巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium NCIB 8508蔗糖磷酸化酶的分离鉴定

对巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium NCIB 8508蔗糖磷酸化酶进行了分离鉴定。结果表明,该酶催化可逆反应,分子量大小约为56 kDa,最适pH值为7.5,最适温度为50℃。为利用巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium NCIB 8508以蔗糖为原料直接合成蔗糖-6-乙酸酯提供了新的研究思路。     

一种转葡萄糖苷酶基因的克隆表达及其生物催化合成α-熊果苷

通过一步法克隆试剂盒将来自野油菜黄单胞菌的转葡萄糖苷酶基因与表达载体pET28a同源重组,构建质粒pET28a-agl,并转化到不同感受态细胞中,筛选出高效表达转葡萄糖苷酶的基因工程菌E.coli BL21 Gold(DE3)plysS pET28a-agl,以催化合成α-熊果苷。利用IMAC亲和层析,获得转葡萄糖苷酶用于其酶学性质的研究。催化合成α-熊果苷的较佳反应条件为:转葡萄糖苷酶的质量浓度0.272 5 g/L,对苯二酚质量浓度11 g/L,麦芽糖浓度1.1 mol/L,磷酸盐缓冲液浓度100 mmol/L(pH=6.5),30℃下摇床反应3 h。研究发现,反应产物α-熊果苷对转葡萄糖苷酶反应有轻微的抑制作用;1 mmol/L K~+对转葡萄糖苷酶的相对酶活有提高作用,1 mmol/L Cu~(2+)几乎能完全抑制该酶活性。     

嗜麦芽黄单胞菌BT-112催化制备α-熊果苷

探讨了利用嗜麦芽黄单胞菌BT-112（Xanthornonas maltophilia BT-112）进行发酵，生物催化合成α-熊果苷的工艺。实验得出较佳反应条件为：对苯二酚和蔗糖的摩尔比为1：2，摇床180r／min，菌体对对苯二酚的最大耐受度为48mmol／L，流加4次，在35℃下反应48h。在此条件下α-熊果苷生成率（以对苯二酚计算）高达91．2％。通过大孔吸附树脂进行分离纯化，最后可得到纯度为99％以上的产物，经仪器分析，确定产物为α-熊果苷。     

野油菜黄单胞菌胞内粗酶液催化合成α-熊果苷

利用野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris pv.campestris）8004胞内粗酶液生物催化合成α-熊果苷,考察了对苯二酚浓度、反应物摩尔比、缓冲溶液pH值、反应时间、菌体浓度等因素对反应的影响。确定最佳反应条件为：反应温度35℃、摇床转速180r.min-1、对苯二酚浓度40mmol.L-1、对苯二酚与蔗糖的摩尔比1∶30、缓冲溶液pH值7.0、反应时间36h、菌体浓度80mg.mL-1,在此条件下,α-熊果苷含量达到6.58mg.mL-1、对苯二酚选择性为66%、对苯二酚转化率为91%。     

重组枯草芽孢杆菌全细胞催化合成2’-脱氧腺苷

以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为宿主，以脱氧胸苷和腺嘌呤为底物，异源组合表达来源于大肠杆菌（Escherichia coli）的嘧啶核苷磷酸化酶与嘌呤核苷磷酸化酶作为催化酶源，全细胞催化合成2’-脱氧腺苷。首先，通过对比不同宿主来源的核苷磷酸化酶确定最适的酶组合表达，并对核糖体结合位点（Ribosome binding site, RBS）序列进行优化，获得全细胞催化合成2’-脱氧腺苷的重组B. subtilis , 2’-脱氧腺苷的产量为133.4 g/L，脱氧胸苷的摩尔转化率为64.3%；其次，利用互作短肽构建自组装多酶复合物，显著提升了底物转化效率，2’-脱氧腺苷的产量达到179.6 g/L；最后，对全细胞催化条件细胞添加量及温度进行优化，进一步提高了2’-脱氧腺苷的产量，最终优化后的2’-脱氧腺苷的产量达到200.3 g/L，底物脱氧胸苷的摩尔转化率为96.6%。     

基础环境因素对α-熊果苷和β-熊果苷稳定性的影响

通过高效液相色谱法检测α-熊果苷溶液中是否有对苯二酚产生,来分析基础环境因素对α-熊果苷稳定性的影响,同时对比α-熊果苷和β-熊果苷在不同基础环境条件下的稳定性差异。结果表明,在达到100℃后,α-熊果苷仍保持稳定;在pH=1和13时,α-熊果苷表现不稳定,而在偏中性条件下,α-熊果苷较稳定;光照和紫外线照射都会对α-熊果苷稳定性产生影响。由2种熊果苷稳定性对比得知,两者在相同pH和光照影响下,稳定性检测结果相同;而在温度的影响下,β-熊果苷溶液在达到60℃后表现出不稳定性。     

酶催化区域选择性合成蔗糖酯的研究进展

详细综述了非水相酶催化合成蔗糖酯的研究进展。主要介绍了酶的种类、反应介质、底物性质、外加辅助手段等因素对蔗糖酯产率以及对酶区域选择性的影响。酶催化区域选择性合成蔗糖酯的难点在于蔗糖具有多个可酰化羟基及其与酰基供体的不相溶性,提出通过介质工程、底物修饰改性、外加物理场如微波和超声波辅助等改善底物相溶性,通过筛选酶、蔗糖修饰等可以得到高区域选择性的蔗糖酯。最后指出酶催化合成蔗糖酯存在的问题、发展前景等。     

添加表面活性剂对α-熊果苷发酵的影响

探讨了不同表面活性剂对嗜麦芽黄单胞菌BT-112(Xanthomonas mahophilia BT-112) 催化合成α-熊果苷的影响。通过比较不同种类、不同浓度的表面活性剂及其加入时间，实验得出最佳表面活性剂为Tween80，最适反应条件为：Tween80浓度为3 g·L^-1，加入时间为12h，流加次数为3次，每次浓度1 g·L^-1。在此条件下对苯二酚的转化率为96.2 %，菌体对对苯二酚的最大耐受度为60 mmol·L^-1 ,分别比空白提高了3.53%和25.0%，发酵周期为36h，比空白缩短了25%。     

生物法拆分α-苯乙醇

从土壤中筛选出一株能高效选择性氧化(S)-(-)-1-苯乙醇的菌株JX13,初步鉴定为草酸杆菌(Oxalobacteraceae sp.)。将其用于不对称氧化拆分消旋α-苯乙醇的反应。研究表明,菌株Oxalobacteraceae sp.JX13适合的催化拆分条件为:碳源、氮源分别为糊精和蛋白胨,发酵72 h,α-苯乙醇质量浓度为4 g/L,反应体系初始pH=6,30℃反应72 h。在此条件下,(S)-(-)-1-苯乙醇的转化率为98.63%,(R)-(+)-1-苯乙醇对映体过量值ee=98.01%。     

巨大芽孢杆菌(ACCC10011)制备煤矸石肥料的研究

针对全国煤矸石利用率较低,堆积的大量煤矸石污染环境,以贵州煤矸石为例,掺杂磷矿并利用微生物降解法制作肥料,为煤矸石的利用寻找一条可行途径.采用巨大芽孢杆菌(ACCC10011)处理煤矸石与磷矿掺杂物,研究了接菌量、体系pH、两矿比例、培养时间及体系摇动对肥料的影响.研究发现:当接菌量为6 × 1014～ 1.36×1015个/g,pH为6.5,煤矸石与磷矿配比为1∶1,培养3d,目数为120目条件下,制作的肥料中有效磷占全磷的比例由5.65％提高至70.9％,有效硅占全硅的比例由0.039 0％提高至61.5％.     

巨大芽孢杆菌产青霉素酰化酶培养基的优化

通过正交实验考察了苯乙酸、酶水解酪蛋白和溶氧对产青霉素G酰化酶的影响,实验中苯乙酸作为诱导剂和碳源起作用,其消耗与溶氧具有交互作用,正交实验表采用L9（3^4）。结果表明,苯乙酸含量与溶氧浓度是最主要的因素,最优发酵培养基组成为：酶水解酪蛋白含量为10 g/L,苯乙酸含量为20 g/L,MgCl2·6H2O含量为0.5 g/L,FeCl3·6H2O含量为0.002 g/L,250 mL三角瓶装液量为30 mL。     

芽孢杆菌应用于聚乳酸的降解及其降解条件的研究

采用液体培养法,将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌应用于聚乳酸生物降解,探究降解过程中培养条件的改变,对蛋白酶活性以及薄膜降解过程的影响。结果表明：不同种类的诱导物能够提高芽孢杆菌的蛋白酶活性,巨大芽孢杆菌的最高蛋白酶活性约为23.79 U/mL,枯草芽孢杆菌的最高蛋白酶活性约为11.61 U/mL,解淀粉芽孢杆菌的最高蛋白酶活性约为21.23 U/mL。三种芽孢杆菌中,巨大芽孢杆菌对聚乳酸的生物降解影响最大。初始pH值为8.0,接种2%(V/V)种子液,1%酵母浸粉作为降解诱导物,可以有效加快巨大芽孢杆菌对聚乳酸的降解速率,5 d后降解率可达20.96%。薄膜表面存在菌生长,生物降解后出现轻微裂痕。     

α-氰基丙烯酸乙酯的无催化合成研究

以氰乙酸乙酯和多聚甲醛为原料合成α 氰基丙烯酸乙酯 ,无催化合成的最优反应条件是 :n(CNCH2 COOC2 H5)∶n[(HCHO) n]=1 0 0∶1 0 5、反应温度 82～ 85℃、溶剂 (乙酸乙酯 )用量 2 0 0mL mol氰乙酸乙酯、反应时间 3h ,合成收率 58.2 % (质量分数≥ 99 0 % )。     

α-糜蛋白酶催化合成二吡咯甲烷衍生物

以α-糜蛋白酶为生物催化剂,以体积分数40%的乙醇水溶液为反应介质,50℃下,通过吡咯与醛的串联反应,合成了一系列二吡咯甲烷衍生物。当对硝基苯甲醛1 mmol,吡咯4 mmol,α-糜蛋白酶20 mg,该反应在50℃时反应3 h即可完成,具有较好的底物适应性,且产率最高可达69%,也无需氮气保护。     

α-酮酰化合物催化合成与机理研究简述

酮酰胺化合物是一类重要的胺类化合物,广泛存在于天然产物中,是一类重要的有机合成中间体,其双官能团及多反应中心的特性使其具有特殊的化学性质,故近年来α-酮酰胺化合物的合成引起科研工作者的广泛关注。对近些年α-酮酰胺化合物的合成及机理研究作了简述,并对未来的研究方向进行了展望。     

化妆品基质原料对α-熊果苷美白功效及稳定性的影响

通过构建酪氨酸酶催化反应体系,研究化妆品基质原料对α-熊果苷美白功效的影响。结果表明,实验中使用的表面活性剂Tween 80,脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES),脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO9)和保湿剂丙三醇及防腐剂尼泊金甲酯均对酪氨酸酶有抑制作用,它们与α-熊果苷对酪氨酸酶的抑制作用表现出共抑制效应;所选的金属离子(铜离子、镁离子)对酪氨酸酶有激活作用,铜离子的激活作用远大于镁离子,约为其75倍。采用高效液相色谱法分析化妆品基质原料对α-熊果苷稳定性的影响,α-熊果苷的稳定性通过分析α-熊果苷是否分解产生氢醌来评价。结果表明,α-熊果苷在表面活性剂Tween 80,AES,AEO9和保湿剂丙三醇以及金属离子(铜离子、镁离子)的溶液中稳定性良好,均未检出氢醌;α-熊果苷在防腐剂尼泊金甲酯中稳定性差,在尼泊金甲酯溶液中分解产生氢醌的质量分数达到4.45%。     

金属催化的α-酮酰胺化合物合成研究进展

酮酰胺化合物是一类重要的胺类化合物,其独特的双官能团和多反应中心的特性引起了科学家们的极大兴趣。以过度金属催化合成α-酮酰胺的方法具有反应高效、产率高等优点。综述了近些年金属催化的炔胺氧化酰胺化、卤代烃双羰化、芳基酮酸缩合、芳酮氧化合成α-酮酰胺化合物的方法,并对未来的发展趋势作了展望,希望给研究人员提供一些参考与帮助。     

水合硫酸铁催化合成α-呋喃丙烯酸酯

用糠醛为起始原料合成中间体α-呋喃丙烯酸,然后在Fe2(SO4)3·xH2O催化下分别和甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇、正戊醇、异戊醇进行酯化反应,合成了α-呋喃丙烯酸甲酯、α-呋喃丙烯酸乙酯、α-呋喃丙烯酸正丙酯、α-呋喃丙烯酸正丁酯、α-呋喃丙烯酸异丁酯、α-呋喃丙烯酸正戊酯、α-呋喃丙烯酸异戊酯.研究了醇酸摩尔比、反应时间、催化剂用量对收率的影响,获得了较佳反应条件,7种α-呋喃丙烯酸酯的收率在86.5%～94.6%之间.利用IR,1HNMR和元素分析对产物结构进行了表征.     

三相相转移催化合成α-丁基苯乙腈

利用固载化聚乙二醇和固载化季铵盐作三相相转移催化剂 ,催化合成了 α-丁基苯乙腈。该合成方法具有收率高、易操作、反应条件温和等优点。所用固载催化剂易于回收 ,且重复使用性能良好。     

α,α-二苯基-4-哌啶甲醇催化氢化合成工艺研究

研究了催化氢化法合成α,α-二苯基-4-哌啶甲醇的工艺。以Pt/C为催化剂,考察了反应溶剂,压力,反应时间和催化剂添加比例对催化加氢反应的影响。在优惠的工艺条件下,α,α-二苯基-4-哌啶甲醇的收率可达92.4%,产品纯度为98.8%。