木瓜蛋白酶制备大豆抗癌活性肽的研究

以大豆分离蛋白为原料,以细胞生长抑制率为指标,用木瓜蛋白酶对其进行酶解,得到大豆抗癌活性肽。木瓜蛋白酶的最佳作用条件为:温度55℃、酶添加量7 000 U/g、反应pH 7.5、底物质量分数6%、酶解时间4 h。在抗癌活性肽制备过程中,对水解度和肽活性之间的关系进行了研究。结果表明,水解度与大豆肽的抗癌活性不呈线性关系。用10 000 u和5 000 u的超滤膜处理木瓜蛋白酶的酶解产物,在不同分子质量的超滤组分中,分子质量小于5 000 u组分的癌细胞生长抑制率最高,达32.58%。     

中华绿螂抗氧化肽的提取及其抗氧化性

利用响应面法和超滤法对中华绿螂中抗氧化肽的木瓜蛋白酶水解提取工艺条件进行优化。在单因素试验基础上,利用响应面法分析建立二次回归模型。以酶与底物浓度比值([E]/[S])、酶解温度、酶解p H和酶解时间为自变量,DPPH自由基清除率为响应值,研究各因素及其交互作用对自由基清除率的影响。根据响应曲面图及其等高线图,确认木瓜蛋白酶水解中华绿螂制备抗氧化肽的最优工艺条件:底物浓度6%、pH 4.11、酶解温度40℃、酶解时间3.09 h。在此条件下,中华绿螂抗氧化肽对DPPH自由基清除率为97.64%。所得回归模型高度显著(p<0.0001),与理论预测值基本吻合。根据超滤试验可知,超滤膜截留分子质量3000~1000 Da时抗氧化性最佳,超滤所得可溶性蛋白酶解物的抗氧化性为94.96%。     

羊胎盘多肽的制备及其清除自由基能力的研究

利用黑曲霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌作为发酵羊胎盘菌种,筛选出黑曲霉作为发酵羊胎盘的菌株,制备羊胎盘活性肽.通过单因素试验研究了料液pH、碳源含量、发酵时间对制备羊胎盘抗氧化肽工艺的影响,在此基础上,以DPPH自由基的清除率为指标,通过响应面法优化得到了最佳发酵工艺条件为pH值4.61、葡萄糖添加量2.79％、发酵时间76.38h,此条件下的DPPH清除率为83.78％;对发酵液进行超滤处理得到6组分,其中60％的产物分子质量均＜10 000u,不同组分的抗氧化活性大小为分子质量为3 000～10 000u的产物高于分子质量＜3 000u的产物,并得出了发酵液中不同分子质量段的多肽含量分布曲线.     

牡蛎蛋白酶解肽制备工艺优化及其对小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌和氧化应激的影响

为探究牡蛎在药食同源领域的研究与开发,本实验采用响应面法优化牡蛎蛋白酶解肽酶法制备工艺,并研究其对小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌和氧化应激的影响。以水解度为考察指标,采用仿生酶解法,在单因素实验的基础上,根据响应面分析法优化牡蛎蛋白酶解肽的制备工艺。同时构建过氧化氢（H2O2）诱导的小鼠睾丸间质细胞（TM3）氧化损伤模型,通过细胞存活率、DAPI染色、睾酮（Testosterone,T）分泌量,超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量研究牡蛎蛋白酶解肽对TM3细胞睾酮分泌和氧化应激的影响。结果表明：牡蛎蛋白酶解肽的最佳酶解条件为：料液比1:10 g/mL、胃蛋白酶量为1.1%、酶解时间为1.0 h、胰蛋白酶量为2.1%、酶解时间3.1 h,此条件下的水解度为39.43%±0.42%。牡蛎蛋白酶解肽对H2O2诱导的TM3细胞均有不同程度的增殖活性,可显著（P<0.05）增加TM3细胞睾酮分泌量、SOD酶活力和降低（P<0.05）MDA含量,并且在牡蛎蛋白酶解肽物质量浓度为200μg/mL时效果最好。综上所述,响应面法优化酶解工艺有效可行,牡蛎蛋白酶解肽可极显著的促进TM3...     

超滤技术在花生抗氧化肽制备中的应用

花生肽本身有抗氧化作用,经过一定条件的超滤膜处理后,花生肽的抗氧化作用得到了显著提高。通过实验表明,抗氧化作用的肽是分子量小于2000u的组分,并且利用响应面法优化了2000u的超滤膜,超滤的最适条件为超滤压力0.165MPa、pH6、温度30℃、时间110min。在此超滤条件下响应面分析预测值为50.1752L/m2.h,并且通过验证实验得以验证。     

羊骨抗氧化肽酶解法制备和响应面工艺优化

研究了羊骨抗氧化肽酶法提取工艺及其氨基酸组成.在单因素实验基础上,通过响应面分析法优化羊骨抗氧化肽的提取工艺,利用超滤分离获取不同截留相对分子质量的肽段,采用水杨酸法、DPPH法和铁离子还原法研究梯级肽的抗氧化活性并分析其氨基酸组成.结果表明,碱性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解条件为pH 8.9、酶添加量6 400 ...     

小麦蛋白双酶酶解制备高抗氧化性小麦肽研究

小麦肽是小麦蛋白的主要酶解产物,抗氧化性是小麦肽的主要功能特性。为制备高抗氧化性小麦肽,选择碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步酶解方式,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O2-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等为指标,采用响应面法优化两种酶的最佳酶解工艺参数,并对最终酶解物进行超滤分级分离。结果表明,高抗氧化性小麦肽制备的最佳工艺参数:第1步碱性蛋白酶在底物含量11.2%、酶含量2 200 U/g、pH 8.5、温度55℃条件下酶解4.3 h;第2步风味蛋白酶在酶含量1 070 U/g、pH6.5、温度50℃条件下酶解2.2 h。最终酶解物DPPH自由基清除率为75.36%,O2-·清除率为74.51%,·OH清除率为76.29%,其中分子质量小于1 000 u组分自由基清除率最高。研究结果说明小麦蛋白酶解物具有良好的抗氧化活性,这可为小麦蛋白的深加工利用提供理论参考。     

响应面法优化米糠蛋白的酶解工艺

通过单因素试验及响应面分析法,对米糠蛋白酶解制备抗氧化性米糠肽的工艺进行优化。在单因素试验的基础上,利用响应面法优化酶解条件,以酶解时间、温度、p H为自变量,以酶解后样品对超氧阴离子自由基清除率为响应值,根据Box-Benhnken中心组合设计原理,研究3个自变量及其交互作用对样品的超氧阴离子自由基清除率的影响。通过不同酶对米糠蛋白的水解度试验,确认碱性蛋白酶为最高效水解酶,在此前提下,响应面优化的最佳酶解条件为:酶解温度50℃,酶解时间4.5 h,p H 10,此条件下,超氧阴离子自由基清除率实际值为40.27%。米糠肽的相对分子质量分布测定结果表面米肽相对分子质量分布在142 u~21 281 u之间。     

响应面法优化超声辅助酶解制备藏系羊胎盘肽工艺及抗氧化能力分析

以藏系羊胎盘为原料,选取水解度、肽得率和抗氧化能力为指标,在蛋白酶种类筛选、双酶组合方案确定的基础上,通过单因素试验和响应面试验优化超声波辅助复合酶解制备羊胎盘肽的工艺条件,并分析其氨基酸组成和分子质量分布。结果表明,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶同步复合酶解效果优于其他蛋白酶组合,水解度和肽得率分别为37.24%和13.54%。响应面优化结果显示各因素对水解度影响的主次顺序为：超声时间＞超声温度＞酶解时间＞超声功率;优化后的最优工艺参数为超声时间16.5 min、超声温度25.5 ℃、超声功率438 W、酶解时间4.9 h,该最优条件下的水解度为55.22%,肽得率为18.52%,抗氧化能力（Trolox当量）为1.08 mmol/L。藏系羊胎盘肽中富含谷氨酸、甘氨酸和天冬氨酸等,分子质量低于2 000 Da的肽比例为95.02%,绝大多数为小分子低聚寡肽。可见,超声波辅助酶解制备羊胎盘肽的工艺不仅能有效改善酶解效果,还能制得具有良好抗氧化能力的小分子肽。     

酶解中国毛虾制备低分子肽的研究

以中国毛虾为原料,采用酶法制备低分子肽。利用响应面法优化了Alcalase4L酶水解中国毛虾的工艺参数:温度57.1℃、pH8.0、加酶量为46mL/kg,酶解产物的平均肽链长从0.5h的14.02逐渐降低到8h的3.96。采用凝胶层析法测定了酶解产物的分子质量分布,不同时间酶解产物的SephadexG-15凝胶色谱图中均出现3个吸收峰,前2个峰的分子质量在18722～641u和641～35u之间。从峰值变化可以判断出,随着酶解的进行,低分子肽的量逐渐增加。     

酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离与稳定性研究

目的：研究酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离和稳定性,为其开发应用提供基础数据。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽,比色法测定其抗氧化能力。结果：超滤分级后得到分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽对O2－•、•OH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的IC50分别为18.85 mg/mL、3.13 mg/mL、35.23 μg/mL。该抗氧化肽经过4 h胃蛋白酶+胰蛋白酶处理前后对DPPH自由基清除率分别为81.05%、82.26%;在pH 4、8条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率分别为98.02%、11.80%（100 μg/mL）;在温度95 ℃条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率为87.11%（100 μg/mL）;用浓度为1.0 mol/L的NaCl处理6 h,相比对照组,对DPPH自由基清除率由51.58%下降到22.68%（60 μg/mL）。结论：超滤后得到的分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的抗氧化能力比酶解原液有一定提高;且在酸性、高温、脱盐处理后对DPPH自由基的清除能力保持较好;胃肠道消化酶对其DPPH自由基清除能力的影响不显著（P＞0.05）。     

超滤对缫丝蚕蛹蛋白肽感官品质的影响

目的：分析酶解缫丝蚕蛹蛋白所得肽经超滤处理后的性质,为其深度开发利用提供参考。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白肽,气相色谱-质谱联用仪（gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS）测定挥发性成分。结果：缫丝蚕蛹蛋白肽经超滤后各组分（5.0 mg/mL）的明度（L*值）、偏向绿程度（a*值）、偏向黄程度（b*值）均为大于3 000 D组分＞酶解原液＞200～3 000 D组分,且颜色由中黄色（酶解原液）变为深黄色（大于3 000 D组分）和浅黄色（200～3 000 D组分）;121 ℃灭菌处理对它们的色泽无显著影响（P＞0.05）;各组分吸湿性强度为200～3 000 D组分＞酶解原液＞大于3 000 D组分,其中200～3 000 D组分的最高吸湿率达到42.24%;超滤后缫丝蚕蛹蛋白肽的气味由刺激性难闻气味（脱脂蚕蛹蛋白粉）转变为有肉香（200～3 000 D组分）、果香及甜香味（大于3 000 D组分）。结论：超滤提升了缫丝蚕蛹蛋白肽的感官品质。     

玉米蛋白酶解物的解酒作用

采用碱性蛋白酶Alcalase和复合蛋白酶Protamex分步对膨化的玉米蛋白粉进行酶解改性,应用动物实验的方法研究玉米蛋白酶解物的解酒作用。结果表明：玉米蛋白酶解物中分子质量小于1 000 u的组分占87.76%,含有较高比例的谷氨酸、亮氨酸和丙氨酸;与酒精模型组相比,双酶酶解得到的玉米蛋白酶解物可使小鼠血液中乙醇含量降低59.43%;在一定时间范围内,玉米蛋白酶解物可以提高小鼠胃中乙醇脱氢酶和肝脏中超氧化物歧化酶活性,降低肝脏中丙二醛含量,增加谷胱甘肽含量。     

干酪乳清酶解产物抗氧化肽的分离和纯化

干酪乳清Alcalase 2.4L酶解的最优条件,即酶解时间为2 h、pH 9.5、酶与底物比为4%、酶解温度为50 ℃。利用超滤、葡聚糖凝胶层析和三羟甲基氨基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（tricine-sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,tricine SDS-PAGE）等方法从干酪乳清中提取抗氧化性蛋白肽。分别考察操作压力、料液温度、料液pH值、操作时间对超滤膜膜通量的影响。乳清酶解物超滤的最佳条件为：压力0.25 MPa、温度30 ℃、时间120 min、初始pH 9.0。分子质量4 000～6 000 D肽的水解液脂质过氧化抑制率最高,达到47.28%。利用Sephadex G-50型葡聚糖凝胶进行纯化,将分离的组分进行Tricine-SDS-PAGE分析和脂质过氧化抑制率的测定。第34管洗脱液的脂质过氧化抑制率最高,分子质量范围为4 000～4 100 D。     

光棘球海胆多肽的制备及其生物活性

光棘球海胆（Strongylocentrotus nudus）又称大连紫海胆,是我国主要的经济型海胆之一,其味道鲜美、营养丰富,具有较高的食用和药用价值。本实验以大连紫海胆为研究对象,采用酶解法制备海胆活性肽,并对其部分生物活性进行研究。使用木瓜蛋白酶对海胆黄进行水解,得到分子质量分布范围＜1、1～3、3～5、5～10 kD和＜10 kD的5 种海胆多肽组分。活性研究结果显示,在多肽终质量浓度为200 μg/mL时,不同分子质量分布的海胆多肽均可促淋巴细胞生长。在这一质量浓度下,除了小于1 kD的多肽,其他多肽均对人宫颈癌细胞（HeLa细胞）增殖有一定抑制作用,对腹腔巨噬细胞吞噬能力有一定促进作用。在多肽终质量浓度为50 μg/mL时,不同组分海胆多肽对叔丁基脂氢过氧化物所致的Chang肝细胞氧化损伤均可发挥直接和间接抗氧化保护作用。然而,不同分子质量分布的海胆多肽均可抑制补体的经典途径活性,且呈现明显剂量-效应关系。上述结果表明,海胆多肽对细胞免疫和体液免疫功能具有潜在的调节作用,其功能活性的多向性值得深入研究。     

枯草芽孢杆菌木聚糖酶的克隆表达及其酶解两种木聚糖的产物分析

通过基因克隆方法获得枯草芽孢杆菌木聚糖酶XynA,考察经镍离子亲和柱纯化后的XynA分别在桦木木聚糖和毛榉木木聚糖中的酶解情况,利用薄层色谱法（thin layer chromatography,TLC）及基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF/MS）法鉴定木聚糖酶XynA的酶解产物。运用MALDI-TOF/MS分析枯草芽孢杆菌木聚糖酶XynA酶解桦木木聚糖和毛榉木木聚糖产物不同的聚合度寡糖的分布情况。结果表明：在桦木木聚糖酶解液中,产生的中性木寡糖主要为木二糖（X2）和木三糖（X3）,酸性木寡糖聚合度为4～12,并且每一个酸性木寡糖上仅连接着一个甲基葡萄糖醛酸侧链（MeG）。在毛榉木木聚糖酶解液中,产生的中性木寡糖与在桦木木聚糖酶解液中相同,酸性木寡糖的结构相似,聚合度为4～16。因此木聚糖酶XynA具有生产木二糖（X2）和木三糖（X3）以及酸性木寡糖（MeGXn）的功能。     

正交试验优化哈蟆油蛋白双酶法水解工艺

目的：考察双酶法制备哈蟆油蛋白的最佳工艺。方法：以哈蟆油为原料,采用柠檬酸浸提和水煎煮的方法提取哈蟆油蛋白,先后加入胃蛋白酶和碱性蛋白酶进行酶解,根据酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量分布,应用单因素和正交试验确定哈蟆油蛋白酶解的最佳条件。结果：最佳酶解条件为胃蛋白酶与底物比（m/m）1∶2 000、酶解时间2 h、碱性蛋白酶与底物比（m/m）1∶100、酶解时间6 h,酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量小于5 000所占的比例为94.85%,哈蟆油蛋白中蛋白质含量为49.85%。结论：胃蛋白酶与碱性蛋白酶结合使用可以有效地降低哈蟆油蛋白的相对分子质量,利于人体吸收。     

酶法制备花生粕醒酒多肽

为更合理有效地利用花生粕资源,制备具有醒酒作用的花生粕多肽,本实验以Alcalase AF 2.4L蛋白酶酶法制备花生粕醒酒肽,经分级分离后,通过体外和动物实验验证其醒酒效果。结果表明,花生粕醒酒肽制备最佳工艺条件为：酶解时间3 h、酶解温度35 ℃、pH 9.5及料液比1∶30（m/V）。该条件下乙醇脱氢酶（alcoholdehydrogenase,ADH）激活率及多肽得率均较高。经分级分离后,分子质量在1 000～3 000 D的多肽对ADH激活作用最强,激活率为30.47%。G25凝胶色谱分析表明,花生粕多肽中小于3 000 D的多肽占89.55%,ADH激活率为29.25%。动物实验证明,花生粕多肽对小鼠有显著的防醉醒酒作用。小鼠血液乙醇含量测定结果表明,高剂量的花生粕多肽在60～90 min内能显著降低小鼠血液中的乙醇含量。     

鸡胸软骨Ⅱ型胶原免疫活性肽的制备及其性质

以水解度为指标,优化了中性蛋白酶酶解鸡胸软骨Ⅱ型胶原的条件,在此基础上制备不同水解度Ⅱ型胶原酶解复合物,并以淋巴细胞增殖率为指标对其免疫活性进行研究。结果表明,中性蛋白酶的酶解能力最强,其最佳酶解条件为：酶解温度50 ℃、pH 7.5、底物质量浓度25 mg/mL、加酶量40 U/mg、酶解时间150 min。当Ⅱ型胶原在水解度为18%时,其对淋巴细胞的增殖活性达到58.69%。Ⅱ型胶原酶解复合物的质量浓度对淋巴细胞的增殖率也有显著影响,当其质量浓度达到1 mg/mL时,对淋巴细胞增殖能力达到最大。免疫活性较高的Ⅱ型胶原酶解复合物的分子质量主要分布于1 000～180 D范围内,占其总含量的75.21%。     

胰蛋白酶制备鹰嘴豆抗氧化肽的条件优化

以碱溶酸沉法制备的鹰嘴豆分离蛋白为酶解底物,以超氧阴离子自由基清除率为响应值,采用响应面法优化胰蛋白酶制备鹰嘴豆抗氧化活性肽的条件。结果表明：在整个酶解过程中,所制备的鹰嘴豆抗氧化肽具有显著的抗氧化活性,胰蛋白酶制备鹰嘴豆抗氧化肽的最佳酶解条件为：底物质量分数2%、加酶量（[E]/[S]）1 800 U/g、温度32 ℃、pH 7.0、时间35 min。此条件下所制备的鹰嘴豆抗氧化肽的超氧阴离子自由基清除率为67.59%。鹰嘴豆分离蛋白水解液经超滤膜系统纯化获得了截留相对分子质量1 kD以下的水解液,并通过液相色谱-质谱联用分析,发现了一种相对分子质量为668.40、序列为RQLPR的亲水性五肽。