黄粉虫抗菌肽的分离纯化及生物活性研究

本研究以黄粉虫为试材,采用碱性蛋白酶酶解黄粉虫蛋白制备获得了抗菌肽,并对其进行分离纯化,比较了不同组分及纯化后抗菌肽的抑菌活性、热稳定性及分子量。结果表明:大孔吸附树脂对蛋白酶酶解液动态吸附并梯度洗脱后得到5个组分,抑菌试验表明无水乙醇洗脱组分的抑菌活性最强。采用制备型HPLC对无水乙醇洗脱组分进一步纯化,得到两个组分(H-1,H-2),其中组分H-2对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均表现出较强的抑菌活性,且其最小抑菌浓度(MIC)为0.512 mg/m L。热稳定性试验表明,H-2具有较好的热稳定性,121℃加热20 min仍能保持较高活性。液质联用(LC-MS)结果表明,H-2的分子量为756.82u。本研究为黄粉虫抗菌肽的高效分离和纯化提供了科学依据,为黄粉虫抗菌肽在食品防腐中的应用提供了基础数据。     

黄粉虫抗氧化活性肽的分离纯化研究

为制备具有抗氧化活性的黄粉虫生物活性肽,采用双酶水解黄粉虫蛋白粉,对酶解产物进行葡聚糖SephadexG-25 凝胶柱层析和阳阴离子交换柱层析分离纯化,并对其各组分分子量分布及其抗氧化性进行研究,对抗氧化活性最佳的肽段进行氨基酸组成分析。结果显示,纯化得到的抗氧化多肽对羟自由基和超氧阴离子自由基具有很强的清除作用,清除率可分别达到74.20% 和87.32%。     

生姜蛋白酶的分离、纯化及酶学性质研究

从生姜中分离得到具有凝乳活力的生姜蛋白酶,研究了其酶学性质和动力学特性。主要研究结果如下:采用超滤技术分离得到生姜蛋白酶粗酶液,在0⁰.3 mol/L NaCl线性梯度下利用弱阴离子交换树脂将生姜蛋白酶分成具有相同分子质量的A和B两个组分。生姜蛋白酶A和B具有相似的酶学性质和水解k-酪蛋白的亲和性,表明生姜蛋白酶A和B可能是同工酶,可以合并在工业生产中使用。该研究为生姜蛋白酶的工业化应用及姜汁奶的开发提供了重要的理论基础。     

木瓜凝乳蛋白酶及在微生物中表达研究进展

木瓜凝乳蛋白酶(Chymopapain)是存在于木瓜乳汁中的一种半胱氨酶蛋白酶,同时具有凝乳酶和蛋白酶的活性.本文综述了木瓜凝乳蛋白酶的分类、结构、活性及其在微生物中表达的研究进展.     

巴西松子中蛋白酶的分离纯化及酶学性质

在单因素试验基础上,通过正交试验研究pH值、提取时间和料液比3个因素对巴西松子中蛋白酶活力的影响,得出巴西松子中蛋白酶的最佳提取缓冲液为pH9.0的硼酸-硼砂缓冲液、提取时间为60min、料液比为1:8(m/V);采用(NH4)2SO4沉淀、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析分离纯化巴西松子中的一种蛋白酶,结果表明:纯化后蛋白酶比活力提高到了8.61倍,回收率为21.65%。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明:该蛋白酶分子质量为33kD。酶学性质结果表明:该蛋白酶最适pH值为9.0,属碱性蛋白酶;反应的最适温度为50℃;金属离子Mn2+对该蛋白酶活性有强烈的激活作用,而Ca2+、Mg2+和Cu2+对酶活性有抑制作用。     

固定化凝乳蛋白酶生产干酪的应用研究

<正> 在干酪的生产中,乳的凝固是通过犊牛第四胃制取的皱胃酶专一地分解K-酪蛋白,即在K-酪蛋白敏感的苯丙氨酸(105)-蛋氨酸(106)肽键处断裂。乳的凝固分两个步骤进行:第一、是从K-酪蛋白分除亲水性的巨肽(106-109位残基部分);第二、是在Ca++影响下将疏水性的1-105位残基组成部分,与其它不稳定的酪蛋白组分相聚而形成凝固的酪蛋白。     

乳酸菌胞外多糖的分离纯化和结构解析

乳酸菌胞外多糖具有独特的理化性质和生物学活性,对其理化性质和结构进行研究并阐明结构与功能的关系具有重要的意义。本文介绍了乳酸菌胞外多糖的分类及组成,针对目前胞外多糖的分离纯化方法、理化性质测定方法、结构鉴定方法进行了详细描述,并对今后胞外多糖的研究内容和研究方向进行了展望。      

南极磷虾蛋白酶分离纯化及部分性质研究

对在南极磷虾自溶过程中起主要作用的蛋白酶的分离纯化条件和主要生化性质进行了研究。经过30%～70%硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析,Sephacryl S-200 HR凝胶层析后得到电泳纯的蛋白酶,该酶纯化倍数为12.59,产率为43%,分子质量约为28 ku;最适pH和最适温度为pH 8.0和50℃;该酶pH稳定范围为pH 7.0～9.5,并在45℃以下较稳定;苯甲基磺酰氟(PMSF)、大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)、对甲苯磺酰基赖氨酸氯甲基酮(TLCK)对该酶活性有较强的抑制作用。     

黄瓜过氧化物酶的分离纯化及酶学性质

新鲜的黄瓜经匀浆、抽提、硫酸铵沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析后获得电泳纯的过氧化物酶。该酶的比活力、回收率及纯化倍数分别为64 177.67 U/mg、9.58%、61.93。该酶的分子质量为41.15 kD,亚基分子质量为40.21 kD。该酶的最适温度和最适pH值分别为60 ℃和6。在25～45 ℃及pH 5～9的范围内非常的稳定。在测定条件下测得该酶的Km值为53.79 mmol/L。硫氰化钾对该酶活力基本无影响。尿素、K+、Mn2+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Cu2+对该酶都具有激活作用且浓度至50 mmol/L时酶活力分别被激活至112%、127%、113%、128%、139%、199%、348%,然而十二烷基磺酸钠、抗坏血酸和草酸对该酶有强烈的抑制作用;Zn2+、甲醇、乙醇和异丙醇对该酶有一定的抑制作用。     

黄粉虫蛋白质提取及初步纯化研究

以脱脂黄粉虫为原料,通过优化提取条件采用1．0％NaOH溶液,料液比1：15、于50℃下搅拌2h,离心、过滤后采用盐析法沉淀蛋白,并经丙酮脱色、透析脱盐、真空干燥后得到含蛋白质80．1％的浅灰白色蛋白质产品,提取得率为77．8％,初步纯化得率为83．9％。     

羧甲基纤维素固定化胰凝乳蛋白酶的稳定性研究

研究以羧甲基纤维素作为载体,通过接枝后与胰凝乳蛋白酶进行偶联,通过正交实验测得酶固定化特性的最佳方案为:接枝温度50℃,接枝时间10min,酶偶联温度20℃,酶偶联时间4h。所得固定化酶的热稳定性提高5℃,最适pH提高到8～9,具有连续操作性,在2℃贮存放置20d后酶活仍在75%以上。      

韭菜过氧化物酶的分离纯化及性质

经匀浆、抽提、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的韭菜过氧化物酶(POD)。该酶比活力达到14031.41U/mg,纯化倍数为102.96,回收率为10.85%。该酶分子质量约为28.4kD,最适温度40℃、最适pH值为4.6。该酶在20～40℃以及pH 4.0～8.0有较好的稳定性,在最适条件下测得其Km值为18.15mmol/L。低浓度草酸、Zn2+、Mg2+等对该酶有较强激活作用;甲醇、乙醇、异丙醇、SDS、抗坏血酸(AsA)以及Mn2+、Fe3+等对该酶有较强的抑制作用。     

天麻水溶性多糖分离纯化及理化性质研究

本实验研究云南野生天麻（GastrodiaelataBlume）多糖的分离纯化及理化性质,实验结果表明,天麻粗多糖提取的最佳工艺条件为温度50℃、浸提时间3h、料液比1：10（w／v）,乙醇浓度80％。在该条件下天麻粗多糖得率约为9．67％（干重）。天麻水溶性多糖（WPGB）经Sevag法脱蛋白、透析、乙醇沉淀、DEAE．52纤维素层析及SephadexG-100层析分离纯化得到WPGB．A．H和WPGB—A．L,经高效液相色谱仪分析证明,WPGB．A．H为纯品,且得率为0．824％（干重）,经过其理化性质鉴定表明,WPGB．A．H不含蛋白质、核酸、糖醛酸,为非淀粉类多糖,其平均分子质量为28840D。     

低温脂肪酶的分离纯化及酶学性质

苏云金芽胞杆菌CZW001脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、超滤离心、DEAE-纤维素-52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析得到电泳纯的脂肪酶,纯化倍数为75.5倍,活性回收率为37.6%,12%SDS-PAGE电泳估计其相对分子质量约40 000。对纯化后的脂肪酶进行酶性质研究表明:酶的最适作用温度为25℃,对热敏感,60℃处理30 min仅残留30%酶活性;酶的适宜作用pH范围在7～9,最适pH为8;该脂肪酶的水解活性对Ca2+表现明显的依赖性,Al3+、Zn2+和Fe2+对脂肪酶有显著的抑制作用;脂肪酶对醇类有机溶剂的耐受性随碳链增加而减小;脂肪酶对豆油表现出显著的特异性,而蓖麻油抑制脂肪酶水解活力。     

白灵菇菌丝体多糖的分离纯化及理化性质研究

研究白灵菇菌丝体粗多糖的分离纯化技术,并对得到的多糖进行纯度鉴定及理化性质研究。结果表明,白灵菇菌丝体多糖（PNMP）经DEAE-Cellulose52和Sephadex G-200柱层析后得到单一组分PNMPⅢ-a,经分析鉴定,PNMPⅢ-a为不含双糖、糖醛酸和核酸的非淀粉类的均一多糖;其相对分子质量为15213Da。PNMPⅢ-a完全酸水解后,经高效液相色谱分析确定其糖基的组成为葡萄糖（Glc）、鼠李糖（Rha）、木糖（Xyl）和核糖（Nbo）。红外光谱分析表明,PNMPⅢ-a是一种含有氨基、硫酸酯键、β-糖苷键和α-D葡萄糖的蛋白多糖。      

生姜蛋白酶的分离纯化

生姜蛋白酶能够特异地水解P2位置是脯氨酸(Pro)的肽和蛋白质,这种对Pro的特异性使生姜蛋白酶成为一种非常有前途的用于蛋白质测序和蛋白质中稳定结构域识别的工具酶。中国传统食品“姜撞奶”采用姜汁作为凝乳剂,其中的凝乳因子已被证明是生姜蛋白酶。生姜蛋白酶的凝乳性质使之有望成为奶酪生产中小牛皱胃酶的替代品。此外,生姜蛋白酶在工业上还有更广阔的应用前景。本研究针对生姜蛋白酶的特点,制订一套简便有效的纯化方案,为进一步的基础研究和应用研究提供合格的样品酶。经过实验确立了以下纯化方案:将生姜制成丙酮粉,然后用20倍(W/V)0.1mol/L,pH8.0的磷酸缓冲液提取;上清液加硫酸铵至40%饱和度,其间控制pH>7.0,离心弃去沉淀,上清液继续加硫酸铵至80%饱和度,离心,取沉淀;将沉淀先对0.1mol/L的氨水透析2h,然后对蒸馏水透析至无SO42-检出,最后对层析初始缓冲液进行延长透析至内外离子强度相等;上DEAE-纤维素DE-52柱;层析初始缓冲液为0.01mol/L,pH8.0Tris(含0.5mmol/LDTT,0.2mol/LNaCl),0.05～1mol/LNaCl梯度洗脱,柱1.55.0cm,流速0.75cm3/min,收集速度3ml/管,收集酶活峰,得到在SDS-PAGE上表现为一条带的样品C1和C2。     

现代分离纯化技术在天然植物色素中的应用

植物色素是一类天然色素,具有营养价值高、安全性强等特点,但是植物色素的分离纯化技术仍然是制约天然色素开发的主要因素。本文就国内天然色素的分离纯化研究进展进行了综述并总结,为天然植物色素的研制与开发奠定基础。     

鲤鱼组织蛋白酶L的分离纯化与酶学性质研究

对鲤鱼鱼背部白肌中的组织蛋白酶L进行分离纯化并研究了其酶学性质。结果发现,鲤鱼组织蛋白酶L提取液经酸处理、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose F.F.离子交换层析和SephacrylS-100凝胶过滤层析等步骤后得到部分纯化,纯化倍数为16.39。鲤鱼组织蛋白酶L的最适反应温度和pH值分别为40℃和5.0,在20～50℃和pH 4.5～5.5范围内具有较好的稳定性。     

发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

研究分离纯化发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶(cell envelope proteinase,CEP)的方法及其酶学性质。用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.8)悬浮菌体,进行超声波破碎,细胞质量浓度为0.06g/mL,破碎功率330W,工作220次(工作时间3s,间隔时间5s),离心取上清液即为粗酶液。60%硫酸铵沉淀,Sephacryl S-300 HR凝胶层析,Native-PAGE割胶回收纯化发酵乳杆菌的CEP。用纯化的CEP 酶解脱脂乳,酶解液ACE(angiotensin I-converting enzyme)抑制率为50%。SDS-PAGE检测CEP分子质量为32.5kD,最适酶反应温度为41℃,最适酶反应pH值为8.0。Mg2+、Co2+、Ca2+对CEP活性有激活作用;Zn2+、Ni2+、PMSF、EDTA对CEP活性有抑制作用,说明CEP为丝氨酸蛋白酶且酶的活性中心结构的维持与金属离子有关。     

大豆过氧化氢酶的分离纯化及性质研究

新鲜大豆芽经匀浆、磷酸缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的过氧化氢酶。该酶酶活回收率为30.92%,纯化倍数为293.09,酶比活力达到26 322.43 U/mg。该酶全分子质量为234.9 kD,亚基分子质量为57.42 kD;最适pH值为7.2,最适温度为30 ℃,在pH 4.0～10.6及25～35 ℃范围内有较好的稳定性;在30 ℃、pH 7.2条件下测得该酶对过氧化氢的Km值为31.82 mmol/L;十二烷基硫酸钠、草酸、Ag+、Cu2+对该酶有强烈的抑制作用,Pb2+对该酶有双重作用,低浓度时有激活作用而高浓度时抑制酶活性。