TaMan5A用量对玉米秸秆降解效率影响最大。该研究首次从棘孢木霉ND-1中克隆出... 相似文献
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从上海浦东新区新场镇某农场种植田筛选出1株高产α-环糊精葡萄糖基转移酶的菌株,初步研究其酶学性质,以获得有良好热稳定性和pH稳定性的酶。通过形态学特征、生理生化试验鉴定和16S rRNA序列比对分析,确定该菌株为浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans),命名为P.macerans TLLY7。酶学性质测定结果表明,该酶的酶活性为1.35 U/mL,其最适反应温度为50℃、最适反应pH值为6.0,并且在40~45℃、pH 6.0~9.0稳定性良好。Ca2+、Mn2+和Zn2+对酶表现出促进作用,Fe2+、Cu2+和Co2+则对该酶表现出抑制作用。其中Ca2+对酶的促进作用最强,酶活性促进率为25%,Cu2+对酶的抑制作用最强,酶活性抑制率为33%。K+、Mg2+对酶活性的影响较小。菌株TLLY7所产α-环糊精葡萄糖基转移酶的酶学性质初步研究表明其具有深入研究的价值和应用的潜力。 相似文献
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Peptide hydrolase system of Lactobacillus reuteri CRL 1098, a lactic acid bacteria of sourdough origin, was investigated. This microorganism has a broad range of peptidases consisting of an active aminopeptidase, X-Prolyl-dipeptidylaminopeptidase, dipeptidase and tripeptidase. Aminopeptidase, iminopeptidase and endopeptidase are most likely located in the cytoplasmic fraction showing no detectable association with the cell membrane, while dipeptidase and tripeptidase are mainly associated with the latter fraction. The peptidases are metalloenzymes activated by Co2+ and inhibited by Cu2+, Hg2+, Cd2+ and by metal-complexing reagents. The aminopeptidase activity inhibited by EDTA can be restored by Mn2+ while that of di- and tripeptidase treated with 1,10-phenantroline can be restored by Zn2+ and Co2+, respectively. 相似文献
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A metal-dependent dipeptidase has been purified from a cell-free extract of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus B14 by ammonium sulphate precipitation, anion exchange chromatography, metal chelating affinity chromatography with immobilized Cu2+, and repeated FPLC anion exchange chromatography. The molecular mass of the purified enzyme was estimated to be 51 kD by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis as well as by gel filtration, which indicates that it does not consist of subunits. The enzyme was most active at pH 7 and 50°C. Reducing agents, like dithiothreitol and β-mercaptoethanol, increased enzyme activity while metal chelating agents had an inhibitory effect. Enzyme activity, inhibited by EDTA and EGTA, could be partially restored by Co2+ and Mn2+. The enzyme was most active on dipeptides containing an aminoterminal hydrophobic amino acid such as Leu-Leu and Leu-Gly. Kinetic studies indicated that the dipeptidase had a higher affinity for the first substrate mentioned. The Km-values for both substrates were about 0·56 and 1·23 mM, with turnover numbers of 870 and 480 s−1, respectively. 相似文献
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Ana A.G. Souza Ian P.G. Amaral Albrico R. Espírito Santo Luiz B. Carvalho Jr. Ranilson S. Bezerra 《Food chemistry》2007,100(4):1429-1434
Trypsin-like enzyme was partially purified from the intestine and pyloric caeca of spotted goatfish (Pseudupeneus maculatus) by a simple three steps procedure: heat treatment, ammonium sulphate precipitation and Sephadex G-75 filtration. The enzymes from the intestine and pyloric caeca were 96- and 57.7-fold purified with yield values of 68.1% and 26.1%, respectively. The pyloric caeca enzyme collected from the Sephadex G-75 filtration showed a single band in SDS–PAGE (24.5 kDa). Both enzymes presented identical optima pH (9.0) and temperature (55 °C). After incubation at 45 °C for 30 min, enzymes obtained from intestine remained fully activity while a loss of activity (10%) of enzyme extracted from pyloric caeca was registered. Michaelis constant was not significantly different for trypsin-like enzyme from pyloric caeca (1.82 ± 0.19 mM) and that from the intestine (1.94 ± 0.45 mM) acting on benzoyl-dl-arginine-p-nitroanilide (BAPNA). Finally, their activities were inhibited by the following ions in decreasing order: Al3+ > Zn2+ > Hg2+ = Cu2+ > Cd2+. The effects of Ca2+, Mg2+, Mn2+, Ba2+, K1+, Li1+ and Co2+ showed to be less intensive. The similarities between them provide basis for the proposition of obtaining an attractive protease preparation from the tons of intestine and pyloric caeca, that are usually discarded, from this fish which is an important species exported by North-eastern Brazilian fishery industry. 相似文献
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采用平板透明圈法和摇瓶发酵法筛选尿酸氧化酶高产菌株,并通过菌体形态特征和18S rDNA序列分析进行菌种鉴定。通过产酶发酵试验,优选产酶的最适条件;利用多种技术对尿酸氧化酶进行分离纯化,并通过酶促反应对酶学性质进行研究。结果表明,筛选获得1株尿酸氧化酶高产菌株UR-05,其被鉴定为食腺嘌呤芽生葡萄孢酵母(Blastobotrys adeninivorans)。菌株UR-05所产尿酸氧化酶分子质量约为41.5 kDa,比酶活为215.4 U/mg;该酶的最适温度为30 ℃、最适pH值为8.0;Mg2+和Na+对该酶有激活作用,K+、Ca2+、Mn2+、Zn2+对该酶有抑制作用。菌株UR-05所产尿酸氧化酶在一定条件范围内呈现出较强的活性,具有进一步研究及应用的价值。 相似文献
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从温度、pH值、光照、氧化剂及还原剂、金属离子等方面研究WD02菌株所产红色素的稳定性.结果表明,该红色素在低于40℃条件下较为稳定;对光照较为稳定;在pHS~7环境下保存率较高,适用于微酸性食品的着色;该红色素对还原剂很稳定性,而对氧化剂非常不稳定;Cu2+、Zn2+、M2+、K+、Na+等金属离子对红色素有增色效应,而Fe3+、Fe2+和Ca2+等金属离子能破坏WD02菌株红色素水溶液稳定性并造成红色素损失. 相似文献
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为实现酶法合成高附加值的β-苯丙氨酸,首先化学合成来源于紫衫(Taxus chinensis)的苯丙氨酸变位酶(phenylalanine aminomutase,PAM)基因(Tcpam),构建大肠杆菌重组质粒Pet-sumo-Tcpam,转入大肠杆菌中进行异源诱导表达,采用镍柱亲和层析制备电泳纯的重组酶TcPAM,用于催化合成R-β-苯丙氨酸。结果表明:重组质粒Pet-sumo-Tcpam成功在大肠杆菌中实现高效表达,获得可溶性的重组TcPAM,经过亲和层析制备出电泳纯的重组TcPAM。质谱和圆二色谱检测分析结果表明,TcPAM能够催化α-苯丙氨酸异构化为R构型的β-苯丙氨酸。TcPAM在最适温度30 ℃、pH 9的条件下,酶活力达到4.11 U/mg,金属离子K+、Fe2+和Ca2+对TcPAM的活性影响较小,而Cu2+和Zn2+有强烈抑制性,表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠、Triton X-100和Tween 80对重组酶活力影响较小,相对酶活力保持在90%以上。进一步利用TcPAM催化α-芳香丙氨酸异构合成β-芳香丙氨酸,结果表明:苯环上携带不同基团的α-芳香丙氨酸为底物时,苯环上携带供电子基团比吸电子基团的底物转化率更高,底物的α-氨基容易转移至β位,其中4-MeO-β-苯丙氨酸的产率最高,达到45%,为建立酶法合成R-β-芳香丙氨酸提供了参考。 相似文献
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采用碱提醇沉法制备猴头菇 β-葡聚糖(Hericium erinaceus alkali-extracted polysaccharide,HEAEP),系统研究了不同条件(抗坏血酸浓度、金属离子、温度、pH值等)下抗坏血酸对HEAEP表观黏度的影响,并深入分析了抗坏血酸对HEAEP结构特征的影响.研究结果表明:猴头菇... 相似文献