Tamoxifen联合γ线照射对脑胶质瘤细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用

研究三苯氧胺（Tamoxifen,TAM）对人脑胶质瘤细胞辐射增敏作用及诱导细胞凋亡。用^3H-TdR掺入法、免疫组织化学法、流式细胞术和激光共聚焦显微镜扫描技术检测细胞DNA合成、雌激素受体表达、细胞凋亡及凋亡的形态学特征。结果表明,TAM能抑制细胞DNA合成,与^60Coγ线联用抑制作用增强,表现出协同作用。TAM能诱导细胞凋亡,其凋亡率随TAM浓度的升高而增高,凋亡细胞核固缩和核碎裂,可见凋亡小体。而免疫组化结果显示SHG-44细胞不表达雌激素受体。以上结果表明TAM可能通过诱导细胞凋亡途径来增加细胞的辐射敏感性,而与雌激素受体途径无关。     

环氧化酶抑制剂Celecoxib增强脑胶质瘤SHG44细胞辐射敏感性的体外实验研究

为了研究COX-2选择性抑制剂celecoxib对人脑胶质瘤细胞SHG44的辐射增敏作用,用MTT法检测celecoxib对细胞存活分数的影响,用克隆法、RT-PCR法检测celecoxib或联合60Coγ射线照射与细胞克隆存活率及COX-2 mRNA表达水平的关系,探讨celecoxib辐射增敏的可能作用机制,为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据.结果表明celecoxib细胞毒性作用随浓度升高而升高;celecoxib能抑制细胞克隆形成,联合60Coγ射线照射显示出协同作用;与对照组、单独药物和照射组相比较,celecoxib联合照射后COX-2 mRNA的表达水平均有所降低.本实验研究认为COX-2选择性抑制剂celecoxib对人脑胶质瘤SHiG44细胞具有辐射增敏作用,其机制与COX-2 mRNA表达水平密切相关.     

二氢青蒿素对人脑胶质瘤SHG44细胞辐射增敏作用及其机制的研究

为研究二氢青蒿素(Dihydroartemisinin)对人脑胶质瘤SHG44细胞辐射增敏作用及其机制,采用MTT法(Methyl thiazolyl tetrazolium)检测增殖抑制作用;应用克隆形成法检测放射增敏作用;运用流式细胞术检测二氢青蒿素及60Coγ射线作用后细胞周期的变化;应用Western Blot...     

青蒿素对脑胶质瘤U251细胞的辐射增敏作用

为探讨青蒿素(Artemisinin)对脑胶质瘤细胞辐射敏感性的影响及其机制,采用甲基四唑蓝(MTT)法检测青蒿素对胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258荧光染色观察凋亡小体;单丹磺酞尸胺(MDC)染色和Western blotting检测U251细胞的自噬活性的改变;用克隆形成实验测定自噬抑制剂3-MA对U251细胞的增殖抑制作用。结果显示:青蒿素对U251细胞增殖有抑制作用;青蒿素和X射线联合处理组细胞凋亡增加,并出现大量自噬泡且LC3-Ⅱ表达量值增大(p<0.01);3-MA、青蒿素和X射线三联处理组细胞克隆形成率较联合处理组显著降低(p<0.01)。研究表明,青蒿素可能主要通过诱导细胞凋亡来增强U251细胞对X射线的辐射敏感性,同时青青蒿素也能增强辐射诱导U251细胞的自噬活性,但自噬机制在此过程中可能起到细胞保护作用。     

γ射线诱导破骨细胞凋亡

参照上海医科大学放射医学研究所七室建立的破骨细胞培养方法,将分离的破骨细胞培养在玻片上,利用０．５、１、３、５Ｇｙ＾１３７Ｃｓγ射线照射破骨细胞,采用荧光染色方法观察辐射对破骨细胞形态的影响。结果表明：破骨地辐射敏感,较低剂量即可引起破骨细胞凋亡,其中３Ｇｙ为诱导破骨细胞凋亡的最佳反应剂量,此时破骨细胞凋亡比例最高,可作为凋亡基因研究模型,为进一步探讨辐射所致骨质疾病的机理、预防、治疗提供实验依据     

DCX和SPARC基因共表达增强X射线对人脑胶质瘤细胞U-87MG凋亡的影响

用激光共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达、流式细胞仪检测GFP表达比例确定重组腺病毒对U-87MG细胞的最佳感染剂量;RT-PCR和Western blot法检测DCX和SPARC在U-87MG细胞mRNA和蛋白水平的表达;流式细胞仪检测Ad-GFP、Ad-DCX、Ad-SPARC和Ad-DCX-SPARC对X射线诱导U-87MG细胞凋亡的影响。实验结果表明:重组腺病毒对U-87MG细胞的最佳感染剂量为50 MOI;目的基因DCX和SPARC可在mRNA和蛋白水平成功表达;Ad-GFP、Ad-DCX、Ad-SPARC和Ad-DCX-SPARC单纯基因组的凋亡率分别为(1.05±0.42)%、(1.11±0.29)%、(1.18±0.37)%和(1.12±0.40)%;8 Gy剂量辐照后,凋亡率分别为(7.54±0.47)%、(23.23±2.72)%、(16.43±1.13)%和(33.01±2.67)%。提示Ad-DCX-SPARC可以增强X射线诱导的U-87MG细胞的凋亡,从而增强放射敏感性。     

一氧化氮合成酶对AQ4N放射增敏作用的影响研究

评价1，4-二-[[2-（二甲氨基-N-氧化物）乙醇]氨基]5，8-双羟基氧化蒽-9，10-二酮（（1，4-bis{[2-（dimethylamino-N-oxide）ethyl]amino}-5，8-dihydroxyanthracene-9，10dione），AQ4N）辐射增敏效果和乏氧选择性，分析一氧化氮合成酶（Inducible nitlogen monoxide synthase，iNOS）对AQ4N代谢活化的影响和作用特点。结果显示AQ4N是一种低毒性的化合物，仅在乏氧条件显示较弱的细胞毒性，可以引起肿瘤细胞凋亡。AQ4N对肿瘤细胞尤其是乏氧肿瘤细胞具有良好的辐射增敏作用。同亲本细胞相比，iNOS基因转染的细胞克隆，仅在乏氧条件下显示出对AQ4N化学敏感性的增强和细胞的G2／M期阻滞。提示iNOS仅在乏氧条件下参与AO4N的代谢活化过程。     

~(125)IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG44的杀伤作用

为评价12 5IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG4 4的杀伤作用 ,把12 5IUdR加入到SHG4 4细胞的培养基中 ,孵育后测量细胞摄取12 5IUdR的放射性活度 ;采用克隆形成法测定12 5IUdR对SHG4 4细胞生长抑制的效果。结果表明 ,培养基中12 5IUdR浓度增加时 ,SHG4 4细胞对12 5IUdR的摄取量也相应增加 (相关系数r =0 .9917)。SHG4 4细胞摄取12 5IUdR后生长受到明显抑制 ,细胞存活分数与培养基中12 5IUdR浓度呈直线负相关 (r =- 0 .9736 ) ,其半数致死剂量LD50 为 (8.7± 0 .12 )kBq/mL ,12 5IUdR组的SHG4 4细胞存活分数明显低于Na12 5I组 (P <0 .0 0 1)。结果提示 ,12 5IUdR能够掺入到SHG4 4细胞中 ,12 5IUdR对SHG4 4细胞有明显的杀伤作用 ,说明12 5IUdR可望成为治疗脑胶质瘤的潜在的一种放射性药物。     

^125IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG44的杀伤作用

为评价     

低剂量辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的 …

应用流式细胞术观察７５ｍＧｙ Ｘ射线诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的适应性反应。结果表明，１．５或２．０Ｇｙ全身照射后，小鼠胸腺细胞凋亡小体（ＴＡＢ）百分数明显增加，Ｓ期ＴＡＢ百分数明显减少，而Ｇ０／Ｇ１和Ｇ２＋Ｍ期ＴＡＢ百分数明显增加；当１．５或２．０Ｇｙ（攻击剂量，Ｄ２）照射前６ｈ给予７５ｍＧｙ（诱导剂量，Ｄ１）照射时，明显减轻Ｄ２对胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的损伤作用。提示，低剂量辐射可     

Smac基因对γ射线照射诱导的宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

将Smac基因全长cDNA转染HeLa细胞,以探讨Smac基因过表达对γ射线诱导的宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其可能机制.转染24小时后 Western Blot结果表明,转染Smac基因全长cDNA的HeLa/Smac细胞其Smac基因表达量与转染pcDNA3.1空载体的HeLa/pcDNA3.1细胞Smac基因表达量相比上调,而相反Smac基因的底物Survivin基因表达量下调.γ射线照射后HeLa/Smac细胞与HeLa/pcDNA3.1细胞相比凋亡率显著升高,Caspase-3活性上调,但HeLa/Smac细胞与HeLa/pcDNA3.1细胞相比DNA损伤及修复无显著变化,对细胞周期也无明显影响.     

电离辐射对HelaS3细胞凋亡与细胞周期的影响

研究了电离辐射对HelaS3细胞凋亡和细胞周期的影响,进一步探讨细胞凋亡与细胞周期的关系,为肿瘤放化疗方案的制定提供基础资料。采用PI、Hoechst33342双梁和PI单梁,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果表明,给予0.5-4.0Gy X射线照射后8h细胞凋亡开始增加,12h达最大值,12－24h有下降趋势,但24h开始又逐渐增加,到72h时又接近12h水平。S期和G2／M期细胞均明显增加,并呈剂理依赖性,Go/G1期细胞则呈剂量依赖性减少,且这种变化在受照射后24h最明显。说明一定剂量电离辐射可以诱导明显的G2/M阻滞和S期阻滞,并可诱导HelaS3细胞凋亡的产生,两者之间有一定的关系。     

低剂量辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的适应性反应

应用流式细胞术观察７５ｍＧｙＸ射线诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的适应性反应。结果表明，１．５或２．０Ｇｙ全身照射后，小鼠胸腺细胞凋亡小体（ＴＡＢ）百分数明显增加，Ｓ期ＴＡＢ百分数明显减少，而Ｇ０／Ｇ１和Ｇ２＋Ｍ期ＴＡＢ百分数明显增加；当１．５或２．０Ｇｙ（攻击剂量，Ｄ２）照射前６ｈ给予７５ｍＧｙ（诱导剂量，Ｄ１）照射时，明显减轻Ｄ２对胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的损伤作用。提示，低剂量辐射可诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的适应性反应。     

Daxx对γ射线诱导HeLa细胞凋亡的影响

研究过表达死亡结构域相关蛋白(Daxx)对经γ射线照射过的细胞凋亡的影响,探讨Daxx与辐射诱导细胞凋亡之间的关系及其机制。通过转染将宫颈癌HeLa细胞分为正常对照组、空质粒转染阴性组与Daxx转染组,利用生物细胞辐照仪经γ射线照射至不同剂量;Western blot检测细胞中Daxx的表达;MTT检测细胞的增殖情况;ELISA检测细胞中Caspase-8的相对活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果发现:随着照射剂量增加,细胞数量逐渐减少,且其中变形细胞越来越多;Daxx表达水平随着照射剂量增加而升高;Daxx转染的辐照细胞组的细胞增殖抑制率、A₄₀₅值以及细胞凋亡率均明显高于未辐照细胞组,差异均有统计学意义(p<0.01,p<0.05,p<0.05)。过表达Daxx能通过上调经γ射线照射细胞的Caspase-8活性,促进辐射诱导的细胞凋亡。     

电离辐射对小鼠小肠和结肠细胞凋亡的影响

观察不同剂量ｒ射线照射对小鼠小肠和结肠细胞凋亡水平的影响。６０Ｃｏｒ射线全 身照射 ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠;剂量分别为 １、 ６、 １２Ｇｙ,于照射后 ２４ｈ内分批取材,常规石蜡包埋, ＨＥ染色, Ｏｌｙｍｐｕｓ显微镜下观察辐射诱导小肠和结肠细胞凋亡的情况。结果表明：正常小鼠小 肠细胞有自发的凋亡现象,平均每个隐窝的凋亡细胞数为０．０３８±０．０５９个,结肠在正常情况下没 有细胞凋亡发生;不同剂量ｒ射线照射后小肠隐窝细胞凋亡数目明显增加（ｐ ＜０．０５）,其中 １Ｇｙ 照射组凋亡峰在照射后 １２ｈ明显, ６Ｇｙ和 １２Ｇｙ组分别在照射后 ２４ｈ和 ６ｈ凋亡细胞最多。结 肠未见或偶见凋亡细胞;各照射剂量组及照射后不同时间（照射后 ６、 １２、 ２４ｈ）组小肠隐窝细 胞凋亡数较相应结肠组显著增加（ｐ＜０．０５）。说明在电离辐射的情况下,小肠较结肠能更有效的 清除辐射损伤的细胞,而后者在体内的蓄积可能与以后的肿瘤发生有关。     

低聚壳聚糖对辐射损伤小鼠细胞凋亡的影响

从细胞凋亡角度探讨低聚壳聚糖提高辐射损伤动物存活率的机理。小鼠受到5 Gyγ射线照射后,检测骨髓淋巴细胞凋亡数、脾脏细胞凋亡相关基因和P53蛋白的变化。流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR技术检测凋亡基因,Western方法检测蛋白表达。与单纯照射组相比,低聚壳聚糖提高受照小鼠的存活率,降低骨髓淋巴细胞的凋亡细胞数量;下调凋亡相关基因Bax、caspas-3,上调Bc1-2,Bcl-2/Bax比值升高;抑制P53蛋白表达。低聚壳聚糖可能通过抑制P53蛋白表达,影响凋亡相关基因表达,从而抑制凋亡细胞的产生,有效提高受照小鼠存活率。     

脑胶质瘤细胞SHG-44的热、放射敏感性及Fas/FasL表达

观测加热联合放射对SHG-44细胞的影响及相关基因Fas／FasL的表达。采用细胞集落法及流式细胞术观察加热对脑胶质瘤细胞SHG-44放射后集落形成的影响和凋亡的变化，并用RT—PCR法检测Fas／FasL表达。结果表明，放射 42℃加热(加热时间40min)较单纯放射(2Gy)的细胞集落明显减少，热增强比(TER)为1．95；空白对照组、单纯放射组、放射 加热组凋亡比率分别为：20．2、29．3、59．1；Fas在3个实验组中均表达，但FasL仅在单纯放射组、放射 加热组中表达。热能明显增加脑胶质瘤细胞SHG-44的放射敏感性，也表明凋亡与Fas／FasL有关。     

维生素D保护γ射线引起的骨髓基质细胞凋亡

本实验利用骨髓基质细胞（Bone marrow stromal cell，BMSC）克隆形成法、流式细胞仪分析BMSC凋亡、Western—blot分析BMSC内caspase，3蛋白表达研究维生素D对γ射线引起的BMSC损伤的保护作用。小鼠在6Gy的γ射线照射前48h每天皮下注射0．06251ag的1，25二羟基维生素D。结果发现，照射引起小鼠骨髓成纤维细胞集落形成单位（CFU—F）数显著减少。维生素D处理使照射后小鼠的CFU-F与对照组在同一水平。照射使BMSC凋亡率及其caspase-3蛋白的表达显著上升，而维生素D处理可以显著改善这种效果。这些资料说明维生素D具有保护照射引起的BMSC凋亡的作用。