疏肝健脾活血方对肝星状细胞增殖的影响

目的:采用细胞培养的方法,体外观察疏肝健脾活血方药物血清对转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)诱导的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC-T6)增殖作用的影响。方法:将40只大鼠随机分成正常大鼠血清组,疏肝健脾活血方低剂量组,疏肝健脾活血方中剂量组,疏肝健脾活血方高剂量组。以疏肝健脾活血方给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。采用TGFβ1诱导HSC-T6作为活化的肝星状细胞的研究模型,以不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清作用于体外培养的HSC-T6,分别作用24 h、48 h后,采用CCK-8法检测不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清对HSC-T6增殖的影响。结果:疏肝健脾活血方药物血清作用于TGFβ1诱导的HSC-T6,细胞增殖受到明显抑制。各组作用48 h后,空白对照组OD值为(0.617±0.061),疏肝健脾活血方低剂量组、中剂量组、高剂量组OD值分别为(0.446±0.091)、0.417±0.103)、(0.376±0.065),疏肝健脾活血方各剂量组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常大鼠含药血清组OD值为(0.506±0.015),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:疏肝健脾活血方药物血清对TGFβ1诱导的HSC-T6细胞活化作用增殖有抑制作用。     

猫人参含药血清对胃癌细胞SGC7901增殖和自噬的影响

目的:观察猫人参对胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用及对自噬的影响。方法:体外培养胃癌SGC7901细胞,用不同体积分数的猫人参含药血清处理后,采用CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、p62及mTOR表达水平。结果:猫人参含药血清作用24 h,对胃癌SGC7901细胞有明显的抑制作用,与空白血清组比较,猫人参含药血清组体积分数为0. 156 25%时,差异有统计学意义(P <0. 05),且随着体积分数的增大,抑制作用增强,呈剂量依赖性;作用48 h,与空白血清组比较,猫人参含药血清在体积分数<2. 5%时对胃癌SGC7901细胞有稍微促进增殖作用,在体积分数≥5%时有抑制增殖作用,体积分数≥10%时,差异开始有统计学意义(P <0. 05)。Western blot结果显示:与空白血清组比较,猫人参含药血清能促进胃癌SGC7901细胞LC3B蛋白表达,抑制p62、mTOR蛋白表达(P <0. 05)。结论:猫人参含药血清能抑制胃癌细胞SGC7901的增殖,其作用机制可能与猫人参能调节LC3B、p62、mTOR蛋白的表达,影响自噬相关。     

加味香砂六君子汤抑制胃癌细胞增殖、侵袭及其机制的研究

目的:探讨加味香砂六君子汤含药血清对胃癌细胞SGC7901增殖、侵袭的影响及其机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为空白组,加味香砂六君子汤低剂量组、中剂量组、高剂量组[(1.55、3.1、6.2 g·(kg·d)~(-1)]及5-FU组(0.5 g·L~(-1)),每组5只。对照组灌服等体积生理盐水,按常规方法动物等体积灌胃,每天2次,连续5 d。末次灌胃后1 h固定动物,按无菌操作进行动物颈动脉采血,分离血清,56℃,经0.22μm滤膜抽滤除菌,制备低剂量组、中剂量组、高剂量组含药血清干预人胃癌SGC7901细胞。CCK8法观察不同浓度含药血清对细胞增殖影响;Transwell细胞侵袭实验检测含药血清作用SGC7901后细胞侵袭能力;梯度PCR检测Smo、Ptch1、Gli1的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测Smo、Ptch1、Gli1蛋白表达水平。结果:不同浓度含药血清对SGC7901增殖有明显抑制作用,随着浓度的增加,抑制率更加明显,且各实验组之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,各浓度含药血清作用后SGC7901细胞穿膜细胞数降低(P<0.05);与对照组比较,不同浓度的含药血清可明显降低Smo、Ptch1、Gli1的mRNA表达(P<0.05);各实验组Smo、Ptch1、Gli1蛋白表达也明显减少(P<0.05)。结论:加味香砂六君子汤含药血清对胃癌细胞增殖有抑制作用,抑制细胞侵袭,其机制可能与抑制Hh信号通路活化有关。     

扶正解毒方对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的:探讨扶正解毒方对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的作用。方法:将10只大耳白兔随机分为扶正解毒方高剂量组、中剂量组、低剂量组,对照组,环磷酰胺(CTX)组5组,每组各2只。扶正解毒方高剂量组、中剂量组、低剂量组分别按16 g·kg-1、8 g·kg-1、4 g·kg-1剂量口服灌胃;对照组给予相同剂量生理盐水,每日1次,连灌1周;环磷酰胺(CTX)组第1天予20 mg·kg-1腹腔注射。末次用药后1 h,各组均在无菌条件下心脏采血,分离血清。采用血清药理学方法,对A549细胞株进行体外培养,然后分别加入扶正解毒方高剂量、中剂量、低剂量含药血清、对照组含药血清、CTX含药血清,通过光学显微镜直观法、细胞计数法、MTT法、流式细胞仪法等对A549细胞生长及凋亡指标进行测定。结果:A549细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变;细胞生长曲线提示,扶正解毒方对A549细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系;MMT法提示,扶正解毒方对A549细胞生长的抑制率随浓度的增加而增加,呈效应-剂量依赖关系;流式细胞仪检测显示,细胞凋亡率随着药物剂量的增加和作用时间的延长而增加,药物作用72 h后,扶正解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组凋亡率分别为(6.30±1.01)%、(15.72±1.54)%、(23.40±1.34)%,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:扶正解毒方可抑制肺腺癌A549细胞生长、诱导细胞凋亡。     

补中益气汤含药血清对Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察补中益气汤含药血清对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响,探讨补中益气汤治疗肿瘤的机制。方法:以补中益气汤给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。MTT法检测含药血清对肺癌细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定肺癌细胞细胞凋亡。结果:补中益气汤不同浓度含药血清组与空白对照组比较均可明显抑制肺癌细胞体外增殖,差异有统计学意义(P<0.05);补中益气汤不同浓度含药血清组Lewis肺癌细胞凋亡率与空白对照组比较,明显升高,且随着含药血清浓度的增加,细胞凋亡率明显上升,具有浓度依赖性。结论:补中益气汤含药血清对肺癌细胞体外增殖有明显的抑制作用,且可促进肿瘤细胞凋亡。     

浅蓝菌素对人成骨肉瘤细胞U2-OS在裸鼠体内生长抑制的作用

目的研究浅蓝菌素（cerulenin）对人成骨肉瘤细胞U2-OS在裸鼠体内生长抑制作用。方法建立人成骨肉瘤细胞U2-OS BALB/C裸鼠瘤模型。18只成瘤裸鼠按随机数字表分成3组,每组6只;对照组（DMSO溶剂）、低剂量cerulenin组（0.2 mL cerulenin配制液40 mg.kg-1.次-1）、高剂量cerulenin组（0.2 mL cerulenin配制液80 mg.kg-1.次-1）于腹腔隔日注射连续6次。动态观察3组肿瘤体积及裸鼠质量变化,用药结束后18 d处死裸鼠,测量瘤重、计算瘤重抑制率,测量肿瘤体积、计算肿瘤体积抑制率。肿瘤组织行形态学观察。TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况。结果高、低剂量cerulenin组肿瘤体积抑制率分别为51.2%和24.2%,瘤重抑制率分别为49.1%和25.5%。各组间瘤体体积与瘤重比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。瘤体组织学显示cerulenin组较对照组出现明显的细胞凋亡的超微结构改变,瘤细胞体积较小,多数细胞微绒毛消失,胞质密度增高。TUNEL法显示高、低剂量cerulenin组,对照组癌细胞凋亡率为（17.1±1.2）%、（10.3±0.8）%、（3.5±0.5）%,3组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 cerulenin能够有效诱导人成骨肉瘤细胞U2-OS在裸鼠体内凋亡,抑制肿瘤的生长。     

灵芪胶囊对直结肠癌lovo细胞凋亡相关基因表达的影响

目的:观察灵芪胶囊对直结肠癌lovo细胞凋亡相关Caspase3基因表达的影响。方法:灵芪胶囊含药血清根据浓度不同分为灵芪胶囊高剂量组、灵芪胶囊中剂量组、灵芪胶囊低剂量组、阳性对照组及空白对照组,将对数生长期的lovo细胞培养至细胞贴壁后,分别放入相应的含药血清,48 h后收集细胞,应用蛋白质印迹法检测各组Caspase3的含量。结果:空白对照组Caspase3蛋白表达量较高,阳性对照组和灵芪胶囊高剂量组Caspase3蛋白表达量小于空白对照组,其结果具有明显统计学差异(P<0.01)。灵芪胶囊中剂量组、灵芪胶囊低剂量组Caspase3表达量与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体外条件下,灵芪胶囊对lovo细胞具有一定的抑制作用,能够使细胞凋亡发生。灵芪胶囊导致细胞发生凋亡的作用机制可能与抑制Caspase3基因的表达情况有关。     

甘参复方对大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的:观察甘参复方对大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的影响,并分析甘参复方抗肝纤维化的分子机制。方法:采用体外培养的永生化细胞株大鼠肝星状细胞(hepatic sellate cell-T6,HSC-T6)。将甘参复方稀释成6个不同的浓度梯度,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,筛选出甘参复方对HSC-T6的有效作用浓度。之后将细胞分为阴性对照组,甘参复方低浓度组、中浓度组、高浓度组。采用ELISA法检测各组细胞上清液中的Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,ColⅠ)水平。然后,应用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)(1 mg·L~(-1))刺激HSC-T6,观察甘参复方对刺激后细胞的增殖和胶原合成的影响。结果:甘参复方的6个不同浓度对HSC-T6的增殖有明显抑制作用,且浓度为0.5μmol·L~(-1)时抑制作用最明显(P<0.01)。ELISA结果显示,甘参复方能够降低细胞上清中的ColⅠ含量,且与CCK-8结果相吻合,在0.5μmol·L~(-1)时ColⅠ分泌最少。甘参复方能够抑制TGF-β1刺激后的HSC-T6增殖和胶原合成。结论:甘参复方能够显著抑制星状细胞的增殖以及ColⅠ的表达,这是甘参复方抗肝纤维化的作用机制之一。     

化痰消瘤方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的:探讨化痰消瘤方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法:体外培养肺腺癌A549细胞,分为化痰消瘤方低剂量组、中剂量组、高剂量组,环磷酰胺组,空白组。分别于含药血清中培养24 h、48 h、72 h后,进行观察和检测,独立重复实验3次。采用MTT法检测细胞增殖情况,显微镜下观察细胞形态学变化。结果:各药物干预组吸光度在同一时段内与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);化痰消瘤方各剂量组吸光度同一时段内与环磷酰胺组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。化痰消瘤方含药血清对A549细胞增殖的抑制率随药物浓度的增加不断提高。除化痰消瘤方低剂量组外,其余各组随着时间的延长,对A549细胞增殖的抑制率不断提高。显微镜下可见化痰消瘤方各剂量组肺腺癌A549细胞出现胞膜皱缩内陷的细胞凋亡征象。结论:化痰消瘤方含药血清可抑制A549细胞增殖,且具有一定的浓度及时间依赖性,同时可诱导细胞凋亡。     

扶正消瘤颗粒含药血清对肝癌HepG2细胞体外增殖和凋亡相关蛋白的影响

目的:观察扶正消瘤颗粒含药血清对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡相关蛋白的影响。方法:60只雄性SD大鼠,随机分为6个组,每组10只,分别为扶正消瘤颗粒低剂量组、扶正消瘤颗粒中剂量组、扶正消瘤颗粒高剂量组、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组、联合组、对照组。中药各剂量组给予不同剂量扶正消瘤颗粒灌胃;5-FU组给予5-FU腹腔灌注;联合组给予中剂量的扶正消瘤颗粒灌胃,同时给予5-FU腹腔灌注;对照组给予生理盐水灌胃。采用四甲基偶氮唑盐比色法检测肝癌HepG2细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法检测肝癌HepG2细胞凋亡;Western-Blot法观察各组肝癌HepG2细胞P53蛋白、Bcl-2蛋白和Survivin蛋白的表达。结果:扶正消瘤颗粒含药血清可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,并呈时间、剂量依赖性;其中联合组对肝癌HepG2细胞的抑制率最高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度扶正消瘤颗粒含药血清均可诱导肝癌HepG2细胞的凋亡,联合组凋亡率最高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,各扶正消瘤颗粒含药血清组均可下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达,增强P53蛋白的表达。结论:扶正消瘤颗粒含药血清可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用可能是通过抑制Bcl-2和Survivin蛋白的表达,增强P53蛋白的表达实现的。