黄曲霉毒素B1降解菌株的鉴定及降解产物研究

为开发有效降解黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁,AFB₁)的生物菌剂,筛选降解率高的菌株进行分离鉴定,并分析降解产物,以前期筛选到AFB 1降解率高达83.5%的菌株WTX1为研究对象,通过形态学、生理生化特征及菌株16S rRNA基因测序对菌株进行鉴定,通过超高效液相色谱-串联四级杆质谱(ultra-performance liquid chromatography-MS/MS,UPLC-MS/MS)测定菌株各组分降解率,将降解液产物质谱图与软件中标准质谱库比对,分析菌株降解AFB₁产物结构。菌株WTX1被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株降解AFB₁起主要作用的是生长过程产生的次级代谢产物。菌株WTX1降解AFB₁机制是破坏AFB₁的毒性结构即呋喃环二氢双键,香兰素内脂环结构,达到脱毒效果。较目前筛选到降解AFB₁的菌株,菌株WTX1更具有食品安全优势。     

生物技术对黄曲霉毒素B1的脱除及机制研究进展

黄曲霉毒素是危害最大的真菌毒素之一,而黄曲霉毒素B₁(AFB₁)是黄曲霉毒素中毒性最大的一种,具有高毒性、致癌、致畸和致突变的作用,对动物和人类健康造成危害。为了有效脱除AFB₁,综述了近年来研究的具有解毒作用的微生物,介绍了采用生物技术脱除AFB₁的方法,重点探讨了生物脱除AFB₁机制。用于脱除AFB₁的菌株有芽孢杆菌、假单胞菌、乳酸菌、非产毒曲霉等,可采用单菌种发酵、多菌种协同发酵和菌-酶协同作用脱除AFB₁。生物脱除AFB₁机制主要为降解脱除和吸附脱除。可进一步筛选具有高优良能力的菌株以及更深层次地研究微生物脱毒的机制,探索微生物制剂对AFB₁的降解作用。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及有效降解组分初探

黄曲霉毒素B₁(AFB₁)是具有强毒性、强致癌性的一种真菌毒素。为了筛选出AFB₁降解菌,将实验室保藏的真菌菌株与AFB₁共培养,选取降解率最高的菌株,经形态学和ITS rDNA分析确定其种属,分离菌株不同组分(菌悬液、菌体、孢子液、发酵液)后探究其降解AFB₁的有效组分,并将有效组分菌体破碎后作进一步探究。结果表明:培养72 h后的郝克氏青霉MD1菌悬液和未破碎菌体对AFB₁降解率分别为98.15%和28.20%,菌体破碎后对AFB₁的降解效果更好,培养24 h后对AFB₁的降解率为55.40%。因此,郝克氏青霉MD1的菌悬液和菌体内的活性组分能有效降解AFB₁。本研究筛选出的郝克氏青霉MD1扩大了AFB₁降解菌的菌种库,为AFB₁的生物降解提供了一定的参考价值。     

啤酒原辅料中黄曲霉毒素B1的测定及其在酿造过程中的迁移规律研究

黄曲霉毒素（Aflatoxins,AFs）是由黄曲霉和寄生曲霉的某些菌株在其生长后期产生的一类结构相似的次级代谢产物,其基本结构包括二氢呋喃环和香豆素。18种AFs中,又以黄曲霉毒素B₁（Aflatoxin B₁,AFB₁）的毒性和致癌性最强,且在多种粮食和经济作物中广泛存在。啤酒中的AFB₁主要来源于啤酒原辅料。Pietria等的研究表明,约有1.5%左右的原料中的AFB₁最终将进入啤酒,该比例的高低会受到原料配比和酿造工艺     

低温等离子体对黄曲霉毒素B1的降解效能

目的:确定低温等离子体降解黄曲霉毒素B₁（Aflatoxin B₁，AFB₁）最佳工艺条件，并探究其在农产品中应用的可行性。方法:选取低温等离子体不同激发条件（峰值电压、工作频率、作用时间），研究其对溶液中AFB₁的降解效果。通过Center Composite Design（CCD）法进行响应面试验，获取最优降解组合及各因素交互作用机制，并考察此条件下玉米中AFB₁降解效果。结果:当AFB₁浓度为1000 μg/L时，其降解率随峰值电压及作用时间（除90~120 s）的增加，工作频率的下降而极显著升高（P<0.01）。响应面优化后最佳工艺条件为峰值电压160 kV、工作频率50 Hz、作用时间165 s，此时AFB₁降解率为99.62%。此外，将优化后的降解条件在受AFB₁污染的玉米（23.18±0.06 μg/kg）中进行应用，发现180 s处理时间下，其降解率可达39.29%。结论:通过CCD法确定了低温等离子体技术降解AFB₁最优工艺，证实了其在玉米中的降解效果。表明低温等离子体技术在降低谷物黄曲霉毒素污染方面具有巨大潜力。     

黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选及鉴定

该研究以香豆素为唯一碳源,从豆类发酵食品、土壤、动物肠道及其内容物中筛选黄曲霉毒素B1（AFB1）降解菌株;然后通过复筛,从中筛选出AFB1降解能力较好的菌株,并对其降解作用与吸附作用进行区分;最后,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定。结果表明,共筛选得到9株AFB1降解菌株,其中菌株YC2的AFB1降解能力最强,AFB1降解率达到90.7%,并确定菌株YC2通过降解作用去除AFB1。最后,菌株YC2被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。     

湘派卤制品卤汁中黄曲霉毒素产毒菌的筛选鉴定及其产毒能力测定

以湘派卤制品卤汁为研究对象，对其贮存过程中产黄曲霉毒素的微生物(产毒菌)进行筛选鉴定并对产毒能力进行测定。采用平板稀释涂布法和紫外荧光法对湘派卤汁进行产毒菌的初筛；对初筛菌株的ITS序列进行PCR扩增、测序，测序结果经NCBI同源性对比、MEGA6.0软件构建系统发育树进行分子生物学鉴定；应用HPLC-MS/MS检测各产毒菌培养液中黄曲霉毒素(aflatoxin, AFs)含量，确定各产毒菌的产毒能力。经平板稀释涂布法、紫外荧光法和分子生物学共筛选鉴定出5株产毒菌株，其中有4株是黄曲霉(Aspergillus flavus),1株为寄生曲霉(Aspergillus parasiticus);经HPLC-MS/MS法确定4株黄曲霉均不产生AFs,寄生曲霉产生黄曲霉毒素B₁(AFB₁)和黄曲霉毒素G₁(AFG₁)。AFB₁在第3天和第7天的含量分别为6.92、8.08μg/L,AFG₁在第3天和第7天的含量分别为5.80、7.24μg/L;湘派卤汁由于贮存条件...     

共培养体系下米曲霉与产毒黄曲霉的相互影响

研究了在共培养体系中,产毒黄曲霉对米曲霉产蛋白酶、淀粉酶的影响及米曲霉对黄曲霉产黄曲霉毒素B₁（AFB₁）的影响,还分析了米曲霉降解AFB₁的能力。结果发现黄曲霉对米曲霉产蛋白酶和α-淀粉酶有明显的抑制作用,而对β-淀粉酶的分泌无影响,培养10 d后,酸性蛋白酶活性、中性蛋白酶活性、碱性蛋白酶活性和α-淀粉酶活性分别降低了3.1、3.2、4.1和6.9倍;同时发现在整个培养过程中,米曲霉能有效抑制黄曲霉合成AFB₁的能力,抑制率达75～90.91%,而对AFB₁无降解作用。     

黄曲霉毒素B_1降解菌株的筛选鉴定

黄曲霉毒素B_1(AFB_1)具有极强的毒性和致癌性,严重危害人和动物健康。通过富集培养、初筛和复筛从土壤中筛选到能降解黄曲霉毒素的菌株,鉴定降解效率最高菌株并研究其降解特征。结果表明,筛选出多株能降解AFB_1菌株,其中菌株A12降解效率最高,通过形态学、生理生化特征及16S rRNA基因系统进化分析鉴定菌株A12为枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis subsp. InaquosorumA12。研究发现枯草芽孢杆菌A12上清液、菌悬液、胞内液能分别降解87.6%、17.3%和10.8%的AFB_1,表明菌株A12分泌至胞外活性物质主导生物降解作用。菌株A12上清液降解AFB_1的最适反应温度为37℃,最适p H为7.0。将该菌接种到AFB_1污染的花生样品,能显著降低AFB_1的含量。为枯草芽孢杆菌A12应用于AFB_1的生物脱毒奠定了基础。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及发酵条件优化

该研究采用香豆素筛选模型,从酒醅、大曲、榨菜、酸豆角等样品中分离筛选降解黄曲霉素B1（AFB1）菌株,通过形态学观察及分子生物学技术对筛选菌株进行鉴定,并以黄曲霉毒素B1降解率为评价指标,采用单因素及正交试验对筛选菌株的发酵条件进行优化。结果表明,共初筛出23株可利用香豆素菌株;采用高效液相色谱（HPLC）法复筛出1株AFB1高效降解菌,其降解率最高,为86.22%,菌株编号为HB022。菌株HB022被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）,其最优发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH 7.2、接种量5%、发酵时间72 h。在此优化条件下,AFB1的降解率为91.13%。     

微波对花生黄曲霉毒素B1的消减作用及压榨花生油品质的影响

对花生进行微波处理，研究微波对花生中黄曲霉毒素B₁(AFB₁)的降解效果及压榨花生油品质的影响。结果表明：微波温度、微波时间与花生AFB₁降解率均呈正相关关系；Na₂CO₃喷涂协同微波处理，可以明显增强微波对花生AFB₁的降解效果，降解率达85.67%,但降解率会随着AFB₁初始含量先上升再趋于恒定。Na₂CO₃协同微波处理后所得花生油的酸价、过氧化值均符合相关标准要求，且营养品质高、氧化稳定性好。     

烟草赤星病拮抗芽胞杆菌的筛选及培养基优化

以赤星病原菌Alternaria longipes为筛选指示菌,采用平板共培养初筛和发酵上清滤液复筛的方法,筛选了烟草赤星病拮抗芽胞杆菌3株。其中菌株K₁₁的菌体径向生长抑制率（PIRG）为63.64%,发酵上清滤液的PIRG值达67.44%。盆栽试验证明,该菌对烟草赤星病具有良好的拮抗能力。经鉴定菌株K₁₁为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。由单因素实验和正交实验优化得到了K₁₁菌株生物量较高的摇瓶发酵培养基配方：葡萄糖20.0 g/L,豆粕30.0 g/L,K₂HPO₄·3H₂O 1.0 g/L,MgSO₄·7H₂O 0.1 g/L。优化后生防菌株K₁₁的生物量比对照提高6.5倍,生物量高达1.28×10¹⁰ CFU/mL,芽胞形成率在95%以上。     

西藏高原粮油作物曲霉菌污染及菌株产毒力研究

为探明西藏高原粮油作物曲霉菌污染状况及黄曲霉菌产毒能力,连续5年对西藏青稞、小麦、花生3种作物中曲霉菌污染情况进行分析,并对其分离到的黄曲霉菌株开展产毒力研究,结果表明,204份样品中,共分离出15种曲霉菌,曲霉菌污染率呈花生>青稞>小麦。青稞、小麦中曲霉属优势种均为黑曲霉(Aspergillus niger),真菌毒素主要为杂色曲霉毒素和赭曲霉毒素;花生优势种为黄曲霉(A.flavus);仅受黄曲霉毒素污染。来源于不同作物的黄曲霉菌,其产毒类型也有差异,麦类作物产毒菌株以产黄曲霉毒素B₁(AFB₁)、黄曲霉毒素B₂(AFB₂)为主;花生产毒菌株以产AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂为主。     

微生物法针对毒性位点降解黄曲霉毒素B1的研究进展

文章主要探究了黄曲霉毒素B₁(AFB₁)的毒性位点及毒性机理,并对比了微生物法破坏AFB₁毒性位点从而降解AFB₁的优势。重点综述了微生物法中的脱毒酶法对AFB₁的降解机制。同时,对脱毒酶法联合其他方法的复合应用进行展望。     

西北酸菜中吸附黄曲霉毒素B1乳酸菌株的筛选鉴定及稳定性研究

为工业化控制黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁,AFB₁)污染,筛选吸附率高、稳定性好、脱毒后具备食品安全的优势菌株,应用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)技术检测菌株发酵液AFB₁残留量的方法,从35份采集自甘肃不同地域的西北酸菜样品中筛选到1株活菌脱毒率为66.41%、解吸后仍保留脱毒率为53.7%的菌株L34-2。菌株L34-2经形态学、生理生化及16S rRNA基因序列扩增测序,鉴定为布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)。通过磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)洗脱,体外模拟胃液消化,研究菌株-AFB₁复合体稳定性,结果表明,菌株L34-2吸附AFB₁具有较好的稳定性。     

黄曲霉毒素B1 降解菌株的分离鉴定、发酵条件的 优化及活性组分分析

为筛选出一株高效降解黄曲霉毒素B1（AFB1）的菌株，选取土壤为菌株来源，进行富集培养，经过以香豆素为唯一碳源的初筛和添加AFB1的复筛后，对筛选得到的各菌株进行16S rDNA鉴定，比对其测序结果，选取降解AFB1最高的菌株，探究发酵时间、发酵温度、初始pH、接种量、培养基对菌株降解AFB1的影响规律，通过正交试验优化发酵条件，并对降解方式进行初步探索。结果表明：经过初筛和复筛得到7株能够降解AFB1的菌株，经鉴定均为伯克霍尔德菌属，其中Burkholderia sp. D6的AFB1降解率最高；最优发酵条件为以LB培养基为发酵培养基、发酵时间84 h、发酵温度37 ℃、初始pH 7.0、接种量10%，在此条件下Burkholderia sp. D6对AFB1的降解率为（87.91±2.32)%；初步判断降解AFB1的活性组分是蛋白质或者酶。综上，通过筛选得到了一种能够高效降解AFB1的菌株，蛋白质或酶参与了AFB1的降解。     

多功能净化柱-高效液相色谱法同时检测食用油中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A

目的:研究并建立高效液相色谱法同时检测20批食用油中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂和赭曲霉毒素A的定量方法。方法:样品经涡旋、离心提取后,采用多功能净化柱对目标毒素净化富集,采用SHIMADZU Inertsil ODS-C₁₈色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,FLD检测器,以甲醇-0.5%乙酸水为流动相进行梯度洗脱,进样量为10μL,流速为0.8 m L/min,柱温为35℃,改变波长荧光检测并对方法学进行考察。结果:AFB₁在0.25⁴0.6 ng/m L（r=0.9999）,AFG1在0.5⁴0.4 ng/m L（r=0.9997）,AFB₂在0.06¹0.06 ng/m L（r=0.9999）,AFG₂在0.06¹0.08 ng/m L（r=0.9999）,OTA在1.01⁵0.5 ng/m L（r=1.00）范围内呈良好线性关系,5种毒素的加标平均回收率为91.40%¹09.36%。样品检测结果表明,20批食用油样品中有4批样品检测结果呈阳性,均受到黄曲霉毒素G₁、G₂的污染。结论:该方法准确、快速,能够广泛用于食用油中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂和赭曲霉毒素A的定量检测。      

产漆酶食用菌的筛选及食用菌漆酶降解黄曲霉毒素B1的研究进展

每年有大量的谷物被黄曲霉毒素B1(aflatoxin B₁,AFB₁)污染,对人类和牲畜健康造成极大的危害。生物法降解AFB₁具有底物特异性强、反应条件温和等优点,受到社会的广泛认可。在降解谷物中AFB₁时,宜采用食用安全的微生物,以避免引入新的污染物,因此,产漆酶的食用菌是一种较好的选择。基于此,本文从美国国家生物技术信息中心数据库和Uniprot数据库(Unified Protein Database)中筛选出具有漆酶基因序列或氨基酸序列的食用菌,对已报道的能够产漆酶的食用菌进行总结,并概述产漆酶食用菌的实验筛选方法,探讨食用菌漆酶的结构和理化性质,综述食用菌漆酶的作用和食用菌漆酶降解AFB₁的研究进展,以期为食用菌漆酶安全、高效、绿色降解AFB₁提供理论支持。     

ELISA法检测五类食品中黄曲霉毒素B1前处理方法的改进研究

用酶联免疫吸附法（ELISA）检测五类食品（酱油、醋、面粉、大米、食用油）中黄曲霉毒素B₁（AFB₁）含量,关键在于样品的前处理。本文针对五类食品中AFB₁的前处理作了方法学研究。结果表明,改进后的前处理使检测灵敏度达0.1μg/kg,在0.1～10μg/kg之间呈良好线性关系,平均回收率在75%～170%之间。      

常压室温等离子体诱变选育高产TTM P菌株

从新疆伊犁肖尔布拉克酒厂生产的酱香型高温大曲中筛选得1株能代谢四甲基吡嗪（TTMP）的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)R19,以该菌株为出发菌株,采用常压室温等离子体诱变系统（ARTP）进行诱变,根据脱脂奶粉平板初筛、摇瓶发酵复筛,连续传代培养后得到遗传稳定的TTMP产量较高的突变株T451,该菌株摇瓶发酵生产TTMP的产量为1.19 g/L,约为出发菌株产量的4.45倍。