Partial characterization of glutathione S-transferases in pyrethroid-resistant and -susceptible populations of the maize weevil, Sitophilus zeamais

Glutathione S-transferases (GSTs) from a susceptible (Sete Lagoas) and two pyrethroid-resistant populations (Jacarezinho and Juiz de Fora) of the maize weevil Sitophilus zeamais Motschulsky (Coleoptera: Curculionidae) were characterized through in vitro colorimetric assays. GSTs showed higher activity peaks at pH 9.0 and 30 °C. The K_m-values for GSTs were similar among the populations except for the resistant population from Juiz de Fora, which was about two-fold higher than the susceptible population from Sete Lagoas when using 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB) as substrate (and a fixed concentration of reduced glutathione—GSH). The V_max of this same resistant population was also over two-fold higher than that of the pyrethroid-susceptible population when CDNB and GSH were used as substrates. The resistant population from Jacarezinho also had a slightly, but significantly, higher V_max than the susceptible population when using these two substrates. However, there were no significant differences among the kinetic parameters of GSTs from the maize weevil populations when DCNB and GSH were used as substrates. These results provide evidence of the involvement of enhanced GST activity as an additional pyrethroid-resistant mechanism in at least some maize weevil populations from Brazil.     

生牛肉中沙门菌的血清型鉴定与耐药性检测

目的了解新疆地区生牛肉中沙门菌的血清型和耐药状况。方法采用沙门菌诊断血清试剂盒检测血清型,微量肉汤稀释法检测分离菌株的耐药性。结果 28株牛肉源沙门菌共检出11种血清型,其5种优势血清型分别为伦敦沙门菌(17.9%)、德尔卑沙门菌(10.7%)、伤寒沙门氏菌(10.7%)、甲型副伤寒沙门菌(10.7%)和阿贡纳沙门菌(10.7%);沙门菌对10种抗菌药物耐药结果显示菌株对甲氧苄啶、氯霉素、四环素的耐药率最高,分别为100%、92.9%和75%,对氟苯尼考最为敏感,耐药率为7.1%。所有的菌株可耐2种或2种以上的抗生素。结论新疆地区牛肉源沙门菌存在一定的致病性,耐药状况比较严重。     

徐州市禽源弯曲菌的分离鉴定及耐药性分析

目的 了解徐州市市售禽肉中弯曲菌的污染状况及对抗生素的耐药情况。方法 随机采集农贸市场及超市新鲜或冷冻禽肉72份,采用滤膜法分离培养鉴定弯曲菌;采用琼脂稀释法测定分离出的菌株对6类11种抗生素的耐药性。结果 72份样品中共检出29份弯曲菌,总检出率为40.28%（29/72）,空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检出率分别为19.44%（14/72）和20.83%（15/72）;新鲜禽肉和冷冻禽肉检出率分别为68.72%（22/32）和17.5%（7/40）,差异有统计学意义（χ2=19.412,P<0.05）,空肠弯曲菌在新鲜禽肉和冷冻禽肉中检出率分别为34.38%（11/32）和7.5%（3/40）差异有统计学意义（χ2=8.198,P<0.05）,结肠弯曲菌在新鲜禽肉和冷冻禽肉中检出率分别为34.38%（11/32）和10%（4/40）差异有统计学意义（χ2=6.404,P<0.05）;空肠弯曲菌耐药较高的五种抗生素为：萘啶酸100.00%(14/14)、环丙沙星100.00%(14/14)、四环素100.00%(14/14)、 氟苯尼考64.29%(9/14) ,庆大霉素28.57%(4/12);结肠弯曲菌耐药较高的五种抗生素为：萘啶酸100.00%(15/15)、环丙沙星100.00%(15/15)、四环素100.00%(15/15)、链霉素86.67%(13/15),庆大霉素80%(12/15) ;两种弯曲菌的多重耐药性均为100.00%。结论 徐州市市售禽肉中弯曲菌污染率较高,其中新鲜禽肉较冷冻禽肉中检出率高,徐州地区弯曲菌耐药情况严重     

新疆库尔勒市鸡肉源沙门氏菌的分离鉴定及 耐药性分析

目的了解新疆库尔勒市鸡肉沙门氏菌污染状况和沙门氏菌分离株对常用抗菌药物的耐药性。方法参考食品安全国家标准GB 4789.4-2010,利用生化反应与普通PCR方法结合进行沙门氏菌分离鉴定,采用微量肉汤稀释法进行常见抗菌药物敏感试验。结果 180份鸡肉样品共检出沙门氏菌阳性样品27份,分离鉴定到阳性沙门氏菌28株,污染率为15.00%;10种抗生素药物敏感试验表明:沙门氏菌分离菌株对甲氧苄啶的耐药率高达100%,氯霉素为89.30%、磺胺异噁唑为85.70%,四环素为78.60%、氨苄西林为71.40%、阿莫西林为71.40%、链霉素为64.30%、环丙沙星为53.60%,对诺氟沙星和氟苯尼考的耐药率低于50%,分别为32.10%和25.00%。结论新疆库尔勒市鸡肉中沙门氏菌存在一定程度的污染,耐药状况比较严重。     

北京市售鸽肉中大肠杆菌和沙门氏菌分离鉴定及耐药性分析

目的对北京市售鸽肉中大肠杆菌和沙门氏菌进行分离鉴定,并对分离菌株进行抗生素耐药性分析。方法使用缓冲蛋白胨水增菌液淋洗肉鸽样品后,使用大肠杆菌(E.coli,EC)增菌肉汤和丹麦国家血清研究院(Statens Serum Institute, SSI)肠道细菌琼脂分离大肠杆菌,使用四硫磺酸盐(tetrasulfonate, TT)增菌肉汤和木糖赖氨酸脱氧胆盐(xyloselysinedeoxycholate,XLD)琼脂平板分离沙门氏菌,使用生化鉴定进行可疑菌确认。参照CLSI2016版推荐的肉汤稀释法,测定15种抗生素对所分离大肠杆菌和沙门氏菌的最低抑菌浓度(minimalinhibitory concentrations,MICs)。结果样品(n=200)中大肠杆菌(n=104)检出率为52.0%,沙门氏菌(n=41)检出率为21.0%。所分离的42株沙门氏菌菌株均对头孢他啶、氨曲南、厄他培南和替加环素敏感,对氨苄西林、萘啶酸、环丙沙星、四环素、复方新诺明和氯霉素的耐药率在30%以上,部分菌株对头孢噻肟(4.8%)和黏菌素(2.4%)耐药。所分离的104株大肠杆菌菌株均对替加环素敏感,对氨苄西林、头孢噻肟、氨曲南、萘啶酸、环丙沙星、四环素、复方新诺明、氯霉素和卡那霉素的耐药率在30%以上,部分菌株对头孢他啶(2.9%)、厄他培南和(1.0%)和黏菌素(9.6%)耐药。结论北京市售鸽肉是耐药大肠杆菌和沙门菌的重要储存库,相较于我国其他地区市售猪肉,鸡肉,牛肉等分离的耐药菌株,表现出不同的耐药谱,耐药率相对较低,但是北京市售鸽肉所携带的菌株已经累积了复杂的耐药特征,有必要对其中存在的耐药机制进行系统研究。     

抗菌肽对于病原微生物的抗菌及耐药机制

抗菌肽作为多种生物抵抗病原体的第一道防线,可以作为生物体内的天然免疫屏障,也可以在食品工业中用作天然防腐剂。该文叙述了抗菌肽杀灭细菌的作用机制以及微生物耐受抗菌肽的基本原理。无论是抗菌肽对病原微生物的抗菌作用还是病原微生物的耐抗性,其主要机制都与膜的生理功能和胞质成分变化有关。对于抗菌,主要是通过阻碍或破坏细胞壁的形成、与胞内靶位点结合以及抑制主要的脱氧核糖核酸（DNA）复制酶从而达到抗菌效果。微生物对于抗菌肽耐药性的实现主要是有机体通过先天的组成型抗性和后期的诱导型抗性。这些信息可能有助于选择最佳的抗菌肽,并建立有效的使用途径。     

2018—2019年密云地区肠聚集性大肠埃希氏菌基因型及耐药分析

目的 了解密云地区食源性疾患肠聚集性大肠埃希氏菌的感染情况、毒力基因型分布和耐药趋势.方法 以密云区区医院、中医院为哨点医院,收集腹泻病人粪便868份.分离出68株肠聚集性大肠埃希氏菌,进行基因分型、耐药实验,并对结果进行统计学分析.结果 68株肠聚集性大肠埃希氏菌基因型aggR占51.47％,astA+pic基因占3...     

Use of a YAP1 overexpression cassette conferring specific resistance to cerulenin and cycloheximide as an efficient selectable marker in the yeast Saccharomyces cerevisiae.

Drug-resistance markers for yeast transformation are useful because they can be applied to strains without auxotrophic mutations. However, they are susceptible to technical difficulties, namely lower transformation efficiency and the appearance of drug-resistant mutants without the marker. To avoid these problems, we have constructed a phosphoglycerate kinase (PGK) promoter-driven YAP1 expression cassette, called PGKp-YAP1. Yeast cells containing PGKp-YAP1 were resistant to cycloheximide, a protein synthesis inhibitor, and also to cerulenin, a fatty acid synthesis inhibitor, but not to other drugs tested. The transformation efficiency of PGKp-YAP1 using cerulenin selection was comparable to that using a URA3 auxotrophic marker when low concentrations of cerulenin were used. Non-transformed drug-resistant colonies did appear on the low-concentration cerulenin plates. However, these non-transformed colonies could easily be identified, based on their cycloheximide sensitivity and/or their resistance to aureobasidin A to which the transformants were sensitive. Therefore, the dual drug resistance of PGKp-YAP1 could be used as an effective selection for PGKp-YAP1 recipient cells. The PGKp-YAP1 marker was used to disrupt the LYS2 gene and to transform an industrial yeast strain, indicating that this marker can be used for efficient and reliable gene manipulations in any Saccharomyces cerevisiae strain.     

基于刃天青的电化学方波伏安法快速鉴别大肠杆菌的耐药性

目的：评价5株食源性大肠杆菌临床分离株对环丙沙星、庆大霉素和氨苄西林的抗生素耐药性。方法：基于细菌能量代谢过程中的电子传递理论,引入刃天青作为氧化还原探针,建立了一种基于刃天青介导的大肠杆菌耐药性快速鉴别的电化学方波伏安法（square wave voltammetry,SWV）。结果：在1.69×10²～1.69×10⁸ CFU/mL范围内,大肠杆菌浓度与刃天青氧化峰电流（I）之间存在较好的线性关系,回归方程为Y=-0.156 0X-2.965 5,R²=0.977 5;在进行大肠杆菌耐药性测定时,参考美国临床和实验室标准协会制定的药敏试验标准,以刃天青的氧化峰电流（I₀）和大肠杆菌直接与刃天青作用后得到的氧化峰电流（I_-a）作为对照,测定大肠杆菌用抗生素处理后与刃天青作用得到氧化峰电流（I_+a）,引入细菌活性值V_ETA作为电化学方波伏安法鉴别细菌耐药性的指标,建立了刃天青介导的大肠杆菌电化学快速药敏试验方法;运用建立的方法检测了5种食源性大肠杆菌临床分离株对3种抗生素的耐药性,以V_ETA=50作为判断细菌敏感和耐药的临界值,均得到与纸片扩散法结果相符的药敏试验结果,而纸片扩散法报告结果需18 h,该法仅需2 h。结论：建立的基于刃天青介导的大肠杆菌耐药性快速鉴别的电化学方波伏安法能够准确且快速检测5株食源性大肠杆菌临床分离株对环丙沙星、庆大霉素和氨苄西林的抗生素耐药性。     

2017—2020年江苏省无锡市沙门菌的血清型与耐药性研究

目的 分析2017—2020年江苏省无锡市沙门菌报告病例的血清型特点和抗生素耐药性流行特征及变化趋势。方法 收集分离自 2017—2020年无锡市食源性疾病哨点监测医院腹泻病例（住院和门诊患者）标本中的216株沙门菌菌株,采用玻片凝集法对216株菌进行血清型鉴定及分析,并采用微量肉汤稀释法检测沙门菌对13种抗生素的药物敏感性。结果 216株沙门菌分为42种血清型,优势血清型分别为肠炎沙门菌28.70%（62/216）占比,鼠伤寒沙门菌26.39%（57/216）。耐药性分析结果显示,216株沙门菌对美洛培南、阿米卡星、阿奇霉素和头孢他啶高度敏感,高敏菌株占比均高于90%;所有沙门菌对氨苄西林的耐药率最高,达到68.06%,对美洛培南的耐药率最低,仅0.46%;沙门菌在2017—2020年对氨苄西林的耐药率呈逐年增高的趋势,且每年沙门菌分离株对氨苄西林耐药性最高;共130株菌株产生了多重耐药性（60.19%）,耐药菌株数最多的耐药谱为AMP-TET-STR,占比5.56%（12/216）,优势耐药谱不明显。结论 无锡市沙门菌的流行血清型以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,且沙门菌耐药性形势严峻,应该尽快建立高效的管控机制, 加强药敏监测, 优化治疗方案, 避免抗生素滥用。     

Disruption of the ABC transporter genes PDR5, YOR1, and SNQ2, and their participation in improved fermentative activity of a sake yeast mutant showing pleiotropic drug resistance

Clotrimazole-resistant mutants from sake yeasts show improved fermentative activity in sake mash and pleiotropic drug resistance (PDR). The PDR mechanism is interpreted by overexpression of ATP-binding cassette (ABC) transporters, which extrude various kinds of drugs out of a cell. In a clotrimazole-resistant mutant, CTZ21, isolated from the haploid sake yeast HL69, the levels of mRNA for three major ABC transporter genes, PDR5, SNQ2, and YOR1, markedly increased. These three genes of CTZ21 were disrupted to investigate which participated in the improved fermentative activity of CTZ21. The fermentative activities of Δpdr5 and Δsnq2 strains of CTZ21 were reduced to that of HL69 in the initial and middle stages of fermentation. In the last stage, however, the sake meter [(1/gravity-1) × 1443] of the Δpdr5 and Δsnq2 strains rose faster than that of HL69. On the other hand, a Δyor1 strain of CTZ21 fermented sake mash in a manner nearly identical to that of CTZ21 until the last stage of fermentation. But in the last stage, fermentation of the Δyor1 slowed down compared with that of CTZ21. A Δyor1 strain of HL69 also exhibited much reduced fermentative activity in the middle and last fermentation stages. The YOR1 gene seems necessary for sake fermentation to be completed efficiently. The ATP content in sake mash brewed with CTZ21 was drastically decreased throughout the whole fermentation period. This low ATP level was restored to a medium level in the cases of both the Δpdr5 and Δsnq2 strains of CTZ21. In contrast, the Δyor1 of CTZ21 exhibited a low ATP level in sake mash in the same manner as CTZ21. These results suggest that the low ATP level of CTZ21 contributes to a certain extent its improved fermentative activity in the initial and middle stages of sake fermentation.     

2015~2019云南省伤寒、副伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳分子分型及耐药研究

目的 了解云南省伤寒、副伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分子分型及耐药状况,为它们的防控提供科学依据。方法 参照中国细菌性传染病分子分型实验室监测网络PulsenetChina的沙门菌PFGE分子分型方法进行分子分型。分析耐药板最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值,根据美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standard Institute,CLSI)的相应标准得出敏感、中介、耐药(S、I、R)结果。结果 36株伤寒、副伤寒沙门菌呈22种PFGE带型,有5组优势带型,组之间菌株有明显的时间、地域同源性。对萘啶酸(NAL)耐药率最高,为55.55%,对庆大霉素(GEN)最敏感,敏感率100%。此外有16.68%菌株对3类以上抗菌素耐药。结论 云南省伤寒、副伤寒沙门菌分子分型结果提示5-8月存在甲型副伤寒局部爆发,应加强甲型副伤寒疾病的监测。云南省伤寒及副伤寒对萘啶酸(NAL)耐药率最高,对庆大霉素(GEN)最敏感, 菌株存在多重耐药性。     

内蒙古达茂旗牧区牛乳中乳酸菌的鉴定与耐药性分析

本研究以内蒙古达茂旗牧区牛乳中分离的16株乳酸菌为研究对象,采用形态观察、生物学特性实验和16S r RNA鉴定,并用纸片扩散法对阿莫西林、氨苄西林和红霉素三种抗生素进行了耐药测定。结果显示,除DM8为乳酸乳球菌、DM21为约氏乳杆菌外,其余均为植物乳杆菌;供试菌株对阿莫西林的耐药率为12.5%,对氨苄西林和红霉素表现为敏感。经分析,敏感菌株不完全是安全菌株。      

2007—2016年四川省德尔卑沙门菌耐药与分子分型分析

目的 研究2007—2016年四川省德尔卑沙门菌分子分型和耐药趋势,掌握四川省德尔卑沙门菌污染状况,为暴发预警、溯源调查及抗生素使用策略提供参考数据。方法 运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和微量肉汤稀释法对2007—2016年四川省自临床病例、食品从业人员、食物中毒样品、养殖动物及零售食品中分离的106株德尔卑沙门菌进行分子分型及14种抗生素的敏感性测试。结果 106株德尔卑沙门菌对8类14种抗生素均有不同程度耐药,人源性和动物源性菌株对四环素、萘啶酸、氯霉素、复方磺胺的耐药率均大于20%。其中人源性菌株对头孢噻肟、环丙沙星、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉的耐药率均明显高于动物源性菌株;动物源性菌株对四环素、萘啶酸、氯霉素耐药率均明显高于人源性菌株。经Xba I酶切后106株菌共分为67个PFGE带型,不同年份的临床病例、食品从业人员及零售食品生猪肉分离株具有相同PFGE带型。结论 四川省德尔卑沙门菌分离株耐药率较高,并有逐年上升趋势。PFGE型别呈多样性,部分临床病例、食品从业人员分离株与生猪肉分离株PFGE具有相同带型。     

合肥市售鸡蛋壳表面与内容物沙门氏菌污染的 检测及其分离株耐药性分析

目的 了解市售鸡蛋壳表面、内容物中沙门氏菌的污染情况及分离菌株的血清型分布与耐药性。方法 采用沙门氏菌常规检测法并结合PCR技术, 对采自合肥市农贸市场、超市的100枚鸡蛋进行检测; 利用国标法和K-B 纸片法对分离株进行血清型鉴定和抗生素药物敏感试验。结果 蛋壳表面沙门氏菌检出率为10%(10/100), 蛋内容物沙门氏菌检出率为1%(1/100); 11株沙门氏菌分离株血清型均为鸭沙门氏菌; 14种抗生素药物敏感试验中, 对青霉素100%耐受, 链霉素18.2%耐药, 36.4%中等耐药率, 其余抗生素均敏感。 结论 合肥市售鸡蛋壳表面的沙门氏菌检出率高于蛋内容物, 抗生素选择压力导致不同地区沙门氏菌分离株的血清型和耐药性有所不同。     

1株食源性蜡样芽胞杆菌分离株的分子特征毒性及耐药性研究

目的 研究株蜡样芽胞杆菌SCY分离株的毒力和耐药性。方法 使用选择性培养基从银川市某餐厅鱼肉菜肴中培养分离获得蜡样芽胞杆菌SCY分离株,经23S rRNA基因PCR测序鉴定后,通过二代全基因组测序技术分析SCY分离株的基因组特征,进而分别采用免疫组化技术和药敏纸片实验研究SCY分离株的毒性和耐药性。结果 SCY分离株的基因组大小为5.82 Mb,编码基因个数为5 767,编码区总长度占全基因组的85.50%。SCY分离株基因组中共含有11个基因岛、16个CRISPR和5个前噬菌体;其中,SCY编码基因分别在PHI和VFDB毒力因子数据库中注释到了14个和62个毒力基因（Identiy>80,Evalue<0.05）,在CARD耐药数据库中注释到了215个耐药基因（Best Hit evalue<0.05）。小鼠肠道组织切片免疫组化结果表明,炎性因子IL-1β、CASP1和Nlrp3的表达水平发生差异显著性上调。22种细菌抗生素药敏纸片试验结果显示,SCY分离株对氯霉素、克林霉素等高度敏感,对四环素、头孢唑啉、头孢哌酮、氨苄青霉素表现为中介,对青霉素、苯唑西林、哌拉西林、杆菌肽、头孢他啶等10种抗生素表现为耐药,SCY分离株多重耐药情况较为严重。结论 本研究发现的SCY分离株属于肠毒株,携带多种肠毒素毒力基因,且具有典型的多重耐药特征。研究结果为揭示蜡样芽胞杆菌分离株的致病机制提供参考依据。     

辽宁省婴幼儿食品中肠集聚性大肠埃希菌的病原学特征及耐药谱研究

目的 对2018—2020年辽宁省婴幼儿食品中致泻大肠埃希菌开展持续监测,了解和掌握本省内致泻大肠埃希菌的病原学特征、药物敏感性特征,为本省致泻大肠埃希菌流行病学研究奠定坚实基础,为可能导致的食源性疾病合理用药提供依据。方法 采集辽宁省共208份婴幼儿食品,分离肠杆菌科细菌,并进行16S rRNA基因测序分析与生化鉴定。对鉴定得到的大肠埃希菌进行毒力基因检测,收集分离的肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）进一步进行血清学分型和耐药谱研究。结果 16S rRNA基因测序通过对肠杆菌科进行种鉴定,发现与生化结果一致。其中EAEC的检出率较高,且EAEC的毒力基因pic携带率高。毒力基因分型和血清分型具有一致性。共检测出25株EAEC,其中40%菌株（血清型O134:H9）携带毒力基因pic,28%菌株（血清型O3:H2）同时携带毒力基因aggR和astA,16%菌株（血清型O9:H6）携带毒力基因aggR,16%菌株（血清型O62:H7）携带毒力基因astA。78株大肠埃希菌中EAEC毒力基因的携带率为32.1%。25株EAEC为多重耐药株,主要对β内酰胺类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类抗菌药...     

北京市某区2021年5—9月生鲜蔬菜中蜡样芽胞杆菌检出情况和耐药特征分析

目的 对生鲜蔬菜中蜡样芽胞杆菌的分布和耐药特征进行分析。方法 采集北京市顺义区2021年5—9月生鲜蔬菜样本120份,对样本进行蜡样芽胞杆菌平板计数检测、增菌培养及增菌液呕吐毒素基因(ces)、蜡样芽胞杆菌16S r DNA基因实时荧光PCR检测,对分离株进行14种抗生素敏感性检测。结果 生鲜蔬菜中蜡样芽胞杆菌检出率为84.17%(101/120)。根茎类和叶菜类生鲜蔬菜蜡样芽胞杆菌检出率差异有统计学意义(χ²=14.181,P_校正=0.000);超市、农贸市场和农户菜地3类采集地点蜡样芽胞杆菌检出率差异有统计学意义(χ²=11.050,P=0.004),基于样本增菌液的ces检出率差异有统计学意义(P_Fisher=0.001)。12件ces⁺的生鲜蔬菜增菌液检测蜡样芽胞杆菌16S rDNA基因和ces基因Ct值均值分别为19.96和31.80,但均未能分离到ces⁺蜡样芽胞杆菌菌落。蜡样芽胞杆菌分离株对氨苄西林、青霉素、复方磺胺耐药率分别为100%、99...