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酶联免疫吸附法快速测定不同样品
基质中三聚氰胺 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探求不同样品基质中三聚氰胺残留量的快速检测方法.为快速筛查不同种类食品中非法添加三聚氰胺提供技术保障.方法 采用酶联免疫吸附法在奶制品(奶粉、液态奶)、成品饲料(鸡饲料、猪饲料)、饲料原料(鱼粉、肉骨粉、豆粕、麸皮)、肉类(鸡肉、猪肉、内脏)等样品基质中添加一定浓度的三聚氰胺进行测定,并对检测结果进行分析.结果 酶联免疫试剂盒对奶制品和肉类检出限均能达到1.0 mg/kg;对成品饲料基质中的三聚氰胺的检测,检出限可达到2 mg/kg,而对饲料原料中的三聚氰胺的检测,检出限都不能达到2 mg/kg.结论 对奶制品中的三聚氰胺检测完全符合我国的临时限量标准;对成品饲料中的三聚氰胺残留的检测同样符合其限量标准(2.5 mg/kg),而对饲料原料中的三聚氰胺的检测,由于不同基质中检出限不同,不能直接采用酶联免疫法进行快速筛查;酶联免疫法也适用于肉类中的三聚氰胺的检测. 相似文献
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目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。 相似文献
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为了快速检测液态奶中违法添加的三聚氰胺量,利用近红外光谱技术进行可行性研究分析。对采集的54组添加不同三聚氰胺含量的液态奶样本的近红外漫反射光谱进行小波变换(wavelet transform,WT)结合主成分分析(principal component analysis,PCA)后,提取得到特征信号,利用广义回归神经网络(general regression neural network,GRNN)建模进行三聚氰胺的定量分析,结果显示当三聚氰胺浓度低于0.05%时,模型预测能力较差,预测集模型R2仅为0.654。进一步利用支持向量机(support vector machine,SVM)建模对液态奶中是否添加三聚氰胺进行定性判别,结果显示测试集准确率为94.44%。因此,通过近红外光谱结合适当的化学计量学方法,对液态奶中添加三聚氰胺虽无法精确定量,但可准确对其进行定性判别。 相似文献
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采用牛血清白蛋白偶联的三聚氰胺( melamine- BSA)完全抗原免疫BALB/C小鼠,应用杂交瘤技术制备抗三聚氰胺的特异性单克隆抗体.所得单克隆抗体效价可达5.0×105,且抗体的亚类类型为IgG1,抗体的亲和常数为3.21×109 L/mol.与三聚氰酸、三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺的交叉反应率分别为30%、93%和46%.说明该单抗可用于三聚氰胺类物质的检测,为研制高质量的三聚氰胺ELISA试剂盒和胶体金试纸条奠定了基础. 相似文献
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国标GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》规定的三种仪器检测方法中,即高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)和气相色谱-质谱联用法(GC-MS,GC-MS/MS),GC-MS/MS方法能有效消除背景干扰,因而检测灵敏度较高。通过试验,瓦里安建立了一种可用于精确测定乳制品中三聚氰胺含量的气相色谱多级质谱联用检测方法。该方法利用了离子阱多级质谱技术,在奶粉和牛奶中的三聚氰胺加标回收率均在85.0%-110%之间, 相似文献
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以灭蝇胺为虚拟模板分子,采用溶胶凝胶技术制备灭蝇胺介孔分子印迹聚合物(MIP)。将MIP作为固相萃取吸附剂,与高效液相色谱联用检测奶粉样品中的三聚氰胺。对该聚合物进行了吸附等温线测定以及Scatchard分析,结果表明分子印迹聚合物对三聚氰胺有两种结合方式。计算得到的最大表观结合量(Qmax)和平衡解离常数(Kd)分别为:Qmax1=14.96 mg/g,Kd1=1.85 mg/L;Qmax2=26.16 mg/g,Kd2=27.03 mg/L。最后应用合成的MIP对2 g奶粉样品提取液中痕量三聚氰胺进行净化和富集,回收率为94.73%~98.56%,相对标准偏差RSD为3.2%,检出限为0.015μg/g。此方法快速、选择性高,为三聚氰胺的残留分析开辟了一条新途径。 相似文献
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以罗非鱼(Tilapia)为研究对象,通过在罗非鱼饲料中添加不同剂量三聚氰胺进行罗非鱼摄食生长试验,研究三聚氰胺在罗非鱼肝脏和肌肉中的残留和消除规律。实验结果表明:(1)罗非鱼连续饲喂含三聚氰胺的饲料50d,添加不同剂量的三聚氰胺对各组罗非鱼的平均体重增长无显著影响(P>0.05);(2)肝脏和肌肉中三聚氰胺的残留量随着各实验组饲料中添加量的增加呈显著递增趋势(P<0.05),低剂量组(1000、5000mg/kg)的肝脏和肌肉中的残留量在2~20mg/kg间,高剂量组(10000、50000mg/kg)的残留量均超过40mg/kg,各组中肝脏的残留量均显著高于肌肉(P<0.05)。停药5d后,罗非鱼的肝脏和肌肉中三聚氰胺的残留量均内显著下降,各实验组的三聚氰胺残留量均降至2.0mg/kg以下,此后则缓慢下降。各实验组中,肌肉的消除时间比肝脏的消除时间长。 相似文献
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建立表面增强拉曼光谱快速检测奶粉中三聚氰胺的方法。基于溶剂萃取法,利用乙腈对奶粉中的三聚氰胺进行提取,制备银包金溶胶(Au@Ag NPs)作为增强基底,并优化增强基底的条件来获得最佳拉曼信号。用乙腈提取三聚氰胺,将5mol/L NaCl和1mol/L NaOH的混合溶液作为凝聚剂,使Au@Ag NPs与三聚氰胺分子紧密结合后检测,可获得响应最强的表面增强拉曼(surface-enhanced raman spectroscopy,SERS)信号。三聚氰胺在奶粉中的的检出限为0.008 5 mg/kg,回收率在71.07%~91.15%,相对标准偏差(n=6)在1.52%~4.22%。该方法可用于奶粉中三聚氰胺的快速检测。 相似文献
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目的:制备具有高特异性的三聚氰胺多克隆抗体,建立三聚氰胺快速检测方法.方法:通过抗原偶联嫁接技术,将不具备免疫原性的三聚氰胺与特定蛋白连接,制备免疫抗原(MB1st、MB2st、KM和ML2).对家兔进行皮下多点注射,初次免疫后取抗体血清,用SDS-PAGE检测血清中IgG的产生情况.采用酶联免疫吸附法测定各抗体血清的效价,最终以亲和层析法纯化血清,获得高特异性的抗体.将纯化后的抗体包被于酶标板上,建立三聚氰胺ELISA方法,并验证其有效性.结果:通过SDS-PAGE证明免疫前、后血清中IgG显著增长.进一步使用间接ELISA法测得各兔血清效价.MB1st免疫的效果最佳,其抗体血清对三聚氰胺的竞争率由纯化前的36.97%上升至纯化后的75.57%.MB2st免疫的抗体血清对三聚氰胺的竞争率由纯化前的30.80%上升至纯化后92.43%.KM免疫的抗体血清效价较低,其对三聚氰胺的竞争率由纯化前的11.95%上升至纯化后的96.09%.ML2免疫效价低,且其抗体血清在纯化前、后均对三聚氰胺没有显著的竞争性.由此建立ELISA方法,并初步验证了该方法的有效性.结论:本试验中制备的三聚氰胺抗体血清.经分离、纯化后得到对三聚氰胺具有较高竞争性的多克隆抗体,为建立酶联免疫方法,以检测食品中三聚氰胺含量提供了理论基础. 相似文献
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在室温(23~29℃)条件下,凡纳滨对虾用普通饲料驯化7d后再用含有不同剂量的三聚氰胺的饲料连续投喂25d,研究三聚氰胺在凡纳滨对虾血液、肌肉和肝胰腺组织中的残留消除规律。结果表明:凡纳滨对虾投喂含有三聚氰胺的饲料后,三聚氰胺在对虾血液、肌肉和肝胰腺组织中均有残留,当饲料三聚氰胺含量为800mg/kg时,对虾中三聚氰胺残留量最高部位是肝胰腺,其残留量达到6.10mg/kg;停喂含有三聚氰胺的饲料后,三聚氰胺在对虾血液、肌肉和肝胰腺组织中消除时间分别为1、4、6d;三聚氰胺在凡纳滨对虾体内可代谢为三聚氰酸,当饲料中三聚氰胺含量为200~800mg/kg时,三聚氰酸只在肝胰腺组织中检出,在血液和肌肉中均未检出,在肝胰腺组织中消除时间为3d。因此,肝胰腺可作为凡纳滨对虾体内三聚氰胺残留监控的靶器官。 相似文献