酶法测定大麦提取物β-葡聚糖含量研究

目前国际认可β-葡聚糖含量测定方法是酶法,此法测定成本高,我国目前多采用苯酚- 硫酸法测定,但测定结果准确性较差。该研究在国际β-葡聚糖酶法测定基础上用纤维素酶代替昆布多糖水解酶水解β-葡聚糖,用苯酚-硫酸法代替葡萄糖试剂盒法测定β-葡聚糖酶解后得到葡萄糖含量,设计适于我国应用的β-葡聚糖酶法测定方法。此法测定过程为:1．5 ml浓度为60μg／mL 标准β-葡聚糖和一定浓度样品,用浓度为50U／mL纤维素酶0．5 ml酶解60 min;然后用蒸馏水稀释至30 ml,从中吸取0．5 ml到另一试管,再加入浓度为2 U／mL β-葡聚糖酶1ml,作用15 min后,用苯酚-硫酸法测定标准β-葡聚糖和样品酶解液中葡萄糖含量,计算出样品中β-葡聚糖含量。     

国际标准酶法测定β-葡聚糖含量的研究

在国际β-葡聚糖酶法测定的基础上用纤维素酶代替昆布多糖水解酶水解β-葡聚糖,用苯酚-硫酸法代替葡萄糖试剂盒法测定β-葡聚糖酶解后得到葡萄糖含量,设计了适合我国应用的β-葡聚糖酶法测定方法.     

苯酚-硫酸法测定β-葡聚糖含量研究

分别以β-葡聚糖和葡萄糖为标准品测定青稞提取物中β-葡聚糖含量。以β-葡聚糖为标准品时,线性浓度范围在6～13μg/mL,回归方程为y=0.0445X-0.0071,回归系数为R2=0.9568,青稞中提取β-葡聚糖粗提物纯度为22.3%(脱脂)和10.7%(未脱脂);以葡萄糖为标准品时,线性浓度范围在0-21μg/mL,回归方程为y=0.0588X+0.0326,回归系数为R2=0.9934,青稞中提取出β-葡聚糖粗提物纯度为12.5%(脱脂)和4%(未脱脂),二者之间测定结果有78.4%左右误差。在β-葡聚糖含量测定过程中不能用葡萄糖代替β-葡聚糖作标准品,用β-葡聚糖作标准品时苯酚-硫酸法工作曲线线性回归性不强,直接用苯酚-硫酸法测定β-葡聚糖方法不可取。     

酶法制备葛根纤维低聚糖

以葛根膳食纤维为原料,采用酶法制备功能性纤维低聚糖,并采用高效阴离子交换色谱法测定所制备样品的糖分组成。研究酶制剂、酶解时间和酶用量对纤维低聚糖组分及含量的影响。结果表明：选择β-葡聚糖酶制备纤维低聚糖优于纤维素酶,酶解产物主要成分为葡萄糖、纤维二糖和纤维三糖。β-葡聚糖酶法制备纤维低聚糖,酶解时间2h、酶用量3U/g时所得酶解产物中纤维二糖和纤维三糖所占比例均较高,纤维低聚糖得率为11.8g/100g。     

酶法水解甘薯工艺条件研究

甘薯经过粉碎、打浆后用α-淀粉酶,果胶酶及纤维素酶酶解,采用苯酚硫酸法测定酶解液中葡萄糖含量,确定不同酶作用甘薯最适条件。研究结果表明,α-淀粉酶、果胶酶和纤维素酶酶解甘薯最适温度,pH值,最佳酶解时间,最适加量分别为：40℃,5,20min,200U／mL;40℃,4．5,2h,150U／mL;50℃,5,6h,15U／mL。     

酸酶水解-HPLC法检测香菇多糖中β-D-葡聚糖含量

为了更有效地监控食品和医药行业中香菇多糖制品的质量,建立了一种香菇多糖中主要活性成分β-D-葡聚糖含量测定的新方法:香菇多糖样品经酸部分水解后用β-1,3-葡聚糖外切酶和β-葡糖苷酶进一步完全水解以测定总葡聚糖含量;另用淀粉葡萄糖苷酶水解样品中α-葡聚糖;根据HPLC测定的总葡聚糖与α-葡聚糖含量之差计得β-D-葡聚糖含量。分别用该方法和苯酚硫酸法及刚果红法测定已知含量的β-D-葡聚糖对照样品的结果表明:该方法最接近于对照品标示值,且重复性好,可用作为香菇多糖产品中β-D-葡聚糖含量测定的专属方法。     

刚果红法测定乳酸发酵液中的β-葡聚糖类物质

在利用凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)进行以葡萄糖为基质的乳酸发酵过程中通过外加商品纤维素酶可以显著增加乳酸产量。为探讨其中原因,用羧甲基纤维素(CMC)作为β-葡聚糖标品,建立了刚果红分光光度法测定乳酸发酵提取液中β-葡聚糖的稳定体系,用以测定乳酸发酵液中的β-葡聚糖含量。实验证明当Na+浓度为0.025～0.175mol/L,Ca2+浓度为0.001～0.005mol/L,蛋白质质量浓度为0～40mg/L时,这几种杂质对β-葡聚糖测定的干扰可以忽略。刚果红法测定β-葡聚糖的最佳条件为:最大吸收波长550nm、pH8.0磷酸缓冲液、测定时间15min。实验结果显示乳酸发酵液中β-葡聚糖含量很低,纤维素酶水解发酵液中的β-葡聚糖类物质不足于显著增加乳酸产量,其增产作用一定另有原因。     

啤酒酵母中β-(1,3)-D-葡聚糖的水解条件的优化

对啤酒酵母中β-(1,3)-D-葡聚糖(用碱-酶法从啤酒废酵母中提取)的水解条件进行了优化.研究表明影响β-(1,3)-D-葡聚糖水解条件的因素顺序依次为:预水解硫酸浓度>水解温度>水解硫酸浓度>水解时间;水解参数为:预水解硫酸浓度12mol/L、水解硫酸浓度2mol/L、水解温度100℃、水解时间24h.此条件下用苯酚-硫酸法测得的β-(1,3)-D-葡聚糖含量为83.1%.     

青稞β-葡聚糖营养作用及其提取工艺的研究

本文主要针对青稞β-葡聚糖的性质、营养作用和最佳提取工艺进行研究.并谈及粘度法、沉淀法、酶法、荧光法、苯酚-硫酸法等方法测定β-葡聚糖的含量,以及青稞β-葡聚糖的应用及其发展前景.     

西藏青稞β-葡聚糖提取研究

以西藏青稞为原料,经过粉碎、淀粉水解、碱液提取、乙醇沉淀等工艺提取β-葡聚糖;结果 表明,最佳工艺条件为:60目青稞粉,料水比1:5,加酶量400 U／mL,酶解时间1 h,提取液pH值 8．5,温度80℃,乙醇沉淀时乙醇加量为浓缩液2倍,在此工艺条件下,β-葡聚糖提取率为1．09％, 同时得到18％葡萄糖。     

乙醇-酶和热水二步法提取燕麦β-葡聚糖工艺的研究

目的:研究一种高黏度燕麦β-葡聚糖的提取方法.方法:采用乙醇-酶和热水二步提取法,即在燕麦麸皮中加入乙醇,酶法除去蛋白质和淀粉后,用热水提取β-葡聚糖.通过单因素及正交试验考察乙醇、胰蛋白酶、淀粉酶、酶解温度和时间对β-萄聚糖保留率以及蛋白质和淀粉的去除效果的影响;采用响应面设计研究热水提取β-葡聚糖的工艺,并比较不同提取方法得到的β-葡聚糖的表现黏度.结果:在60%乙醇溶液中加入60U/g胰蛋白酶,50 ℃酶解60min,残渣中β-葡聚糖的保留率为96.11%,蛋白质的去除率为71.79%.淀粉酶作用可以去除淀粉并使细胞壁破裂.响应面分析表明,在料液比1:20、浸提温度80℃、漫提时间60min条件下,β-葡聚糖得率为7.34%,且β-葡聚糖黏度高.结论:乙醇-酶和热水二步法是提取高黏度燕麦β-萄聚糖的有效方法.     

高效阴离子交换色谱法测定婴幼儿配方奶粉中酵母β-葡聚糖

建立一种测定婴幼儿配方奶粉中酵母β-葡聚糖的分析方法。奶粉样品经蛋白酶酶解去除蛋白质,脂肪酶酶解去除脂肪,葡聚糖酶酶解β-葡聚糖产生葡萄糖,经高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测,计算β-葡聚糖含量。结果表明,最优酶解条件为：酶解温度50 ℃、酶解时间2.0 h、溶壁酶添加量500 μL。采用PA10阴离子交换柱进行分离葡萄糖,葡萄糖在0.10～50.0 mg/L范围内线性良好（R2＞0.999 5）,添加水平在10.0～50.0 mg/100 g范围的回收率为96.9%～102.1%,精密度试验结果相对标准偏差为2.43%（n=5）,方法检出限为3.0 mg/100 g,定量限为10.0 mg/100 g。该方法灵敏、准确,可用于婴幼儿配方奶粉中酵母β-葡聚糖的测定。     

高通量MBTH法测定β-葡聚糖酶的活力

本文建立了一种以3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)为氧化剂,以微孔板测定β-葡聚糖酶活力的新方法,该法特别适合于成分复杂的材料中痕量β-葡聚糖酶活力的测定。根据MBTH法测定β-葡聚糖酶解产物还原端基的特点,设计并优化了酶活力测定的关键参数。结果表明,在最适p H 5.0和30℃条件下测定β-葡聚糖酶活力,所得酶的工作浓度范围为0~12.3 m U/m L,饲料中酶的工作浓度范围均为0~2.94 U/g,本法测β-葡聚糖酶和四种饲料样品中酶的平均回收率分别为93.1%、97.5%、104.3%、97.0%、106.4%,β-葡聚糖酶活力检测限为0.37 m U/m L,定量限为1.24 m U/m L,四种饲料酶活力检测限分别为0.10 U/g、0.09 U/g、0.14 U/g、0.09 U/g,定量限分别为0.33 U/g、0.30 U/g、0.46 U/g、0.31 U/g。该法准确、低成本、省时、省力,特别是其灵敏度远高于DNS法,可极大程度上避开饲料中其它成分对测定的干扰。     

荧光素钠法测定β-葡聚糖含量研究

该试验通过研究荧光素钠与β-葡聚糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖等结合后荧光最大激发和发射波长发生变化,探索在有多种糖存在溶液中鉴别测定β-葡聚糖含量一种方法。结果显示,荧光素钠与β-葡聚糖混合前后紫外吸收分别为436．5 nm和510．6 mn,荧光素钠与β-葡聚糖结合后荧光最大激发和发射波长发生变化,激发和发射波长分别由487．3 nm,517．6 nm变为475．9 nm和510．6 nm,而与其它糖类,如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等结合后荧光性质不发生变化,荧光素钠与β-葡聚糖结合适合比例为6:1(百分含量比)、线性浓度范围在0．1～0．25μg／mL,回归方程为y=-2．014x+1．0757,回归系数为R2=0．9978,用此工作曲线测定青稞粗品中β-葡聚糖粗提物纯度为95％(标准酶法测定结果为96％)。     

荧光素钠法测定β-葡聚糖含量的研究

通过研究荧光素钠与β-葡聚糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖等结合后荧光最大激发和发射波长发生的变化，探索在有多种糖存在的溶液中鉴别测定β-葡聚糖含量的一种方法，结果显示，荧光素钠与β-葡聚糖混合前后的紫外吸收分别为436．5nm和510．6nm，荧光素钠与β-葡聚糖结合后荧光最大激发和发射波长发生的变化，激发和发射波长分别由487．3nm，517．6nm变为475．9nm和510．6nm，而与其他糖类如葡萄糖、果糖、麦芽糖等结合后荧光性质不发生变化，荧光素钠与β-葡聚糖结合适合比例为6：1（百分含量比）、线性浓度范围在0．1μg／mL～0．25μg／mL，回归方程为Y=-2．014x＋1．0757，回归系数为R^2=0．9978，用此工作曲线测定青稞粗品中β-葡聚糖粗提物的纯度为95％（标准酶法测定结果为96％）。     

响应曲面法优化酵母β-葡聚糖酶解工艺及产物分析

采用β-葡聚糖酶对酵母β-葡聚糖进行酶解,利用单因素和响应面实验,以水溶性酵母β-葡聚糖得率为指标优化酶解工艺,并对水溶性酵母β-葡聚糖与原酵母β-葡聚糖的结构和热稳定性进行了研究。最佳酶解条件:底物质量浓度1.14 g/100 mL,酶活浓度0.16 U/mL,温度44℃,pH 4.2,水溶性酵母β-葡聚糖得率为39.89%。红外光谱分析结果表明,水溶性酵母β-葡聚糖与原酵母β-葡聚糖的糖苷键型均为β构型,分子构象相同。热稳定性分析表明,水溶性酵母β-葡聚糖和原酵母β-葡聚糖的特征分解温度分别为356℃和360℃,终止分解温度分别为740℃和780℃,热稳定性差异不大。     

燕麦浊汁酶解工艺及其水溶性β-葡聚糖含量变化研究

以稳定性为评价指标研究了α-淀粉酶生产燕麦浊汁的酶解工艺,并用刚果红法探究了水溶性β-葡聚糖含量在饮料加工过程中的变化。结果表明,酶解的最佳工艺条件为:10%的燕麦溶液,温度55℃、p H6.4、酶用量为91.7U/100g溶液、时间180min,燕麦浊汁稳定性值为93.3%;燕麦原料中的水溶性β-葡聚糖含量为12.8mg/g,浸泡过程中会造成水溶性β-葡聚糖的流失,蒸煮、打浆能提高水溶性β-葡聚糖的含量,酶解、灭菌对水溶性β-葡聚糖含量没有明显影响。     

高效液相色谱法测定保健食品中β-葡聚糖

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测保健食品中β-葡聚糖含量。方法称取样品适量,在酸性条件下于135℃用微波消解仪提取15 min,取出水解液,用氢氧化钠溶液调节pH至6.5±0.2,用水定容至100 mL容量瓶中,摇匀后过滤。采用高效液相色谱法检测,根据葡萄糖标准品的色谱峰面积进行定量。结果葡萄糖浓度在0.01~0.16 mg/mL的范围内与峰面积的线性良好,相关系数为0.9998。3水平不同浓度葡萄糖标准品添加的回收率为97.4%~98.6%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.4%~0.9%。结论该方法操作简便、准确、重现性好,适用于保健食品中β-葡聚糖含量的快速测定。     

β-葡聚糖酶降解玉米秸秆中β-葡聚糖的工艺

利用β-葡聚糖酶降解玉米秸秆中的β-葡聚糖,确定了酶浓度、pH、酶解时间以及温度等因素,并通过正交实验进行了优化.影响因素为:酶浓度>pH>反应温度>反应时间.酶解的最适条件:酶活25.86万U/g,pH值4.5,反应时间15 h,反应温度45℃.玉米秸秆的β-葡聚糖的降解率为41.96%.     

β-葡萄糖苷酶酶解刺嫩芽皂甙最佳工艺条件的研究

以辽宁本溪产刺嫩芽提取的总皂甙为实验原料,探讨了β-葡萄糖苷酶水解刺嫩芽总皂甙的工艺条件与技术参数。采用苯酚-硫酸比色法测定葡萄糖含量,确定酶解效果。结果表明:葡萄糖浓度范围在0～0.1mg/mL内,其吸光值与葡萄糖浓度呈现良好的线性关系。单因素实验结果表明:考虑到β-葡萄糖苷酶水解成本与效率,50mg的刺嫩芽皂甙分别在β-葡萄糖苷酶用量为2.0mg,酶解温度为40℃,酶解处理时间为120min时的酶解效果最好。正交实验结果表明:对β-葡萄糖苷酶水解刺嫩芽皂甙的影响程度依次为酶解温度>酶用量>酶解时间,三因素的最佳水平组合为:在pH为6.5的缓冲液体系中,酶解温度为40℃,酶解时间为120min,用量为3.0mg。