茶皂素的提取及纯化研究

采用超声波法提取茶皂素的工艺,确定最佳的工艺参数为:乙醇浓度80%、料液比1:4、提取温度40℃、超声波功率320W、超声波作用时间60min。最佳工艺条件下的茶皂素粗品得率为18.54%,茶皂素含量60.3%。用硅胶层析法对粗品进行分离纯化。能将茶皂素粗品中的杂质有效地分离,适用于茶皂素的分离纯化。     

从茶籽饼中提取分离茶皂素

本文以茶籽饼为原料,从中提取分离茶皂素。试验确定了提取的最佳工艺条件为：温度80℃,乙醇体积分数80%,料液比1：25（g/mL）,每次提取4h,提取3次,在此条件下,茶皂素的回收率为95.3%。在此基础上,将得到的提取液经蒸馏浓缩,使浓缩液的体积为提取液体积的10%,然后,通过有机溶剂沉淀法和柱层析法从浓缩液中分离纯化茶皂素。结果表明,采用有机溶剂沉淀法,茶皂素纯度为75.9%、回收率为82.9%,但其工艺复杂,溶剂耗量大;采用柱层析法纯化茶皂素,茶皂素纯度最高可达到94.0%,最高总回收率达81.1%,操作比较简单,是一种相对较为理想的纯化方法。     

氯霉素高特异抗体的制备与纯化

目的自制免疫亲和层析柱,采用亲和层析法获取高纯度的抗氯霉素抗体并对其进行活性分析。方法采用硫酸铵分级沉淀法对抗体进行初步提取。然后选用3,3′-二氨丙基亚胺(DADPA)作为亲和凝胶与配基氯霉素之间的间隔臂,制备分离纯化抗氯霉素特异性IgG的亲和层析柱,对IgG粗品进行亲和层析纯化,并用ELISA法检测其活性。结果经饱和硫酸铵分级沉淀,可除去大部分的杂蛋白,较好实现对目标蛋白的初步分离;采用自制的免疫亲和层析柱,可获得高纯度的兔抗氯霉素抗体,检测其活性比纯化前提高了4倍,交叉反应结果显示抗体对CAP有高的特异性,对其他类似药物无反应活性。结论应用本试验所建立的方法可得到高纯度的抗氯霉素抗体,为氯霉素的免疫检测奠定了基础。     

藻胆蛋白的提取纯化研究进展

本文从提取原料、细胞破碎方法、粗提和纯化方法等几方面对近期有关藻胆蛋白的提取纯化研究做一介绍。常用的提取原料有螺旋藻、多管藻、条斑紫菜等;细胞破碎方法有反复冻融法、化学试剂处理法等五种;粗提方法主要有盐析法等四种;而常用的纯化方法有羟基磷灰石柱层析法、DEAE-纤维素离子交换柱法和葡聚糖凝胶柱层析法等三种。实际应用中为获得较好的提取纯化效果,经常混合使用多种细胞破碎方法和多种纯化方法。     

高纯度新疆胡麻卵磷脂的制备

以粉末状新疆胡麻磷脂粗品为原料,经金属离子沉淀法、柱层析法、全溶剂萃取法及薄层层析富集法等工艺制备了高纯度卵磷脂,并研究了金属离子沉淀法对柱层析分离磷脂混合物效果的影响。结果表明:以金属离子锌为复合沉淀离子,以中性氧化铝为吸附剂,以氯仿:甲醇:水=65:25:4(V:V:V)为洗脱剂进行等度洗脱,可获得高纯度的卵磷脂精品;未经金属离子沉淀法处理的磷脂混合物,氧化铝吸附柱层析法无法分离得到单一组分的卵磷脂,对于该部分磷脂混合物,研究采用薄层层析富集法获得卵磷脂纯品。所得卵磷脂采用红外光谱、紫外光谱、一维多次展开薄层层析、二维双液展开薄层层析等手段进行了鉴定。     

配位吸附柱层析法对卵磷脂分离纯化的研究

采用配位吸附柱层析法分离纯化市售粉末大豆磷脂(磷脂酰胆碱含量40%),得到高纯度卵磷脂产品(磷脂酰胆碱含量96.2%)。重点建立了Cu2+型配体交换树脂柱,并优化了分离纯化条件。结果表明,该方法能简便有效地分离出高纯度卵磷脂。     

透明质酸纯化技术研究进展

对透明质酸的季铵盐纯化法、板框过滤法、离子交换层析法、凝胶过滤柱层析法、离子交换树脂法和超滤膜法等纯化方法的研究进展进行综述。     

油茶籽粕和茶皂素中皂苷的定量检测方法研究

采用重量法、香草醛-浓硫酸法和反相高效液相色谱(HPLC)法,进行了茶皂素粗提物(皂苷质量分数≥50.0%)、高纯度茶皂素(皂苷质量分数70%～90%)和油茶籽粕中皂苷的定量测定比较研究。结果表明,取样量对油茶籽粕中皂苷的重量法测定精确度影响较大,采用最佳取样量(3 g)后,测定结果与HPLC法和香草醛-浓硫酸法无显著差异;样品提取方法对油茶籽粕中皂苷的HPLC法定量测定精确度影响也较大,采用索氏提取法可有效去除杂质干扰。改进后的重量法、HPLC法和香草醛-浓硫酸法对纯度不同的样品中皂苷定量测定结果均较为吻合,即均适合于油茶籽粕、茶皂素粗提物和高纯度茶皂素检测。     

凡纳滨对虾原肌球蛋白的纯化鉴定及生物信息学分析

原肌球蛋白(tropomyosin,TM)是凡纳滨对虾中最主要的过敏原,为获得高纯度TM,该文以凡纳滨对虾为原料,采用丙酮去脂、PBS粗提、热处理除杂、硫酸铵沉淀和柱层析法进行提取纯化虾肉中TM.经SDS-PAGE确定其分子质量,通过Western blot和液质联用进行鉴定,同时利用生物信息学方法分析TM的理化性质并...     

从油茶饼粕中提取油茶籽多糖和茶皂素的工艺研究

研究从油茶籽饼粕中提取油茶籽多糖和茶皂素的最佳工艺。首先比较水提法、醇提法提取油茶籽多糖和茶皂素的得率和纯度,然后结合大孔吸附树脂层析法对茶皂素的纯化进行进一步研究,确定了油茶籽多糖、茶皂素的最佳提取工艺为:温度75℃,2次浸提,油茶饼粕和水的比例两次分别为1:9和1:5,浸提时间每次各1.5h,油茶籽多糖得率9.09%,质量分数20.67%;茶皂素得率18.19%,其质量分数为62.35%。采用大孔树脂纯化茶皂素,收集体积分数70%醇洗脱溶液,得到90%以上的高纯度茶皂素。     

α-亚麻酸分离纯化技术研究进展

α-亚麻酸属n-3系不饱和脂肪酸,具有降低血脂血压、改善心血管疾病、提高记忆力、保护神经组织、预防过敏性疾病、抑制肿瘤细胞转移、延缓衰老等功能。目前,α-亚麻酸的分离纯化方法主要有尿素包合法、低温冷冻结晶法、分子蒸馏法、银离子络合法、柱层析法、β-环糊精包合法及耦合法。综述了α-亚麻酸分离纯化技术的研究进展,总结了各种分离纯化方法的原理及优缺点。从现有的研究结果可看出,单一的分离纯化方法由于其各自的弊端很难得到高纯度的α-亚麻酸,采用两种及两种以上分离纯化技术耦合是获得高纯度α-亚麻酸的有效途径。     

金线莲苷的硅胶柱层析分离

为进一步提高金线莲苷的分离纯化效率,该研究以深度共熔溶剂提取的金线莲苷粗品为基础,比较了大孔树脂法和硅胶柱层析法分离金线莲苷的效果,并优化了硅胶柱层析法分离金线莲苷的条件。实验结果表明,DM130型大孔树脂对金线莲苷的吸附量仅为24.69 mg/g,解吸率为17.89%,且无法选择性的分离金线莲苷,而硅胶柱层析法对金线莲苷的分离效果较好;硅胶柱层析法分离金线莲苷的最佳条件为：洗脱溶剂为乙酸乙酯:乙醇:乙酸=6:4:0.2（V/V/V）,上样量为0.60 g,洗脱速率为1.25 mL/min,在此条件下,金线莲苷的回收率可达79.29%;硅胶柱层析分离组分经半制备型高效液相色谱纯化所得的金线莲苷纯度大于99.00%。该研究建立了一种简单高效的金线莲苷分离纯化流程,有利于金线莲产业的发展,为后续的研究工作提供理论支持。     

高效液相色谱法定量分析茶籽粕中的茶皂素

以脱脂冷榨茶籽饼粕为原料,采用反相ODS填料纯化制备茶皂素标准品,并采用紫外吸收光谱、红外光谱及质谱对该标准品进行鉴定;采用自制标准品为标样,建立一种高效液相色谱法定量分析茶籽饼粕中茶皂素含量的方法。高效液相色谱法条件为反相ODS色谱柱、检测波长215nm、柱温室温、流速1.0mL/min、流动相以乙腈-水体系进行梯度洗脱(0～5min内乙腈体积分数保持为20%,5～10min内流动相乙腈体积分数从20%增至100%,10～15min内流动相乙腈体积分数从100%回至20%)。采用该条件检测得到的茶皂素峰型对称,保留时间合适,杂峰和茶皂素峰分离度较高。     

从蛋黄中提取及纯化卵磷脂

本文以鸡蛋的卵黄为原料,采用含水乙醇与乙醚提取,通过丙酮脱水去油,得到粗品卵磷脂;进一步以氯仿/甲醇为洗脱液,硅胶柱层析法分离纯化自制的粗品卵磷脂,得到高纯度的纯白色固体卵磷脂,由薄层色谱定性检测,仅含一个斑点;用薄层扫描仪定量检测纯度大于97.4%。     

沙棘果原花青素的分离纯化研究

用大孔树脂、Sephadex LH-20凝胶色谱的方法和反相高效液相色谱分离纯化沙棘果中的原花青素。结果表明：大孔树脂层析法分离纯化沙棘果中的原花青素时使用50％的乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液中原花青素的含量较高，达71．9％；将经过大孔树脂层析分离纯化的原花青素粗品经Sephadex LH-20柱分离，50％乙醇作为流动相，原花青素粗品可纯化至95％以上。反相高效液相色谱分析发现，从Sephadex LH-20洗脱下来的组分中含有原花青素的二聚体。     

蛹虫草胞外多糖的提取纯化及免疫活性研究

目的提取纯化蛹虫草发酵液中的胞外多糖,初步研究其结构及免疫活性。方法乙醇沉淀多糖,用Sevag法除去蛋白质、透析法除去小分子物质,经CM-52纤维素柱层析后得纯品。用紫外光谱测定多糖纯度,用凝胶柱层析法测定相对分子质量,高效毛细管电泳和红外光谱分析其分子结构,检测胞外多糖对小鼠巨噬细胞系RAW264.7产生NO的影响。结果蛹虫草胞外多糖经脱蛋白、CM-52纤维素柱层析后可获得单一对称峰的纯多糖,相对分子质量为3.49×10^4,含羟基、糖醛结构和羰基结构,单糖基之一为甘露糖。多糖可显著刺激巨噬细胞分泌NO,具有活化免疫细胞、增强机体免疫力的作用。结论该方法可获得高纯度蛹虫草胞外多糖,并证明它对巨噬细胞有活化作用。     

柱层析分离纯化功能性红曲米中的有效成分

为深入研究功能性红曲米浓缩物中有效成分的性质及其功能,采用硅胶柱层析法(依次用乙酸乙酯:石油醚(1∶1,v∶v)、乙酸乙酯、无水甲醇、蒸馏水进行洗脱)对功能性红曲米浓缩物中的活性成分进行分离纯化,得到红曲黄色素、洛伐他汀粗品、醇溶性红曲红色素、水溶性红曲红色素4种组分;并采用紫外-可见扫描和高效液相色谱法对4种组分进行简单的性质结构表征.     

连翘叶中连翘酯苷A、芦丁和连翘苷提取纯化工艺优化

对连翘叶提取液中同时分离连翘酯苷A、芦丁和连翘苷的提取纯化工艺进行优化。以连翘酯苷A、连翘苷和芦丁的质量浓度为指标,采用高效液相色谱法分析检测,比较不同型号的大孔吸附树脂和不同工艺条件对这3种活性成分的分离纯化能力。最佳工艺条件为:以AB-8大孔吸附树脂为吸附剂,药材-树脂比1.5∶1(g/g),上样流速2 BV/h,先用8 BV的水洗脱,再用6 BV的30%乙醇溶液和6 BV的50%乙醇溶液分别洗脱,洗脱流速3 BV/h;进一步采用C_(18)-硅胶柱反相层析法纯化连翘酯苷A,静置沉淀的方法纯化连翘苷和芦丁,纯化后连翘酯苷A和芦丁的纯度可达到97%以上,连翘苷纯度可达到95%以上。此工艺条件能得到高纯度的3种有效成分,为连翘叶资源的充分综合利用和产业化开发提供了参考。     

条斑紫菜中四个多糖组分的提纯及组成分析

利用离子交换柱层析和凝胶柱层析法对条斑紫菜热水提取物中的多糖进行了分离纯化,共获得四个不同的多糖组分．柱层析法测出它们的分子量分加别为2.2×105、2.0×104、1.8×105和1.5×104。采用气相色谱及化学分析等方法测出多糖各种组成成分的含量。     

蛋黄卵磷脂的提取方法研究

为探讨从蛋黄中提取蛋黄卵磷脂的方法。试验以蛋黄为原料,采用有机溶剂和酶解法从蛋黄中提取卵磷脂粗品,然后分别经柱硅胶层析和金属离子沉淀法纯化获得卵磷脂精品,通过测定卵磷脂的含磷量,判断其纯度高低。结果显示:采用有机溶剂法获得蛋黄卵磷脂粗品,然后经柱硅胶层析纯化可获得高纯度蛋黄卵磷脂精品,总得率为8.38%,卵磷脂的含磷量为15.33%。是一种高效、经济的蛋黄卵磷脂提取方法。