组织激肽释放酶的研究进展

组织激肽释放酶为一类性质相似的化合物,可由肝脏、胰脏、脑神经等合成。人类多种疾病与激肽释放酶基因表达相关,该基因是高血压基因治疗研究的首选靶点。本文综述了激肽释放酶基因与疾病的相关性以及该基因重组载体的构建和表达等研究进展。     

酶法水解蚕蛹制备氨基酸

对以胰酶为催化剂水解蚕蛹制备混合氨基酸的生产工艺进行了研究。考察了酶解时间、树脂交换、温度对氨基酸收率的影响。试验证明：酶解法具有效率高、氨基酸收率高、反应条件温和等特点，适于推广使用。     

人组织激肽释放酶成熟蛋白的纯化及活性分析

目的　制备纯化人组织激肽释放酶 ,并检测其生物活性 ,为中试放大及纯化工艺奠定基础。方法　使用麦芽糖 (MBP)融合分泌载体pMBP P ,构建并筛选出 1株工程菌株 ,在 6L培养基中经IPIG诱导表达人组织激肽释放酶融合蛋白。目的蛋白经亲和层析纯化及凝血酶切割后 ,采用电位滴度法测定其活力。结果　筛选出的工程菌株表达相对分子质量约 70 0 0 0的激肽释放酶融合蛋白 ,大小与预计大小相符。纯化后共获得 2 8mg蛋白 ,并具有水解苯甲酰精胺酸乙酯 (BAEE)的能力。结论　成功进行了人组织激肽释放酶融合成熟蛋白的小量制备 ,经纯化后的产物具有生物活性 ,为中试放大、纯化工艺研究奠定了基础。     

仙人掌粉水提工艺优化及其化妆品功效评价

对仙人掌粉水提工艺进行了优化。分别进行酶的添加、酶的筛选、酶解时间的确定和离子交换工艺的优化,确定了最终的提取工艺流程。并对仙人掌冻干粉酶提液和水提液的化妆品功效（抗敏舒敏性、保湿性）进行了评价和对纤维素酶提仙人掌粉提取液进行了稳定性测试。结果确定采用纤维素酶,提取的工艺条件为温度50℃,pH为5,g／s为1％,固液比为1：20,酶解时间为1h,离子交换上样比例为1：6。酶提法提取的仙人掌粉提取液在抗敏舒敏性、保湿性上均优于水提法提取的仙人掌粉提取液。纤维素酶提仙人掌粉提取液的稳定性良好。     

人组织激肽释放酶基因的克隆及融合蛋白的表达

目的 开发激肽释放酶基因工程产品,为开展基因治疗高血压奠定基础。方法 采用RT-PCR的方法合成人胰腺 cDNA,从中扩增出Kallikrein(KK)基因。经 XhoI和EcoR I双酶切后,连接到pET-28b(+)载体上,酶切鉴定后,进行核苷酸序列分析和融合蛋白的表达。结果 将IPTG诱导表达的菌体进行SDS-PAGE电泳,与蛋白标准品比较,在相对分子质量31800处可见明显的高表达带。免疫印迹实验表明重组蛋白具有KK的抗原性。结论 已成功克隆并表达了人胰腺组织激肽释放酶基因,为进一步开发基因工程产品及进行基因治疗高血压研究打下了基础。     

星点设计-效应面法优化胰蛋白酶提取鱼腥草多糖的工艺研究

利用星点设计-效应面法对胰蛋白酶提取鱼腥草多糖的工艺进行优化,为鱼腥草多糖的酶法提取提供一定的依据。在单因素的试验基础上以酶的添加量、酶解时间、酶解温度为自变量,鱼腥草多糖含量为因变量,对自变量各水平进行多元线性回归拟合,利用效应面法筛选最佳提取工艺并进行预测分析,采用UV测定多糖含量,检测波长490nm。结果表明：经优化得最佳实验条件为酶添加量2%,酶解时间150 min,酶解温度45℃。在此条件下多糖含量为25.93,与模型预测值相符。利用星点-效应面法优化胰蛋白酶提取鱼腥草多糖工艺的方法简便且预测性良好。关键词：鱼腥草;效应面;多糖;酶提工艺     

利用猪胰脏联产三酶新工艺及新分离介质技术

猜胰脏中含有40多种生化药物,用途甚广。其中弹性蛋白酶主要用于高血脂症,防治脂肪肝和动脉粥样硬化;激肽释放酶临床用于高血压、冠状动脉、动脉血管硬化、心绞痛、血管痉挛、肢端感觉异常和闭寒性血栓性脉管炎等;胰酶则是临床疗效确切的助     

pH值和盐浓度对金属螯合亲和层析分离人胰高血糖素样肽-1融合蛋白的影响

目的探讨pH值和盐浓度对金属螯合亲和层析(Immobilized metal ion affinity chromatography,IMAC)分离含His-Tag标签的人胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)融合蛋白的影响,并确定最佳洗脱条件。方法在0.50mol/L盐浓度条件下,分别取pH6.0、7.0、7.8和9.04种缓冲液进行咪唑梯度洗脱;在合适的pH值条件下,分别取氯化钠浓度0.25、0.50和0.75mol/L3种缓冲液进行咪唑梯度洗脱。分析在不同pH值及盐浓度条件下洗脱融合蛋白所需要的咪唑浓度及回收率。结果在所考察的pH值范围内,洗脱融合蛋白所需的咪唑浓度随洗脱液pH值的升高而逐渐降低,当洗脱液pH值为7.8时,融合蛋白的分离效果最佳,大部分杂蛋白被0～40mmol/L咪唑洗脱液去除且不含融合蛋白,而绝大部分融合蛋白在咪唑浓度达80～200mmol/L时被洗出,总回收率达(83.7±1.0)%,且比例较高;在此pH值条件下,氯化钠浓度达0.75mol/L,才会影响融合蛋白的回收率,氯化钠浓度为0.25或0.50mol/L的洗脱液洗出融合蛋白的效果相近;在pH7.8,含0.25mol/L氯化钠的洗脱体系下,用50mmol/L咪唑溶液洗脱杂蛋白,200mmol/L咪唑溶液洗脱融合蛋白,融合蛋白的回收率和比例分别可达(85.2±2.0)%和(80.5±1.0)%。结论在所考察的pH值和盐浓度范围内,提高洗脱液pH值和盐浓度均可降低洗脱融合蛋白需要的咪唑量,但也会降低融合蛋白的回收率。     

用盐析与疏水层析相偶合快速分离提纯猪胰激肽释放酶

将疏水层析技术用于从猪胰脏中分离纯化激肽释放酶,建立了一种简便、快速的分离提纯方法：将粗品溶解后经过硫酸铵沉淀处理,然后经过Butyl Sepharose FF疏水层析后得到目标蛋白,分析其纯度大于500U／mg,盐析和疏水两步纯化的收率大于85．0％,同时比较了Phenyl Sepharose FF,Octyl Sepharose FF和Butyl Sepharose FF三种疏水介质分离纯化胰K的效果,本实验工艺与传统工艺相比,具有操作简单、快速、回收率和纯化倍数高等优点,有望成为一种从动物组织中快速分离纯化药用蛋白质的有效技术平台。     

鲜胰酶激活直接提取猪肺中肝素钠工艺探究

本实验利用猪肺为原料代替竞争激烈的猪小肠提取价格昂贵的生化药物肝素钠。实验中用猪胰脏激活胰酶提取肝素钠代替了传统的离子交换树脂和胰酶。结果表明酶解彻底清澈无渣便于过滤,制得数量和质量均理想的产品,工艺成本低廉,"肺"物利用,绿色环保。     

阳极溶出方波伏安法同时测定竹叶提取物中的铜、铅和镉

在CH3COOH-CH3COONa底液中,用阳极溶出方波伏安法同时测定竹叶提取物中铜、铅、镉3种元素含量,该法的最佳条件为:控制CH3COOH-CH3COONa缓冲溶液的pH=4 5,且c(CH3COONa)=0 12mol/L;选择方波频率为30Hz,电位扫描速度为4mV/s,在-0 8V处富集240s后采用方波伏安法正向扫描至0 15V。当铜、铅、镉金属离子的质量浓度为0 05～30μg/L时,线性关系较好,相关系数分别为0 9985,0 9992和0 9985,加标回收率分别为101 6%,99 0%和101 0%。     

六亚甲基二氨基二甲酸甲酯的制备

六亚甲基二氨基二甲酸甲酯是绿色合成六亚甲基二异氰酸酯(HDI)的前体。利用碳酸二甲酯与己二胺反应生成六亚甲基二氨基二甲酸甲酯,考察了在新型催化剂CH3COONa作用下反应的影响条件。得出了反应的较佳工艺:己二胺和催化剂的摩尔比为10,碳酸二甲酯和己二胺的摩尔比为8,反应温度353 K,反应时间8 h。并对反应机理及合成工艺进行了讨论。     

两性可聚合型丙烯酸酯单体的合成及应用

以甲基丙烯酸二甲氨基乙酯(DM)和氯乙酸钠为原料进行季铵化反应,合成一类新型的两性可聚合型丙烯酸酯单体。考察了季铵化反应时间、温度等因素对单体合成的影响,用混合指示剂两相滴定法测定反应转化率,同时用红外光谱和核磁波谱对产物结构进行了分析。结果表明:以水为溶剂,DM与ClCH2COONa的物质的量比为1∶1.05,在70℃下,反应7h,叔胺转化率可达93.97%。用上述自制单体制备高分子乳化剂,将其用于乳液聚合,制得性能优良的阳离子乳液和阴离子乳液。     

H103大孔吸附树脂分离纯化苦参碱与氧化苦参碱

通过对比苦参总碱在9种大孔树脂上的静态吸附,筛选出对苦参总碱吸附能力较强的H103树脂;研究了H103树脂对上述两种生物碱的吸附等温曲线及吸附动力学行为;考察了苦参总碱在H103树脂上的动态吸脱附过程,用薄层色谱法(TLC)对洗脱液跟踪分析,用高效液相色谱法(HPLC)检测苦参碱、氧化苦参碱含量,确定了动态吸脱附的过程参数。结果表明,H103树脂对苦参总碱的等温吸附可采用Freundlich方程描述;由吸附动力学曲线得H103树脂在100 min内达到平衡,具有较快吸附速度,吸附动力学规律可用二级速率方程表示;动态吸脱附过程的洗脱条件为:用体积分数30%乙醇-体积分数25%氨水(体积比115∶1),体积分数80%乙醇梯度洗脱,氧化苦参碱先被洗脱,苦参碱随后,两种生物碱可达到很好的分离,经计算苦参碱收率为90.1%,氧化苦参碱收率为85.3%。     

嗜盐隐杆藻生长及其产糖规律

比较不同 C、N源对嗜盐隐杆藻细胞生长及胞外多糖产量的影响。结果显示 ,硝态氮是该藻细胞生长及产糖的最佳 N源 ;大气中 CO2 是藻细胞生长的最佳碳源 ,而胞外多糖 (EPS)的产出量在以醋酸钠为碳源时最高。培养时间越长越利于 EPS的积累 ,且在后期 EPS的增长速率快于前期。DEAE-纤维素二次柱层析纯化得胞外多糖精品     

超临界CO_2萃取曼地亚红豆杉枝条中的紫杉醇

用超临界CO2流体萃取技术从曼地亚红豆杉枝条中提取紫杉醇。在分离釜Ⅰ和Ⅱ温度为30℃、压力为6.5MPa、CO2体积流量为25L/h条件下,正交实验优化所得萃取过程的最佳工艺参数为:萃取时间3.5h;萃取压力30MPa;萃取温度47℃;夹带剂为φ(CH3CH2OH)=85的乙醇溶液。萃取方式为静态和动态萃取相结合。最佳工艺条件下各用35.0g原料进行3次验证实验,紫杉醇的平均提取量为9.58mg,平均提取率87.76;浸膏中紫杉醇质量分数为1.12,高于传统的溶剂浸提(浸膏中紫杉醇的质量分数约0.87)。     

高效液相色谱法测定化妆品中的苯氧异丙醇

以超声辅助提取法对不同基质类型的化妆品样品进行预处理,采用高效液相色谱法测定化妆品中的苯氧异丙醇,色谱条件为:Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.,5μm),流动相为V(水)∶V(乙腈)∶V(甲醇)∶V(四氢呋喃)=60∶25∶10∶5的混合溶液,流速1.2 mL/min,检测波长268 nm,柱温30℃。结果表明,在此条件下苯氧异丙醇在1.0~200.0μg/mL范围内与相应的峰面积具有良好的线性关系(相关系数r=0.999 9),线性回归方程为A=74 280ρ-23 780,回收率为95.6%~102.4%,RSD为0.66%~1.05%。     

茶皂素提取条件的优化及纯化研究

以油茶茶籽粕为原料，采用乙醇水溶液提取茶皂素。在茶籽粉和乙醇料液比1 : 9(g : mL)，乙醇体积分数60%，提取温度60 ℃和提取时间3 h的最佳条件下茶皂素的提取得率达14.9%。用NKA-9型大孔吸附树脂吸附纯化茶皂素粗品，树脂静态吸附与解吸结果表明：树脂静态吸附茶皂素粗提液0.5 h基本饱和，体积分数80%乙醇解吸率为91.1%；动态吸附与解吸时，上样流速8 mL/min较佳，吸附率为66.04%，体积分数80%乙醇洗脱，洗脱流速5.0 mL/min，洗脱体积50 mL时，可使流出液中茶皂素质量浓度在1.25~1.57 g/L之间，茶皂素纯度为95%。     

可见分光光度法测定阿司匹林中水杨酸含量的探究

研究了用分光光度法快速、准确测定阿司匹林（ASP）中水杨酸（SA）含量的方法。以FeCl3为显色剂,通过测含杂质的阿司匹林溶液的吸光度来测定其中SA含量,考虑了pH、温度、反应时间、显色剂用量等因素对络合物生成量及稳定性的影响,确定了最适宜的测定条件,并绘制了标准工作曲线。结果表明,在pH值=3的CH3COOH—CH3COONa缓冲溶液中,Fe3＋与SA生成较稳定的络合物,络合比为1：1,常温下10min即可络合完全,该络合物的最大吸收波长为512nm。该定量方法测量误差在2．5％以内。     

微波法提取川木香中的木香烃内酯和去氢木香内酯的研究

∶微波法提取川木香中的木香烃内酯和去氢木香内酯,考察了微波功率、辐射时间、料液比对提取率的影响。最优工艺条件是微波辐射功率为400 W,辐射时间为3 min,料液比为1∶30(g/mL)。在此工艺条件下,提取率可以分别达到0.76%和2.31%。